游離DNA產前篩查技術規(guī)范

游離DNA產前篩查技術規(guī)范游離DNA產前篩查技術規(guī)范游離DNA產前篩查技術規(guī)范xxx公司游離DNA產前篩查技術規(guī)范文件編號：文件日期：修訂次數：第1.0次更改批準審核制定方案設計，管理制度附件1孕婦外周血胎兒游離DNA產前篩查與診斷技術規(guī)范孕婦外周血胎兒游離DNA產前篩查與診斷是應用高通量基因測序等分子遺傳技術檢測孕期母體外周血中胎兒游離DNA片段，以評估胎兒常見染色體非整倍體異常風險。為規(guī)范該類技術的臨床應用，制訂本規(guī)范。本規(guī)范主要包括開展孕婦外周血胎兒游離DNA產前篩查與診斷技術的基本要求、適用范圍、臨床服務流程、檢測技術流程以及質量控制指標等內容。第一部分基本要求一、機構要求（一）開展孕婦外周血胎兒游離DNA產前篩查與診斷的醫(yī)療機構應當獲得產前診斷技術類《母嬰保健技術服務執(zhí)業(yè)許可證》。（二）開展孕婦外周血胎兒游離DNA產前篩查與診斷采血服務的醫(yī)療機構(以下簡稱采血機構)應當為有資質的產前篩查或產前診斷機構。開展采血服務的產前篩查機構須與產前診斷機構建立合作關系，并向省級衛(wèi)生計生行政部門備案。（三）開展孕婦外周血胎兒游離DNA實驗室檢測的醫(yī)療機構（以下簡稱檢測機構）應當具備臨床基因擴增檢驗實驗室資質，嚴格遵守《醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法》、《醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》等相關規(guī)定，相應檢驗項目應當接受國家衛(wèi)生計生委臨床檢驗中心組織的室間質量評價。二、人員要求（一）從事孕婦外周血胎兒游離DNA產前篩查與診斷的專業(yè)技術人員應當按照《產前診斷技術管理辦法》要求取得相應資質。（二）從事孕婦外周血胎兒游離DNA產前檢測的實驗室人員應當經過省級以上衛(wèi)生計生行政部門組織的臨床基因擴增檢驗技術培訓，并獲得培訓合格證書。三、設備試劑要求（一）在具備細胞遺傳學實驗診斷設備的基礎上，同時具備開展孕婦外周血胎兒游離DNA產前篩查與診斷相應的主要設備，包括DNA提取設備、PCR儀、高通量基因測序儀或其他分子檢測設備等。設備的種類、數量應當與實際開展檢測項目及檢測量相匹配。（二）設備、試劑和數據分析軟件應當符合《醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例》和《醫(yī)療器械注冊管理辦法》等相關規(guī)定，經過食品藥品監(jiān)督管理部門批準注冊。四、工作要求（一）嚴格遵守《中華人民共和國母嬰保健法》及其實施辦法、《產前診斷技術管理辦法》、《醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法》等有關規(guī)定。（二）產前診斷機構與產前篩查機構建立合作關系時，雙方應當簽訂協(xié)議明確各自責任和義務。具體要求如下：1.產前篩查機構主要負責制訂產前篩查方案、檢測前咨詢、檢測申請（包括簽署知情同意書、標本采集、檢測信息采集）、對檢測結果為低風險人群進行后續(xù)咨詢、妊娠結局隨訪等。產前篩查機構應當及時將檢測標本送至有合作關系的產前診斷機構，由產前診斷機構安排進行后續(xù)檢測。2.產前診斷機構主要負責確定產前篩查與診斷方案、標本檢測、出具發(fā)放臨床報告、對檢測結果為高風險人群進行后續(xù)咨詢、診斷與妊娠結局隨訪等。產前診斷機構負責對具有合作關系的產前篩查機構進行技術指導、人員培訓和質量控制。（三）產前診斷機構與其他具備高通量基因測序等分子遺傳技術能力的醫(yī)療機構合作時，雙方應當簽訂協(xié)議明確各自責任和義務，并向省級衛(wèi)生計生行政部門備案。具體要求如下：1.產前診斷機構負責臨床服務。主要包括確定產前篩查與診斷方案、檢測前咨詢、檢測申請（包括簽署知情同意書、標本采集、檢測信息采集）、依據檢測結果出具發(fā)放臨床報告、后續(xù)咨詢、診斷與妊娠結局隨訪等。2.檢測機構負責提供檢測技術。包括檢測技術平臺建設、技術人員培訓、技術支持、開展室內質量控制和室間評價、標本轉運與檢測,提供檢測結果并對檢測結果負責，按照本規(guī)定保存相關標本、信息資料等，接受衛(wèi)生計生行政部門的監(jiān)督檢查。檢測機構不可直接面向孕婦開展外周血胎兒游離DNA產前篩查與診斷臨床服務。（四）產前診斷機構應當定期向省級衛(wèi)生計生行政部門報送相關信息，由省級衛(wèi)生計生行政部門匯總后按要求報送國家衛(wèi)生計生委。（五）相關醫(yī)療機構要按照醫(yī)學倫理原則，自覺維護孕婦權益，保護孕婦隱私。醫(yī)務人員要堅持知情選擇原則,全面、客觀介紹各類產前篩查與診斷技術的適用人群、優(yōu)缺點以及可供選擇的產前篩查與診斷方案等，取得孕婦或其家屬同意后方可開展。重要事項需經過本單位倫理委員會審議通過。（六）嚴禁發(fā)布虛假醫(yī)療廣告和信息，嚴禁夸大本技術臨床應用效果。（七）嚴禁任何機構或人員利用孕婦外周血胎兒游離DNA產前篩查與診斷技術進行非醫(yī)學需要的胎兒性別鑒定。第二部分適用范圍一、目標疾病根據目前技術發(fā)展水平，孕婦外周血胎兒游離DNA產前篩查與診斷的目標疾病為3種常見胎兒染色體非整倍體異常，即21三體綜合征、18三體綜合征、13三體綜合征。二、適宜時間孕婦外周血胎兒游離DNA檢測適宜孕周為12+0～22+6周。三、適用人群（一）血清學篩查顯示胎兒常見染色體非整倍體風險值介于高風險切割值與1/1000之間的孕婦。（二）有介入性產前診斷禁忌證者（如先兆流產、發(fā)熱、出血傾向、慢性病原體感染活動期、孕婦Rh陰性血型等）。（三）孕20+6周以上，錯過血清學篩查最佳時間，但要求評估21三體綜合征、18三體綜合征、13三體綜合征風險者。四、慎用人群有下列情形的孕婦進行檢測時，檢測準確性有一定程度下降，檢出效果尚不明確；或按有關規(guī)定應建議其進行產前診斷的情形。包括：（一）早、中孕期產前篩查高風險。（二）預產期年齡≥35歲。（三）重度肥胖（體重指數>40）。（四）通過體外受精——胚胎移植方式受孕。（五）有染色體異常胎兒分娩史，但除外夫婦染色體異常的情形。（六）雙胎及多胎妊娠。（七）醫(yī)師認為可能影響結果準確性的其他情形。五、不適用人群有下列情形的孕婦進行檢測時，可能嚴重影響結果準確性。包括：（一）孕周<12＋0周。（二）夫婦一方有明確染色體異常。(三）1年內接受過異體輸血、移植手術、異體細胞治療等。（四）胎兒超聲檢查提示有結構異常須進行產前診斷。（五）有基因遺傳病家族史或提示胎兒罹患基因病高風險。（六）孕期合并惡性腫瘤。（七）醫(yī)師認為有明顯影響結果準確性的其他情形。除外上述不適用情形的，孕婦或其家屬在充分知情同意情況下，可選擇孕婦外周血胎兒游離DNA產前檢測。第三部分臨床服務流程一、檢測前咨詢及知情同意（一）對符合適用人群情形并自愿進行檢測的，或符合慎用人群情形但在充分告知并知情同意的前提下仍自愿要求進行檢測的孕婦，醫(yī)師應當對孕婦本人及其家屬詳細告知該檢測的目標疾病、目的、意義、準確率、局限性、風險以及其他篩查與診斷方案，與孕婦本人或其家屬簽署知情同意書并填寫申請單。（二）知情同意書應當包括以下要點（參考模板見附表1）：1.告知本技術的目標疾病。2.告知本技術的檢出率、假陽性和假陰性率，強調該檢測結果不是產前診斷結果，高風險結果必須進行介入性產前診斷以確診，以及檢測費用及流程等。3.告知本技術有因檢測失敗重新采血的可能。4.告知影響該檢測準確性的相關因素。5.醫(yī)師對病例個案認為應該說明的相關問題。（三）對未接受中孕期血清學篩查直接選擇孕婦外周血胎兒游離DNA產前檢測的孕婦，應當在中孕期進行胎兒神經管缺陷風險評估。（四）產前篩查機構承擔采血服務時，知情同意書應當一式兩份，一份留存產前篩查機構，一份隨標本運轉至有合作關系的產前診斷機構。二、檢測信息采集醫(yī)師應當仔細詢問孕婦基本情況、孕產史、本次妊娠情況、既往史和家族史等，如實、準確、詳細填寫檢測申請單（參考模板見附表2）。檢測申請單第一聯(lián)由產前診斷機構留存，第二聯(lián)由檢測機構留存。三、標本采集及運轉（一）標本編號。采血機構應當對采血管進行唯一編號。該編號應當與知情同意書、檢測申請單和臨床報告單編號一致。（二）標本采集。按照無菌操作要求，采取孕婦外周靜脈血。標本的采集和處理均應當按照標準操作流程和產品說明書要求進行。（三）標本的分離、保存和運轉。1.采用常規(guī)乙二胺四乙酸（以下簡稱EDTA）抗凝采血管采集的標本應當自離體后8小時內完成血漿分離，在干冰冷鏈狀態(tài)下暫時保存及運轉。采用專用血漿保存管的，可在室溫下完成暫時保存與運轉。此操作環(huán)節(jié)須雙人復核。2.標本應當與知情同意書、檢測申請單等資料同時運轉。運轉過程應當符合生物安全和環(huán)境要求，同時做好交接記錄。臨床報告的出具發(fā)放（一）自采血至發(fā)放臨床報告時間不超過15個工作日，其中發(fā)出因檢測失敗須重新采血通知的時間不超過10個工作日。臨床報告應當由副高以上職稱并具備產前診斷資質的臨床醫(yī)師出具發(fā)放。臨床報告應當以開展相關技術的產前診斷機構名義出具，以書面報告形式告知受檢者。（四）臨床報告應當包括以下信息（參考模板見附表3）：1.送檢單位和送檢醫(yī)師姓名。2.孕婦基本信息，包括姓名、年齡、末次月經時間、孕周等。3.標本信息，包括標本編號、標本狀態(tài)、采血日期等。4.檢測項目和檢測方法。5.目標疾病檢測值、參考范圍、低風險或高風險結果。6.結果描述與建議。7.檢測單位、檢測時間、檢測人員及審核人員簽名。8.臨床報告審核發(fā)放時間、審核醫(yī)師簽名。五、檢測后咨詢及處置對檢測結果為低風險的孕婦，采血機構應當建議其定期進行常規(guī)產前檢查；如果同時存在胎兒影像學檢查異常，應當對其進行后續(xù)咨詢及相應產前診斷。對檢測結果為高風險的孕婦，產前診斷機構應當盡快通知其到本機構進行后續(xù)咨詢及相應產前診斷。咨詢率應達到100%，產前診斷率應達到95%以上。對于目標疾病以外的其他異常高風險結果，產前診斷機構應當告知孕婦本人或其家屬進行進一步咨詢和診斷。六、妊娠結局隨訪（一）采血機構應當負責對孕婦的妊娠結局進行追蹤隨訪。對檢測結果為高風險的孕婦，妊娠結局隨訪率應達到100%；對檢測結果為低風險的孕婦，妊娠結局隨訪率應達到90%以上。隨訪應至少至分娩后12周，有條件的可隨訪至分娩后1年。（二）隨訪內容應包括：后期流產、引產、早產或足月產、死產、死胎等妊娠結局，是否為21三體綜合征、18三體綜合征、13三體綜合征患兒，有條件的可將后期流產、死胎的遺傳學診斷納入妊娠結局隨訪內容。七、標本與資料信息的保存采血機構負責保存知情同意書，產前診斷機構負責保存檢測申請單第一聯(lián)。檢測機構負責保存檢測申請單第二聯(lián)、實驗室檢測核心數據信息和剩余標本。標本、信息和資料的保存期限應不少于3年。第四部分檢測技術流程一、標本的接收檢測機構應當制定標本接收和拒收原則。拒絕接收不符合要求的標本時應當書面反饋拒收原因，具體拒收情況包括：（一）標本采集不當，如抗凝劑使用不正確、容器使用不正確、嚴重溶血或有血凝塊、采血管破裂或開蓋、標本標識不清等。（二）標本未按照規(guī)定的溫度、時限等保存和運輸。（三）檢測申請單填寫不完整。二、信息記錄要求在標本檢測過程中，應當及時、準確、如實記錄操作人員、儀器、試劑及檢測數據等相關信息。三、血漿DNA的提取血漿DNA提取應當在標本制備區(qū)進行，各項操作應當符合標準操作流程和說明書要求。如提取2次仍不符合質量標準，應當與采血機構充分進行溝通后決定后續(xù)處理。剩余的血漿標本應當在-70℃以下保存不少于3年，避免反復凍融。四、文庫構建文庫構建流程和上機文庫質量評估應當嚴格按照標準操作流程進行。實驗操作應當符合《醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》相關要求。文庫檢測濃度及文庫片段分布范圍應當符合試劑說明書的要求。五、DNA序列分析DNA序列分析應當在擴增產物分析區(qū)（如測序區(qū)域）按照標準操作流程進行。實驗室分區(qū)溫度和濕度應當符合設備說明書要求。每個標本有效數據量、唯一比對序列數目等均應當符合試劑說明書要求。DNA序列分析應當嚴格按照產品說明書具體要求進行。六、數據分析與結果判斷（一）檢測質量合格的標本應當嚴格按照產品說明書進行實驗室結果判讀。（二）檢測質量不合格的標本應當重新提取DNA再次檢測，再次檢測后仍不符合數據分析或結果判斷質量要求的標本，檢測機構應當與產前診斷機構充分溝通后確定后續(xù)處理。（三）檢測機構應當按照檢測方法相關說明書要求建立有關數據質量參考標準。七、檢測結果的出具（一）檢測機構填寫臨床報告中檢測結果部分，描述目標疾病的高風險或低風險結果。（二）對檢測失敗的樣本，檢測機構應當發(fā)放檢測失敗報告并注明原因。八、檢測數據的存儲與安全相關醫(yī)療機構應當嚴格保護孕婦隱私，嚴禁泄漏受檢者信息，采取措施確保信息安全。檢測數據應當進行安全備份，并與互聯(lián)網物理隔離。可追溯原始序列的核心數據保存應當不少于3年。第五部分質量控制指標一、檢出率21三體綜合征檢出率不低于95%，18三體綜合征檢出率不低于85%，13三體綜合征檢出率不低于70%。二、假陽性率21三體綜合征、18三體綜合征、13三體綜合征的復合假陽性率不高于%。三、陽性預測值21三體綜合征、18三體綜合征、13三體綜合征的復合陽性預測值不低于50%。四、檢測失敗率由于凝血、溶血、DNA質量控制不合格等標本原因造成的檢測失敗率不超過5%。附表1孕婦外周血胎兒游離DNA產前檢測知情同意書（參考模板）本檢測是應用高通量基因測序等分子遺傳技術檢測孕期母體外周血中胎兒游離DNA片段，以評估胎兒常見染色體非整倍體異常風險?，F(xiàn)將有關情況告知如下：1.本檢測適宜檢測孕周為12+0～22+6周。2.本檢測僅針對21三體綜合征、18三體綜合征和13三體綜合征3種常見胎兒染色體非整倍體異常。3.有下列情形的孕婦為慎用人群，進行檢測時檢測準確性有一定程度下降，檢出效果尚不明確；或按有關規(guī)定應建議其進行產前診斷的情形。包括：（1）早、中孕期產前篩查高風險。（2）預產期年齡≥35歲。（3）重度肥胖（體重指數>40）。（4）通過體外受精-胚胎移植方式受孕。（5）有染色體異常胎兒分娩史，但除外夫婦染色體異常的情形。（6）雙胎及多胎妊娠。（7）醫(yī)師認為可能影響結果準確性的其他情形。4.有下列情形的孕婦進行檢測時，可能嚴重影響結果準確性。包括：（1）孕周<12＋0周。（2）夫婦一方有明確染色體異常。（3）1年內接受過異體輸血、移植手術、異體細胞治療等。（4）胎兒超聲檢查提示有結構異常須進行產前診斷。（5）有基因遺傳病家族史或提示胎兒罹患基因病高風險。（6）孕期合并惡性腫瘤。（7）醫(yī)師認為有明顯影響結果準確性的其他情形。5.鑒于當前醫(yī)學檢測技術水平的限制和孕婦個體差異（胎盤局限性嵌合、孕婦自身為染色體異?；颊撸┑仍?，本檢測有可能出現(xiàn)假陽性或假陰性的結果。6.如出現(xiàn)不可抗拒因素導致樣品損耗或其他特殊情形（如因個體差異血漿中胎兒游離DNA含量過低），有可能需重新抽血取樣。7.本檢測結果為篩查結果，不作為最終診斷結果。8.其他需要說明的問題：----------------------------------------------------------------------------孕婦在充分知曉上述情況的基礎上，承諾以下事項：1.已閱讀《孕婦外周血胎兒游離DNA產前檢測知情同意書》相關內容，充分了解本檢測的性質、適用范圍、目標疾病和局限性，其中的疑問已得到醫(yī)生的解答，經本人及家屬慎重考慮，自愿進行孕婦外周血胎兒游離DNA產前檢測。2.本人承諾提供的相關信息真實可靠。3.知曉并同意院方對妊娠結局進行隨訪。4.授權院方處理本次檢測涉及的血液、血漿和醫(yī)療廢棄物。為確認上述內容為雙方意愿的真實表達，院方已履行了告知義務，孕婦已享有充分知情和選擇的權利，簽字生效。編號：_________________孕婦身份證號:□□□□□□□□□□□□□□□□□□孕婦（簽字）:_________________醫(yī)師：_________________日期：_____年_____月_____日日期：_____年_____月_____日----------------------------------------------------------------------------知情同意書補充條款（孕周超過22+6周的孕婦需同時簽署）本人現(xiàn)孕周已超過22+6周，已知曉存在錯過最佳產前診斷時間的風險，本人自愿要求進行孕婦外周血胎兒游離DNA產前檢測，并承擔檢測風險及因錯過最佳產前診斷時間所致無足夠時間進行后續(xù)臨床處理等后果。孕婦（簽字）:_________________日期：年月日附表2孕婦外周血胎兒游離DNA產前檢測申請單（第一聯(lián)參考模板）標本采集時間：________年_____月_____日____時____分編號：___________門診號/住院號：___________孕婦姓名：___________出生日期：_____年_____月____日末次月經：____年____月____日孕_____次；產_____次孕周：_____周____天體重：_______公斤身高：_______厘米本次妊娠情況:自然受孕：是□否□促排卵：是□否□IUI：是□否□IVF:是□否□臨床診斷：__________________________________________________________________既往史：異體輸血：□無□有移植手術：□無□有異體細胞治療：□無□有干細胞治療：□無□有家族史：____________________________________________________________________不良孕產史：□無□有若有，自然流產_____次；死胎____次；新生兒死亡____次；畸形兒史____次輔助檢查：超：□單胎□雙胎□多胎□異常____________________2.篩查模式：□未做□NT篩查□早孕期篩查□中孕期篩查□早中孕期聯(lián)合篩查超聲NT測定孕周：_____周____天NT測定值____mm母體血清篩查風險：□高風險□低風險□臨界風險21三體綜合征1/18三體綜合征1/3.夫妻雙方染色體檢查結果：孕婦染色體核型：□未做□正?！醍惓____________________________丈夫染色體核型：□未做□正?！醍惓____________________________手機/電話：______________通訊地址：_______________電子郵箱：___________送檢單位：：________________送檢醫(yī)師：____________聯(lián)系電話：申請日期：________年___月____日孕婦外周血胎兒游離DNA產前檢測申請單（第二聯(lián)參考模板）標本采集時間：____年___月____日____時____分編號：____門診號/住院號：___________孕婦姓名：___________出生日期：____年___月____日末次月經：____年____月____日孕__次；產__次孕周：_____周____天體重：_______公斤身高：_______厘米本次妊娠情況:自然受孕：是□否□促排卵：是□否□IUI：是□否□IVF:是□否□臨床診斷：__________________________________________________________________既往史：異體輸血：□無□有移植手術：□無□有異體細胞治療：□無□有干細胞治療：□無□有家族史：____________________________________________________________________不良孕產史：□無□有若有，自然流產_____次；死胎____次；新生兒死亡____次；畸形兒史____次輔助檢查：超：□單胎□雙胎□多胎□異常____________________2.篩查模式：□未做□NT篩查□早孕期篩查□中孕期篩查□早中孕期聯(lián)合篩查超聲NT測定孕周：_____周____天NT測定值____mm母體血清篩查風險：□高風險□低風險□臨界風險21三體綜合征1/18三體綜合征1/3.夫妻雙方染色體檢查結果：孕婦染色體核型：□未做□正?！醍惓____________________________丈夫染色體核型：□未做□正?！醍惓____________________________送檢單位：_________________送檢醫(yī)師：____________