白細胞分離技術匯總

白細胞分離技術匯總白細胞分離技術匯總白細胞分離技術匯總xxx公司白細胞分離技術匯總文件編號：文件日期：修訂次數(shù)：第1.0次更改批準審核制定方案設計，管理制度外周血白細胞的分離：（細胞分離液有市售，有各種型號：白細胞、單核細胞淋巴細胞等分離液）1>取3ml正常人的外周血（枸櫞酸鈉抗凝）與等體積pbs混勻后小心的加于6ml白細胞分離液液面上，1500r/min離心20min。（或先將抗凝血離心，然后吸取中間白細胞層，再混以等體積pbs然后小心加于等體積細胞分離液液面上，離心同上）2>吸取中間云霧狀白細胞，加3－4mlPBS后3000r/min離心10min。3>棄上清，加1mlPBS洗滌沉淀后，將細胞懸液轉移至管中。4>3000r/min離心20min，棄上清。即得白細胞可以試試紅細胞裂解液提供我的配方：氯化銨克；重碳酸鉀克；克；用三蒸水配成1升所有的細胞培養(yǎng)都應該堅守無菌操作原則2.分層后的確有3層，準確說來是4層，最下面是紅細胞，上面的一層不應該是稍微混濁的白色，應該也比較透明，這一層上面就是我們需要的薄細胞層，最上面是血清3.細節(jié)：a.淋巴細胞分離液要避光保存b.就您的試驗看來，淋巴細胞分離液的問題可能是最主要的c.首先再離心管中加入淋巴細胞分離液，然后把標本緩慢加在淋巴細胞分離液表面上，一定要緩慢小心操作，切不可混勻d.所有操作都應在無菌環(huán)境進行e.把離心管放入離心機是也應小心，不要太大幅度的搖幌離心管，當然離心后拿出來也要小心就這么多了吧，這個操作是不是很難的，比較基本祝您好運了！.參考方法：

人外周血,肝素抗凝(100U?ml),等量無血清培養(yǎng)液（或者PBS等緩沖液）稀釋。按1∶2的體積比緩置于比重1.077g/ml的淋巴細胞分離液,1000×g離心30min,收集培養(yǎng)液2分離液界面上的單個核細胞。于無血清培養(yǎng)液,400×g離心10min,洗滌2次。用培養(yǎng)液重新懸浮細胞并計數(shù)我也是最近要做所以查了一下，僅供分享，呵呵！一外周血白細胞的分離1>取3ml正常人的外周血（枸櫞酸鈉抗凝）與等體積pbs混勻后小心的加于6ml白細胞分離液（（%泛影葡胺和9%Ficoll液按1：體積比混合））液面上，1500r/min離心20min。（或先將抗凝血離心，然后吸取中間白細胞層，再混以等體積pbs然后小心加于等體積細胞分離液液面上，離心同上）2>吸取中間云霧狀白細胞，加3－4mlPBS后3000r/min離心10min。3>棄上清，加1mlPBS洗滌沉淀后，將細胞懸液轉移至管中。4>3000r/min離心20min，棄上清。即得白細胞二自然沉降法本法是利用血細胞自然沉降率的分離法，採集血液後應及時抗凝，通常選用肝素抗凝法。肝素能阻止凝血酶原轉化為凝血酶，從而抑制纖維蛋白原形成纖維蛋白而防止血液凝固。操作原則是將含抗凝血的試管直立靜置室溫30～60min後，血液分成明顯三層，上層為淡黃色血漿，底層為紅細胞，緊貼紅細胞層上面的灰白層為白細胞，輕輕吸取即得