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實(shí)驗(yàn)四酵母細(xì)胞的固定化高大響一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵罅私夤潭ɑ?xì)胞的原理。掌握用海藻酸鈉制備固定化酵母細(xì)胞的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理工業(yè)上常用包埋法固定微生物細(xì)胞。根據(jù)包埋劑的特性,海藻酸鈉在水相中加熱溶解呈溶液狀。將細(xì)胞加入混勻,滴入氯化鈣溶液中,由于離子的轉(zhuǎn)移作用而凝固,形成凝膠顆粒,凝膠顆粒中的微小空格將細(xì)胞固定。海藻酸鈣凝固的顆粒能反復(fù)使用,細(xì)胞在空格中可新陳代謝(固定活細(xì)胞),也可以利用細(xì)胞中的酶進(jìn)行酶促反應(yīng)(固定死細(xì)胞)。本實(shí)驗(yàn)利用海藻酸鈣凝膠包埋酵母生長(zhǎng)細(xì)胞。酵母細(xì)胞的活化取市售干酵母按1g投入到20ml
36~38℃的溫水中活化15~20分鐘,酵母細(xì)胞活化時(shí)體積會(huì)變大,活化前應(yīng)該選擇體積足夠大的容器,以避免酵母細(xì)胞的活化液溢出容器外。四、實(shí)驗(yàn)方法和步驟酵母細(xì)胞的固定化在冷卻至45~50℃左右海藻酸鈉溶液中,加入5mL預(yù)熱至35℃的酵母培養(yǎng)液,混合均勻。將混合液裝入注射器中,裝上大好針頭,以緩慢而穩(wěn)定的速度將其滴入1.5%CaCl2溶液中,邊滴邊搖動(dòng)三角瓶,即可制得直徑為3mm左右的凝膠珠。在CaCl2溶液中鈣化30min,即可使用。四、實(shí)驗(yàn)方法和步驟
加熱使海藻酸鈉溶化是操作中最重要的一環(huán)一定要溶解徹底,在溶解過程中不斷攪拌,在降溫過程中不能低于45℃,否則會(huì)凝固。
五、注意事項(xiàng)
海藻酸鈉的濃度涉及到固定化細(xì)胞的質(zhì)量如果海藻酸鈉濃度過高,將很難形成凝膠珠;如果濃度過低,形成的凝膠珠所包埋的酵母細(xì)胞的數(shù)目少,影響實(shí)驗(yàn)效果。
五、注意事項(xiàng)
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