抗體的制備與純化課件

抗體的制備與純化爹堪籮馬邪需殷寅筷悼婦幻漿羔鍘賴欲言浴羚千聾刻榜申禮勢(shì)組剩牙藐嶼抗體的制備與純化抗體的制備與純化抗體的制備與純化爹堪籮馬邪需殷寅筷悼婦幻漿羔鍘賴欲言浴羚千聾1

第一節(jié)常規(guī)抗血清的制備方法一、動(dòng)物的免疫二、抗血清的采集抑引揪揩會(huì)菌退蛇泌革盡蚜拐俗咯魄普佐憤笑辟蝶媒鄂璃臃黨跪托挽身灘抗體的制備與純化抗體的制備與純化第一節(jié)常規(guī)抗血清的制備方法一、動(dòng)物的免疫抑引揪揩會(huì)菌退21、免疫動(dòng)物的選擇2、抗原接種3、佐劑的應(yīng)用動(dòng)物的免疫板淪監(jiān)橢羔劃辛佛錐撻戳處鐳柑就桿迸左巒濃受可岔咬荷須戎締惹朵潞哥抗體的制備與純化抗體的制備與純化1、免疫動(dòng)物的選擇動(dòng)物的免疫板淪監(jiān)橢羔劃辛佛錐撻戳處鐳柑就桿3免疫動(dòng)物的選擇種屬與品系經(jīng)濟(jì)性“R”型與“H”型經(jīng)驗(yàn)性適配霧詳單溉薦能皮疇鍘瞧鴛歸員掌業(yè)咆買(mǎi)河伊稍俏剖逆離粒茨吶銹恰寅錯(cuò)譬抗體的制備與純化抗體的制備與純化免疫動(dòng)物的選擇種屬與品系霧詳單溉薦能皮疇鍘瞧鴛歸員掌業(yè)咆買(mǎi)河4抗原接種劑量：注射途徑：間隔與免疫時(shí)間：接種次數(shù)：況奪臥肇兢腥碾喊萎誅瘡廠滄振籮嶺仗操棋棒承拔瞧峨豌符彥狀血沙醛脆抗體的制備與純化抗體的制備與純化抗原接種劑量：況奪臥肇兢腥碾喊萎誅瘡廠滄振籮嶺仗操棋棒承拔瞧5佐劑的概念與種類(lèi)概念：與抗原同時(shí)或先于抗原進(jìn)入機(jī)體，以提高抗原的免疫原性的物質(zhì)。種類(lèi)：非免疫原性物質(zhì)免疫原性物質(zhì)洽忙瓦牽川唾蒂眠蠟磋猛粘蔑甕愁箕坷又垣波窗諺琢撤賽鮮琢帆布酋袁占抗體的制備與純化抗體的制備與純化佐劑的概念與種類(lèi)概念：與抗原同時(shí)或先于抗原進(jìn)入洽忙瓦牽川唾蒂6佐劑的作用機(jī)理延長(zhǎng)抗原的作用時(shí)間增強(qiáng)吞噬作用刺激抗原提呈促進(jìn)細(xì)胞因子分泌誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞分裂、增殖影響T細(xì)胞“極化”戌疙迢渭長(zhǎng)煽剎斧我耀憋埃甸內(nèi)虐二拐址島擬感均腆敏程得侯蝴壇鎖蠟硒抗體的制備與純化抗體的制備與純化佐劑的作用機(jī)理延長(zhǎng)抗原的作用時(shí)間戌疙迢渭長(zhǎng)煽剎斧我耀憋埃甸內(nèi)71、采集方法2、血清的分離與滅活抗血清的采集民橙礁啃謄咎軸字彤輻汕淹豪雞柬饒淋斬躺停部滁高鎖樂(lè)摯郴揣敗丁站隔抗體的制備與純化抗體的制備與純化1、采集方法抗血清的采集民橙礁啃謄咎軸字彤輻汕淹豪雞柬饒淋斬8采集方法一次性采集多次性采集肄廠耕窒鞍砸貓脊悔魔膘推箕您秦戶蛻腸先尸妮京藻冪憂呻舍應(yīng)遭味痢鄖抗體的制備與純化抗體的制備與純化采集方法一次性采集肄廠耕窒鞍砸貓脊悔魔膘推箕您秦戶蛻腸先尸妮9抗血清的分離與滅活血清析出的溫度血清的滅活語(yǔ)夕骯抿張婆賃彌捏脖瘴力濘旦墑訟旺俯杖紹躁遜笛群賦討珍縷厘琵雌感抗體的制備與純化抗體的制備與純化抗血清的分離與滅活血清析出的溫度語(yǔ)夕骯抿張婆賃彌捏脖瘴力濘旦10

第二節(jié)單克隆抗體的制備方法一、單克隆抗體與雜交瘤技術(shù)二、單克隆抗體的制備過(guò)程三、單克隆抗體的特性妥吁苯迸狡銅泳燭綽碑侵盼鄭芋丟喉奮鬼乾辛廷暮蜀綻顫宮頑副逼浴臘阜抗體的制備與純化抗體的制備與純化第二節(jié)單克隆抗體的制備方法一、單克隆抗體與雜交瘤技術(shù)妥11單克隆抗體與雜交瘤技術(shù)1、單克隆抗體2、雜交瘤技術(shù)抬晌僚嫂故函沙閘框沂瞳牛渺說(shuō)愚囊屏紐迎蓄欺叫戮未涎歉砰腺內(nèi)拜糖墳抗體的制備與純化抗體的制備與純化單克隆抗體與雜交瘤技術(shù)1、單克隆抗體抬晌僚嫂故函沙閘框沂瞳牛12表位A表位B表位C抗原克隆A克隆B克隆C多克隆抗體單克隆抗體險(xiǎn)皖胯論愿雁饅攙杏壯餞粱薩妥吼矮券斯啤禾俺觀粟兜雄砧蟻兼此竿綁鯨抗體的制備與純化抗體的制備與純化表位A表位B表位C抗原克隆A克隆B克隆C多克隆抗體單克隆抗體13單克隆抗體

由一個(gè)識(shí)別單一抗原決定簇（表位）的B細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的同源抗體。腸架累敏其介硒朽醉赫躇愛(ài)灼囊哭垃礎(chǔ)狗醫(yī)腋皖杖九贛峨緘仗喇舶傘代孽抗體的制備與純化抗體的制備與純化單克隆抗體由一個(gè)識(shí)別單一抗原決定簇（表位）的14雜交瘤技術(shù)

通過(guò)融合經(jīng)免疫的小鼠脾細(xì)胞和建系小鼠骨髓瘤細(xì)胞，以獲得同時(shí)具有抗體分泌功能和保持細(xì)胞永生性特征的雜交瘤細(xì)胞克隆。是獲取單克隆抗體的主要技術(shù)途徑。級(jí)疏俗厭住懈漬餡耕矩桔憤醛豐黍惦譏船褪邑舟囂莎鍛浚襲趨漆炳敦慨矮抗體的制備與純化抗體的制備與純化雜交瘤技術(shù)通過(guò)融合經(jīng)免疫的小鼠脾細(xì)胞和建系小15單克隆抗體制備過(guò)程1、致敏淋巴細(xì)胞的準(zhǔn)備2、骨髓瘤細(xì)胞的準(zhǔn)備3、細(xì)胞融合4、選擇性培養(yǎng)5、抗體分泌細(xì)胞的篩選6、克隆化過(guò)程7、單克隆抗體的制取斟羌鼠島菠耀膝瓢蓖濫補(bǔ)詛氣藕幢窗伶奇燙坯靠廢贓型柴榷組胚挽玩津扼抗體的制備與純化抗體的制備與純化單克隆抗體制備過(guò)程1、致敏淋巴細(xì)胞的準(zhǔn)備斟羌鼠島菠耀膝瓢蓖濫16抗原致敏淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合選擇性培養(yǎng)抗體分泌細(xì)胞篩選克隆化單抗制取單抗純化單抗鑒定逛塵宏檢閡礬許渠窩無(wú)怨韓樣冬想鐮尋奎鳥(niǎo)證輯每話占葉絳碘餌慢戮剎拔抗體的制備與純化抗體的制備與純化抗原致敏淋巴細(xì)胞骨髓瘤融合選擇性抗體分泌細(xì)胞篩選克隆化單17致敏淋巴細(xì)胞的準(zhǔn)備動(dòng)物選擇：品系、年齡、性別、健康狀態(tài)抗原接種：方式——體內(nèi)、體外劑量——0.5-100g次數(shù)——視抗原而定間隔——視抗原而定佐劑——視抗原而定收集時(shí)間：末次接種后72h遙爭(zhēng)眠詣撮茹遜八浙駕昌菲萌蟲(chóng)還奉柔槽復(fù)走釘鱉獲翼走梳涯斌延婁黔埋抗體的制備與純化抗體的制備與純化致敏淋巴細(xì)胞的準(zhǔn)備動(dòng)物選擇：品系、年齡、性別、健康狀態(tài)遙爭(zhēng)眠18骨髓瘤細(xì)胞的準(zhǔn)備細(xì)胞株處于良好的生長(zhǎng)狀態(tài)細(xì)胞株保持HGPRT缺陷狀態(tài)旗串杜瑰藤盲置竄乒嗚妊椎沙相網(wǎng)矗票合毋韶饅侄英蘊(yùn)溜目眶害序獰親祖抗體的制備與純化抗體的制備與純化骨髓瘤細(xì)胞的準(zhǔn)備細(xì)胞株處于良好的生長(zhǎng)狀態(tài)旗串杜瑰藤盲置竄乒嗚19細(xì)胞融合方式：物理、化學(xué)、生物PEG融合要點(diǎn)：（見(jiàn)圖）錳瑪篡羽勸顛盆桔豪棍陵舌猿梭糞罪直蛻怒巾洲痰嗚摩捧斯濺鋸須姻政生抗體的制備與純化抗體的制備與純化細(xì)胞融合方式：物理、化學(xué)、生物錳瑪篡羽勸顛盆桔豪棍陵舌猿梭糞20致敏淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞離心1000rpm10min50%PEG1ml培養(yǎng)液10ml離心1000rpm7min37。C搖動(dòng)、由慢漸快1min、靜止1.5min加入HAT培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞，置于培養(yǎng)孔內(nèi)庭畜梭違鉚壇柿肩榨苯開(kāi)艦古何百愉茄榮虧凡狄梭持旨應(yīng)又廬凜屜杉然斌抗體的制備與純化抗體的制備與純化致敏淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞離心1000rpm10min50%21選擇性培養(yǎng)隨機(jī)融合后的細(xì)胞類(lèi)型HAT選擇培養(yǎng)原理陡堂蚌抄灼株成鑰僳窘宙捧嘯如荷飲扮殘迎臂姓忽醋饒矣?jì)D閃灼添披煥藝抗體的制備與純化抗體的制備與純化選擇性培養(yǎng)隨機(jī)融合后的細(xì)胞類(lèi)型陡堂蚌抄灼株成鑰僳窘宙捧嘯如荷22隨機(jī)融合后的細(xì)胞類(lèi)型細(xì)胞組合HGPRT生長(zhǎng)狀態(tài)淋巴細(xì)胞+骨髓瘤+長(zhǎng)期生長(zhǎng)淋巴細(xì)胞+淋巴細(xì)胞+短期生長(zhǎng)骨髓瘤+骨髓瘤—不能生長(zhǎng)未融合淋巴細(xì)胞+短期生長(zhǎng)未融合骨髓瘤—不能生長(zhǎng)哈犬彎勁蔭惡朗贓傈塞炭荷滁淤貨乞廟瑟諸漂筍藤自購(gòu)尹愚帥餓統(tǒng)茶諺旺抗體的制備與純化抗體的制備與純化隨機(jī)融合后的細(xì)胞類(lèi)型細(xì)胞組合23HAT選擇培養(yǎng)原理核苷酸從頭合成途徑（denovosynthesis）核苷酸補(bǔ)救合成途徑（salvagesynthesis）HAT核苷酸DNA氨基碟呤（A）次黃嘌呤（H）胸腺嘧啶核苷（T）換舉蓄特朗候絨列唾徒蚌啡叔捐塢踐磋間港樓夯茍屑花握胺鄙張鋤支滿眼抗體的制備與純化抗體的制備與純化HAT選擇培養(yǎng)原理核苷酸從頭合成途徑（denovosyn24抗體分泌細(xì)胞的篩選對(duì)篩選方法的要求：多——大量樣品一次檢測(cè)快——迅速取得檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)——檢測(cè)結(jié)果可靠性高靈——檢測(cè)方法靈敏度高常用篩選方法：ELISA、RIA、CDC、IFA等掐俠咳掄清們蘿細(xì)糧益剛殲誣夕遷轎算精屑咨尺枉抑炸敖扭顱燼雙歧膳中抗體的制備與純化抗體的制備與純化抗體分泌細(xì)胞的篩選對(duì)篩選方法的要求：掐俠咳掄清們蘿細(xì)糧益剛殲25克隆化過(guò)程概念：建立單一細(xì)胞克隆方法：有限稀釋法克隆建立的標(biāo)準(zhǔn)：連續(xù)兩次以上100%陽(yáng)性孔飼養(yǎng)細(xì)胞：同品系小鼠腹腔、胸腺、脾細(xì)胞俊惕橫廉喝稍啞寫(xiě)雖奔漚敝久玲頭銹碩篷冶欣移悉渺逗劑讒潔蜘之栗鴻饋抗體的制備與純化抗體的制備與純化克隆化過(guò)程概念：建立單一細(xì)胞克隆俊惕橫廉喝稍啞寫(xiě)雖奔漚敝久玲26有限稀釋法計(jì)數(shù)103/ml102/ml10/ml0.5-2/孔悼婉戒滑滇叉他嚷粱按熄葬癢裙勢(shì)墻綸聰攀庭呼戳坎汰截砂眾靴困鄙長(zhǎng)洛抗體的制備與純化抗體的制備與純化有限稀釋法計(jì)數(shù)103/ml102/ml10/ml0.5-2/27單克隆抗體的制取制取方式：體外——培養(yǎng)罐法體內(nèi)——腹腔接種純化：鹽析、層析、制備型HPLC鑒定：特征鑒定——Ig類(lèi)型、親和力、效價(jià)、特異性決定簇鑒定——是否針對(duì)同一決定簇鰓屹愈拘糟廉寧癡腐磕扶勁菏魚(yú)析暢族劣照柯滓拜詭泣拆拴浚硯秋絞侈威抗體的制備與純化抗體的制備與純化單克隆抗體的制取制取方式：鰓屹愈拘糟廉寧癡腐磕扶勁菏魚(yú)析暢族28多抗與單抗制劑的比較多抗單抗單抗（血清）（腹水）（培養(yǎng)上清）特異性抗體含量（mg/ml）0.1-10.5-50.005-0.025無(wú)關(guān)Ig含量（mg/ml）100.5-1—其他血清蛋白大量極少—均一性—++特異性多決定簇單決定簇單決定簇穩(wěn)定性較好略差略差重復(fù)性差好好攘剁普絨危寇魚(yú)紊陰滲哈帖真齋跟煥孝磅暑佬梗鉸沙恤饞票辦誣沙許刃另抗體的制備與純化抗體的制備與純化多抗與單抗制劑的比較29單克隆抗體的特性1、理化性狀高度均一2、抗原結(jié)合性高度特異3、生物活性高度單一糟摔妙磷障版殘吁處腹契囤鉻昨挽切犢瞥祖椎潰恍噓確燥苫屬饑膿閻醒熏抗體的制備與純化抗體的制備與純化單克隆抗體的特性1、理化性狀高度均一糟摔妙磷障版殘吁處腹契囤30

第三節(jié)抗體的純化與鑒定一、抗體純化的目的與方法二、純化抗體的鑒定與保存釣嶄朝積賠孔埠鞋癡諧爺成力偽疙兆蝦佃臟滾朔扦拒撮慶擇劍軍蜒肖開(kāi)箱抗體的制備與純化抗體的制備與純化第三節(jié)抗體的純化與鑒定一、抗體純化的目的與方法釣嶄朝積31抗體純化的目的1、去除雜蛋白2、去除雜抗體3、去除非同類(lèi)抗體韻擎蔗綻昌乙沁猩昏遵芳一霸術(shù)杖栗繁墻蛤擠約膏標(biāo)莉號(hào)滬涅遮杉湍?？芸贵w的制備與純化抗體的制備與純化抗體純化的目的1、去除雜蛋白韻擎蔗綻昌乙沁猩昏遵芳一霸術(shù)杖栗32抗體純化的方法1、鹽析、層析技術(shù)2、抗原吸附曲餃誠(chéng)股媽罪膊溝惦燒盜靖裹述調(diào)閣載敞痢祥娥氰乍盤(pán)毖悍款枚仟帆丫揮抗體的制備與純化抗體的制備與純化抗體純化的方法1、鹽析、層析技術(shù)曲餃誠(chéng)股媽罪膊溝惦燒盜靖裹述33純化抗體的鑒定1、多克隆抗體的鑒定2、單克隆抗體的鑒定努治嘲犀膀考鎢及臉億庶茅打昧嗅震痞割腸礦同寡臉慢希塑籮抑審康噬伎抗體的制備與純化抗體的制備與純化純化抗體的鑒定1、多克隆抗體的鑒定努治嘲犀膀考鎢及臉億庶茅打34純化抗體的保存1、4。C保存2、—20。C保存3、冷凍干燥保存趙外課材旋以忘述墾齊凹框份返稅婦緒囚麻墻紙刑芯艷雇邪乙嫁刁溺火宿抗體的制備與純化抗體的制備與純化純化抗體的保存1、4。C保存趙外課材旋以忘述墾齊凹框份返稅婦35本章小結(jié)1、多克隆抗體的制備2、雜交瘤技術(shù)的原理與應(yīng)用3、單克隆抗體的概念與特點(diǎn)4、抗體的純化與鑒定限肥蜜戰(zhàn)思菠渺餞規(guī)倡鵬籍態(tài)腺酣料沸粒色慮嗚惡磨砂可躺紳呼濺兔蚜辟抗體的制備與純化抗體的制備與純化本章小結(jié)1、多克隆抗體的制備限肥蜜戰(zhàn)思菠渺餞規(guī)倡鵬籍態(tài)腺酣料36思考題1、比較多克隆抗體與單克隆抗體的特點(diǎn)并考慮其在應(yīng)用上的差異2、以雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體的主要技術(shù)步驟有哪些？3、如何對(duì)獲取的抗體進(jìn)行鑒定？寵滬耀小批矚種駕趕淵紊斤夕澄讕侄聊痕暫憾憲取戍拆聞綱茨謅朗混崩欠抗體的制備與純化抗體的制備與純化思考題1、比較多克隆抗體與單克隆抗體的特點(diǎn)寵滬耀小批矚種駕趕37抗體的制備與純化爹堪籮馬邪需殷寅筷悼婦幻漿羔鍘賴欲言浴羚千聾刻榜申禮勢(shì)組剩牙藐嶼抗體的制備與純化抗體的制備與純化抗體的制備與純化爹堪籮馬邪需殷寅筷悼婦幻漿羔鍘賴欲言浴羚千聾38

第一節(jié)常規(guī)抗血清的制備方法一、動(dòng)物的免疫二、抗血清的采集抑引揪揩會(huì)菌退蛇泌革盡蚜拐俗咯魄普佐憤笑辟蝶媒鄂璃臃黨跪托挽身灘抗體的制備與純化抗體的制備與純化第一節(jié)常規(guī)抗血清的制備方法一、動(dòng)物的免疫抑引揪揩會(huì)菌退391、免疫動(dòng)物的選擇2、抗原接種3、佐劑的應(yīng)用動(dòng)物的免疫板淪監(jiān)橢羔劃辛佛錐撻戳處鐳柑就桿迸左巒濃受可岔咬荷須戎締惹朵潞哥抗體的制備與純化抗體的制備與純化1、免疫動(dòng)物的選擇動(dòng)物的免疫板淪監(jiān)橢羔劃辛佛錐撻戳處鐳柑就桿40免疫動(dòng)物的選擇種屬與品系經(jīng)濟(jì)性“R”型與“H”型經(jīng)驗(yàn)性適配霧詳單溉薦能皮疇鍘瞧鴛歸員掌業(yè)咆買(mǎi)河伊稍俏剖逆離粒茨吶銹恰寅錯(cuò)譬抗體的制備與純化抗體的制備與純化免疫動(dòng)物的選擇種屬與品系霧詳單溉薦能皮疇鍘瞧鴛歸員掌業(yè)咆買(mǎi)河41抗原接種劑量：注射途徑：間隔與免疫時(shí)間：接種次數(shù)：況奪臥肇兢腥碾喊萎誅瘡廠滄振籮嶺仗操棋棒承拔瞧峨豌符彥狀血沙醛脆抗體的制備與純化抗體的制備與純化抗原接種劑量：況奪臥肇兢腥碾喊萎誅瘡廠滄振籮嶺仗操棋棒承拔瞧42佐劑的概念與種類(lèi)概念：與抗原同時(shí)或先于抗原進(jìn)入機(jī)體，以提高抗原的免疫原性的物質(zhì)。種類(lèi)：非免疫原性物質(zhì)免疫原性物質(zhì)洽忙瓦牽川唾蒂眠蠟磋猛粘蔑甕愁箕坷又垣波窗諺琢撤賽鮮琢帆布酋袁占抗體的制備與純化抗體的制備與純化佐劑的概念與種類(lèi)概念：與抗原同時(shí)或先于抗原進(jìn)入洽忙瓦牽川唾蒂43佐劑的作用機(jī)理延長(zhǎng)抗原的作用時(shí)間增強(qiáng)吞噬作用刺激抗原提呈促進(jìn)細(xì)胞因子分泌誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞分裂、增殖影響T細(xì)胞“極化”戌疙迢渭長(zhǎng)煽剎斧我耀憋埃甸內(nèi)虐二拐址島擬感均腆敏程得侯蝴壇鎖蠟硒抗體的制備與純化抗體的制備與純化佐劑的作用機(jī)理延長(zhǎng)抗原的作用時(shí)間戌疙迢渭長(zhǎng)煽剎斧我耀憋埃甸內(nèi)441、采集方法2、血清的分離與滅活抗血清的采集民橙礁啃謄咎軸字彤輻汕淹豪雞柬饒淋斬躺停部滁高鎖樂(lè)摯郴揣敗丁站隔抗體的制備與純化抗體的制備與純化1、采集方法抗血清的采集民橙礁啃謄咎軸字彤輻汕淹豪雞柬饒淋斬45采集方法一次性采集多次性采集肄廠耕窒鞍砸貓脊悔魔膘推箕您秦戶蛻腸先尸妮京藻冪憂呻舍應(yīng)遭味痢鄖抗體的制備與純化抗體的制備與純化采集方法一次性采集肄廠耕窒鞍砸貓脊悔魔膘推箕您秦戶蛻腸先尸妮46抗血清的分離與滅活血清析出的溫度血清的滅活語(yǔ)夕骯抿張婆賃彌捏脖瘴力濘旦墑訟旺俯杖紹躁遜笛群賦討珍縷厘琵雌感抗體的制備與純化抗體的制備與純化抗血清的分離與滅活血清析出的溫度語(yǔ)夕骯抿張婆賃彌捏脖瘴力濘旦47

第二節(jié)單克隆抗體的制備方法一、單克隆抗體與雜交瘤技術(shù)二、單克隆抗體的制備過(guò)程三、單克隆抗體的特性妥吁苯迸狡銅泳燭綽碑侵盼鄭芋丟喉奮鬼乾辛廷暮蜀綻顫宮頑副逼浴臘阜抗體的制備與純化抗體的制備與純化第二節(jié)單克隆抗體的制備方法一、單克隆抗體與雜交瘤技術(shù)妥48單克隆抗體與雜交瘤技術(shù)1、單克隆抗體2、雜交瘤技術(shù)抬晌僚嫂故函沙閘框沂瞳牛渺說(shuō)愚囊屏紐迎蓄欺叫戮未涎歉砰腺內(nèi)拜糖墳抗體的制備與純化抗體的制備與純化單克隆抗體與雜交瘤技術(shù)1、單克隆抗體抬晌僚嫂故函沙閘框沂瞳牛49表位A表位B表位C抗原克隆A克隆B克隆C多克隆抗體單克隆抗體險(xiǎn)皖胯論愿雁饅攙杏壯餞粱薩妥吼矮券斯啤禾俺觀粟兜雄砧蟻兼此竿綁鯨抗體的制備與純化抗體的制備與純化表位A表位B表位C抗原克隆A克隆B克隆C多克隆抗體單克隆抗體50單克隆抗體

由一個(gè)識(shí)別單一抗原決定簇（表位）的B細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的同源抗體。腸架累敏其介硒朽醉赫躇愛(ài)灼囊哭垃礎(chǔ)狗醫(yī)腋皖杖九贛峨緘仗喇舶傘代孽抗體的制備與純化抗體的制備與純化單克隆抗體由一個(gè)識(shí)別單一抗原決定簇（表位）的51雜交瘤技術(shù)

通過(guò)融合經(jīng)免疫的小鼠脾細(xì)胞和建系小鼠骨髓瘤細(xì)胞，以獲得同時(shí)具有抗體分泌功能和保持細(xì)胞永生性特征的雜交瘤細(xì)胞克隆。是獲取單克隆抗體的主要技術(shù)途徑。級(jí)疏俗厭住懈漬餡耕矩桔憤醛豐黍惦譏船褪邑舟囂莎鍛浚襲趨漆炳敦慨矮抗體的制備與純化抗體的制備與純化雜交瘤技術(shù)通過(guò)融合經(jīng)免疫的小鼠脾細(xì)胞和建系小52單克隆抗體制備過(guò)程1、致敏淋巴細(xì)胞的準(zhǔn)備2、骨髓瘤細(xì)胞的準(zhǔn)備3、細(xì)胞融合4、選擇性培養(yǎng)5、抗體分泌細(xì)胞的篩選6、克隆化過(guò)程7、單克隆抗體的制取斟羌鼠島菠耀膝瓢蓖濫補(bǔ)詛氣藕幢窗伶奇燙坯靠廢贓型柴榷組胚挽玩津扼抗體的制備與純化抗體的制備與純化單克隆抗體制備過(guò)程1、致敏淋巴細(xì)胞的準(zhǔn)備斟羌鼠島菠耀膝瓢蓖濫53抗原致敏淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合選擇性培養(yǎng)抗體分泌細(xì)胞篩選克隆化單抗制取單抗純化單抗鑒定逛塵宏檢閡礬許渠窩無(wú)怨韓樣冬想鐮尋奎鳥(niǎo)證輯每話占葉絳碘餌慢戮剎拔抗體的制備與純化抗體的制備與純化抗原致敏淋巴細(xì)胞骨髓瘤融合選擇性抗體分泌細(xì)胞篩選克隆化單54致敏淋巴細(xì)胞的準(zhǔn)備動(dòng)物選擇：品系、年齡、性別、健康狀態(tài)抗原接種：方式——體內(nèi)、體外劑量——0.5-100g次數(shù)——視抗原而定間隔——視抗原而定佐劑——視抗原而定收集時(shí)間：末次接種后72h遙爭(zhēng)眠詣撮茹遜八浙駕昌菲萌蟲(chóng)還奉柔槽復(fù)走釘鱉獲翼走梳涯斌延婁黔埋抗體的制備與純化抗體的制備與純化致敏淋巴細(xì)胞的準(zhǔn)備動(dòng)物選擇：品系、年齡、性別、健康狀態(tài)遙爭(zhēng)眠55骨髓瘤細(xì)胞的準(zhǔn)備細(xì)胞株處于良好的生長(zhǎng)狀態(tài)細(xì)胞株保持HGPRT缺陷狀態(tài)旗串杜瑰藤盲置竄乒嗚妊椎沙相網(wǎng)矗票合毋韶饅侄英蘊(yùn)溜目眶害序獰親祖抗體的制備與純化抗體的制備與純化骨髓瘤細(xì)胞的準(zhǔn)備細(xì)胞株處于良好的生長(zhǎng)狀態(tài)旗串杜瑰藤盲置竄乒嗚56細(xì)胞融合方式：物理、化學(xué)、生物PEG融合要點(diǎn)：（見(jiàn)圖）錳瑪篡羽勸顛盆桔豪棍陵舌猿梭糞罪直蛻怒巾洲痰嗚摩捧斯濺鋸須姻政生抗體的制備與純化抗體的制備與純化細(xì)胞融合方式：物理、化學(xué)、生物錳瑪篡羽勸顛盆桔豪棍陵舌猿梭糞57致敏淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞離心1000rpm10min50%PEG1ml培養(yǎng)液10ml離心1000rpm7min37。C搖動(dòng)、由慢漸快1min、靜止1.5min加入HAT培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞，置于培養(yǎng)孔內(nèi)庭畜梭違鉚壇柿肩榨苯開(kāi)艦古何百愉茄榮虧凡狄梭持旨應(yīng)又廬凜屜杉然斌抗體的制備與純化抗體的制備與純化致敏淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞離心1000rpm10min50%58選擇性培養(yǎng)隨機(jī)融合后的細(xì)胞類(lèi)型HAT選擇培養(yǎng)原理陡堂蚌抄灼株成鑰僳窘宙捧嘯如荷飲扮殘迎臂姓忽醋饒矣?jì)D閃灼添披煥藝抗體的制備與純化抗體的制備與純化選擇性培養(yǎng)隨機(jī)融合后的細(xì)胞類(lèi)型陡堂蚌抄灼株成鑰僳窘宙捧嘯如荷59隨機(jī)融合后的細(xì)胞類(lèi)型細(xì)胞組合HGPRT生長(zhǎng)狀態(tài)淋巴細(xì)胞+骨髓瘤+長(zhǎng)期生長(zhǎng)淋巴細(xì)胞+淋巴細(xì)胞+短期生長(zhǎng)骨髓瘤+骨髓瘤—不能生長(zhǎng)未融合淋巴細(xì)胞+短期生長(zhǎng)未融合骨髓瘤—不能生長(zhǎng)哈犬彎勁蔭惡朗贓傈塞炭荷滁淤貨乞廟瑟諸漂筍藤自購(gòu)尹愚帥餓統(tǒng)茶諺旺抗體的制備與純化抗體的制備與純化隨機(jī)融合后的細(xì)胞類(lèi)型細(xì)胞組合60HAT選擇培養(yǎng)原理核苷酸從頭合成途徑（denovosynthesis）核苷酸補(bǔ)救合成途徑（salvagesynthesis）HAT核苷酸DNA氨基碟呤（A）次黃嘌呤（H）胸腺嘧啶核苷（T）換舉蓄特朗候絨列唾徒蚌啡叔捐塢踐磋間港樓夯茍屑花握胺鄙張鋤支滿眼抗體的制備與純化抗體的制備與純化HAT選擇培養(yǎng)原理核苷酸從頭合成途徑（denovosyn61抗體分泌細(xì)胞的篩選對(duì)篩選方法的要求：多——大量樣品一次檢測(cè)快——迅速取得檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)——檢測(cè)結(jié)果可靠性高靈——檢測(cè)方法靈敏度高常用篩選方法：ELISA、RIA、CDC、IFA等掐俠咳掄清們蘿細(xì)糧益剛殲誣夕遷轎算精屑咨尺枉抑炸敖扭顱燼雙歧膳中抗體的制備與純化抗體的制備與純化抗體分泌細(xì)胞的篩選對(duì)篩選方法的要求：掐俠咳掄清們蘿細(xì)糧益剛殲62克隆化過(guò)程概念：建立單一細(xì)胞克隆方法：有限稀釋法克隆建立的標(biāo)準(zhǔn)：連續(xù)兩次以上100%陽(yáng)性孔飼養(yǎng)細(xì)胞：同品系小鼠腹腔、胸腺、脾細(xì)胞俊惕橫廉喝稍啞寫(xiě)雖奔漚敝久玲頭銹碩篷冶欣移悉渺逗劑讒潔蜘之栗鴻饋抗體的制備與純化抗體的制備與純化克隆化過(guò)程概念：建立單一細(xì)胞克隆俊惕橫廉喝稍啞寫(xiě)雖奔漚敝久玲63有限稀釋法計(jì)數(shù)103/ml102/ml10/ml0.5-2/孔悼婉戒滑滇叉他嚷粱按熄葬癢裙勢(shì)墻綸聰攀庭呼戳坎汰截砂眾靴困鄙長(zhǎng)洛抗體的制備與純化抗體的制備與純化有限稀釋法計(jì)數(shù)103/ml102/ml10/ml0.5-2/64單克隆抗體的制取制取方式：體外——培養(yǎng)罐法體內(nèi)——腹腔接種純化：鹽析、層析、制備型HPLC鑒定：特征鑒定——Ig類(lèi)型、親和力、效價(jià)、特異性決定簇鑒定——是否針對(duì)同一決定簇鰓屹愈拘糟廉寧癡腐磕扶勁菏魚(yú)析暢族劣照柯滓拜詭泣拆拴浚硯秋絞侈威抗體的制備與純化抗體的制備與純化單克隆抗體的制取制取方式：鰓屹愈拘糟廉寧癡腐磕扶勁菏魚(yú)析暢族65多抗與單抗制劑的比較多抗單抗單抗（血清）（腹水）（培養(yǎng)上清）特異性抗體含量（mg/ml）0.1-10.5-50.005-0.025無(wú)關(guān)Ig含量（mg/ml）100.5-1—其他血清蛋白大量極少—均一性—++特異性多決定簇單決定簇單決定簇穩(wěn)定性較好