非血緣干細(xì)胞動(dòng)員、采集與檢測(cè)中的問(wèn)題和對(duì)策

非血緣干細(xì)胞動(dòng)員、采集

與檢測(cè)中的問(wèn)題和對(duì)策

管理目標(biāo)

安全性：確保供者無(wú)長(zhǎng)期或不可逆轉(zhuǎn)的不良反應(yīng)有效性：CD34+細(xì)胞數(shù)是最根本的要求安全性有效性內(nèi)容介紹

血液細(xì)胞、G-CSF動(dòng)員后血液細(xì)胞、機(jī)采PBSC中細(xì)胞分類特征

G-CSF注射期間的注意事項(xiàng)

PBSC采集中的注意事項(xiàng)有核細(xì)胞及CD34+計(jì)數(shù)方法及注意事項(xiàng)正常血液細(xì)胞成份

白細(xì)胞：為有核細(xì)胞(NC)的主要成份粒細(xì)胞：嗜中性粒細(xì)胞(N)：50-70%

嗜酸性粒細(xì)胞(Eo)：<0.5-5%

嗜堿性粒細(xì)胞(Ba)：<1%

淋巴細(xì)胞:20-40%

單核細(xì)胞:<3-8%

紅細(xì)胞血小板單個(gè)核細(xì)胞(MNC)G-CSF動(dòng)員后血液細(xì)胞成份

白細(xì)胞明顯增加（20-80×109/L)，以N增加為主粒細(xì)胞：嗜中性粒細(xì)胞(N)：>80%

嗜酸性粒細(xì)胞(Eo)：<0.5-5%

嗜堿性粒細(xì)胞(Ba)：<1%

淋巴細(xì)胞:<10%

單核細(xì)胞:<10%

偶有有核紅細(xì)胞紅細(xì)胞:變化不大血小板：不變或有所減少單個(gè)核細(xì)胞(MNC)機(jī)采G-CSF動(dòng)員后血液細(xì)胞成份

（PBSC采集物）

因?yàn)镃D34+HSC主要在單個(gè)細(xì)胞中，因此機(jī)采PBSC主要為MNCCD34+細(xì)胞占全部有核細(xì)胞(ANC)0.3-1.5%

粒細(xì)胞：嗜中性粒細(xì)胞(N)：<10%

嗜酸性粒細(xì)胞(Eo)：<2%

嗜堿性粒細(xì)胞(Ba)：<1%

淋巴細(xì)胞:30-50%

單核細(xì)胞:30-50%

偶有有核紅細(xì)胞或其它中晚幼粒細(xì)胞單個(gè)核細(xì)胞(MNC)NC、MNC、CD34+細(xì)胞

檢測(cè)的注意事項(xiàng)(詳見(jiàn)規(guī)程）對(duì)每個(gè)有關(guān)的細(xì)節(jié)都要有嚴(yán)格的SOP及質(zhì)控管理，如抽樣：檢測(cè)樣本與采集袋中的樣本要充分混勻檢測(cè)：上機(jī)前要充分混勻?qū)z測(cè)的儀器設(shè)備及其清潔衛(wèi)生、保養(yǎng)、校準(zhǔn)等試劑的選擇、保存；標(biāo)本的保存檢測(cè)過(guò)程、結(jié)果分析結(jié)果的審核與報(bào)告PBSC采集物檢測(cè)流程抽樣、標(biāo)記、運(yùn)送有核細(xì)胞計(jì)數(shù)染色溶解紅細(xì)胞±洗滌±固定貯存數(shù)據(jù)分析、計(jì)算、最終報(bào)告血液細(xì)胞計(jì)數(shù)室FCM實(shí)驗(yàn)室白細(xì)胞分類FCM檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)室報(bào)告給主管醫(yī)師PBSC采集物的檢測(cè)

最終目的是要計(jì)算出患者每公斤體重要接受多少CD34+細(xì)胞及有核細(xì)胞，需要以下幾方面的檢測(cè)才能達(dá)到此目標(biāo)采集完成后，血液細(xì)胞分離機(jī)自動(dòng)顯示采集物容量（ml)

對(duì)采集物抽樣用血液細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)采集物中有核細(xì)胞的濃度，一般為200×109個(gè)細(xì)胞/1000ml左右（80-300）對(duì)采集物抽樣用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD34+細(xì)胞占有核細(xì)胞的比例對(duì)采集物抽樣涂片目測(cè)白細(xì)胞（有核細(xì)胞）分類PBSC采集物的計(jì)算

舉例，一患者為50kg體重，他的供者第一次采集了PBSC160ml，采集物有核細(xì)胞濃度為200×109個(gè)細(xì)胞/1000ml，CD34+細(xì)胞占全部有核細(xì)胞的0.78%，請(qǐng)問(wèn)此次采集是否達(dá)到衛(wèi)生部制定的采集標(biāo)準(zhǔn)？采集物中有核細(xì)胞總數(shù)為：200×109個(gè)細(xì)胞/1000ml×160ml=3.2×1010

患者每公斤體重接受的有核細(xì)胞數(shù)=3.2×1010/50=6.4X108/kg

采集物中CD34+細(xì)胞總數(shù)=3.2×1010×0.78%=2.496×108

患者每公斤體重接受的CD34+細(xì)胞數(shù)=2.496×108/50=4.99X106/kg

此次采集物的NC及CD34+細(xì)胞數(shù)高于衛(wèi)生部的標(biāo)準(zhǔn)可能引起檢測(cè)結(jié)果誤差的狀況

樣本：抽樣標(biāo)記保存溫度檢測(cè)時(shí)間操作人員：技術(shù)差異處理認(rèn)識(shí)問(wèn)題的能力是否執(zhí)行SOP

儀器設(shè)備：每天狀況不同不同儀器不同實(shí)驗(yàn)室試劑：不同批號(hào)熒光的漂白污染保存不當(dāng)PBSC采集物檢測(cè)中的注意事項(xiàng)

抽樣:抽樣前要將采集袋中的PBSC采集物與小辮中的采集物混合5次以上;

檢測(cè):采集完成后立即送檢采集物的有核細(xì)胞濃度計(jì)數(shù)采用全自動(dòng)分析儀來(lái)檢測(cè)有核細(xì)胞計(jì)數(shù)4.在振蕩器上充分混勻后抽樣5.用配套的細(xì)胞稀釋液將采集物分別稀釋2倍、10倍6.再次在振蕩器上充分混勻后上機(jī)檢測(cè)7.將2、10倍稀釋后的計(jì)數(shù)濃度均值作最終報(bào)告值G-CSF注射中不良反應(yīng)發(fā)生的機(jī)制

骨髓造血細(xì)胞迅速增加：多部位疼痛、胸悶異體蛋白反應(yīng)：流感樣癥狀、過(guò)敏等血白細(xì)胞升高引起的血管堵塞、血小板聚集功能增加高凝狀態(tài)：血栓、栓塞、脾破裂其它：惡心、便秘等健康供者動(dòng)員采集不良反應(yīng)調(diào)查

最常見(jiàn)：多部位疼痛、疲乏;采集中低鈣較常見(jiàn)：流感樣癥狀、惡心、失眠、頭暈少見(jiàn)：盜汗、浮腫罕見(jiàn)：血栓、栓塞（心肌缺血、一過(guò)性腦缺血、失明等），脾破裂、虹膜炎、虹膜外層炎、急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、過(guò)敏反應(yīng)、嚴(yán)重化膿感染G-CSF動(dòng)員對(duì)血生化的影響

DFStroncek，J.Clin.Oncol.,1997，15:1601

G-CSF2-10ug/kg/d,5d;美國(guó)，n=102ALP升高

LDH升高

ALT升高鈉升高

糖降低鉀降低

BIL降低

BUN降低北京市道培醫(yī)院

URD動(dòng)員中的副作用（一）

G-CSF5ug/kg/d,4-5d，n=73

頭、腰背、四肢、全身痛39(54%)

疲乏10(14%)

失眠4(6%)

惡心 3(5%)

發(fā)熱 3(5%)

食欲下降2(3%)均<=II度心悸1(2%)

頭暈 1(2%)

鼻塞 1(2%)

腹瀉 1(2%)

唇部皰疹1(2%)采集PBSC的時(shí)間及循環(huán)血量在G-CSF后D5-6采集最好每次采集至少循環(huán)供者血容量的2倍

LVL可循環(huán)供者血容量的3-6倍

CMDP規(guī)定每次循環(huán)量<15000ml，不得<8000ml采集PBSC引起不良反應(yīng)的機(jī)制

絕大多數(shù)為抗凝劑中和血鈣引起的低鈣，這在年齡大的女性、戶外活動(dòng)少的供者容易出現(xiàn)：如畏寒、麻木、抽搐等進(jìn)食少、G-CSF、再加體外循環(huán)血液引起的低血容量、低血糖、低血鎂、鉀穿刺部位的疼痛，緊張所致的暈針采集丟失一定的紅細(xì)胞、血小板，這在有隱性缺鐵、基礎(chǔ)血小板在正常低線的供者容易出現(xiàn)臨床表現(xiàn)。PLT降低一般在采集后1周恢復(fù)至正常北京市道培醫(yī)院

非血緣供者PBSC采集中的副作用

n=73

手足麻木39（54%）唇部或面部麻木10（14%）手抽搐1（2%）血小板低于正常27(37%)43-98109/L

畏寒高于以上各種麻木者北京市道培醫(yī)院

注射G-CSF和采集PBSC中副作用的防治

須由專業(yè)醫(yī)生管理

注射動(dòng)員劑開(kāi)始即住院，需有陪護(hù)人員在旁，以防過(guò)敏給供者多個(gè)醫(yī)生的電話，一旦有任何不適，立即通知充分講清楚注射動(dòng)員劑中可能發(fā)生的一過(guò)性不良反應(yīng)，以及我們解決問(wèn)題的信心和經(jīng)驗(yàn),緩解供者的緊張情緒給供者備止疼藥、安眠藥、抗過(guò)敏藥病房準(zhǔn)備搶救車(chē)，需有充分抗過(guò)敏的急救藥品囑多飲水、適當(dāng)活動(dòng)每天了解CBC，如血WBC>50109/L，提前采集PBSC，并減少G-CSF量北京市道培醫(yī)院

G-CSF注射及PBSC采集副作用的防治

如果為女性供者，HB接近低線，MCV接近80或更低，最好在當(dāng)?shù)卦黾訖z測(cè)血鐵蛋白，如低于正常，囑在當(dāng)?shù)亻_(kāi)始補(bǔ)鐵劑如果為>38歲的女性供者，在當(dāng)?shù)亻_(kāi)始口服鈣+VitD;

并在注射動(dòng)員劑的開(kāi)始，每天口服葡萄糖酸鈣口服液

30ml/d

全部患者在采集前口服葡萄糖酸鈣口服液20ml/d，以后每循環(huán)1000ml，口服10ml。如果采集中畏寒，增加口服量。盡量減少靜脈補(bǔ)鈣。建立良好的靜脈采血通道；如有血容量不足現(xiàn)象，另建通道補(bǔ)液、鈣或電解質(zhì)采集后密切監(jiān)測(cè)PLT，如下降明顯，應(yīng)調(diào)整第2次循環(huán)血量不適合URD的補(bǔ)充建議

由于一些罕見(jiàn)不良反應(yīng)報(bào)告，除了CMDP的標(biāo)準(zhǔn)，建議以下供者不適合捐獻(xiàn)PBSCCBC在正常低線水平有血栓史者有自身免疫性疾病有慢性炎癥性疾病史，如眼部炎癥有惡性疾病有血液病家族史者，最好檢查骨髓形態(tài)及染色體PBSC保存與運(yùn)輸?shù)淖罴褱囟?/p>

AntonenasV,2006,Cytotherapy158-165(8)

初始CD34+細(xì)胞7.7×106