紫外線殺菌作用和膿桿菌分離培養(yǎng)課件

第三次實(shí)驗(yàn)安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室2012.03合肥

醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)三(一)示教1、多媒體①噬菌體溶菌現(xiàn)象②炭疽芽胞桿菌串珠實(shí)驗(yàn)2、模型:變形桿菌遷徙生長(zhǎng)現(xiàn)象(二)操作1、紫外線殺菌作用：菌種為金葡菌和大腸埃希菌(兩人一碟,四人一組)2、膿標(biāo)本的分離培養(yǎng)(一):混合金葡菌和大腸埃希菌標(biāo)本在普通培養(yǎng)基上四區(qū)劃線分離單菌落并做革蘭染色實(shí)驗(yàn)三噬菌體溶菌現(xiàn)象示教噬菌體(bacteriophage,phage)是感染細(xì)菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物的病毒的總稱，因部分能引起宿主菌的裂解，故稱為噬菌體。在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿上培養(yǎng)A.普通大腸桿菌+噬菌體結(jié)果顯示僅B平皿上出噬斑現(xiàn)象AB噬菌體的噬斑現(xiàn)象

在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿上培養(yǎng)的變形桿菌遷移狀生長(zhǎng)A.變形桿菌在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上呈現(xiàn)叢集樣生長(zhǎng)B.變形桿菌在含有1%石炭酸營(yíng)養(yǎng)瓊脂上的呈點(diǎn)狀生長(zhǎng)（營(yíng)養(yǎng)瓊脂，18h，37℃）AB細(xì)菌遷移狀生長(zhǎng)現(xiàn)象

串珠試驗(yàn)示教

菌種：炭疽桿菌炭疽桿菌（Bacillusanthraci）屬于需氧芽孢桿菌屬，菌體粗大，兩端平截或凹陷，是致病菌中最大的細(xì)菌。排列似竹節(jié)狀，無(wú)鞭毛，無(wú)動(dòng)力，革蘭氏染色陽(yáng)性。菌落呈毛玻璃狀，邊緣不整齊，呈卷發(fā)狀。能引起羊、牛、馬等動(dòng)物及人類的人畜共患急性、熱性、敗血性傳染病。表現(xiàn)為脾臟顯著腫大；皮下及漿膜下結(jié)締組織出血性浸潤(rùn)；血液凝固不良，呈煤焦油樣。炭疽桿菌曾被帝國(guó)主義作為致死戰(zhàn)劑之一。平時(shí)，牧民、農(nóng)民、皮毛和屠宰工作者易受感染。利用青霉素處理炭疽桿菌，可以破壞細(xì)菌的細(xì)胞壁中的肽聚糖，所以造成細(xì)菌內(nèi)部的滲透壓大，造成細(xì)菌膨脹變圓，呈串珠狀排列。此現(xiàn)象是炭疽芽孢桿菌所特有的，具有鑒別意義。AB革蘭陽(yáng)性需氧芽胞桿菌炭疽芽胞桿菌A.炭疽芽胞桿菌純培養(yǎng)的鏡下形態(tài)(革蘭染色)B.炭疽芽胞桿菌獸血涂片的鏡下形態(tài)(瑞氏染色)炭疽桿菌革蘭染色青霉素處理炭疽桿菌形成的串珠現(xiàn)象菌種：金葡菌、大腸埃希菌（二人一碟、四人一組）方法：密集劃線步驟：用接種環(huán)（無(wú)菌）取細(xì)菌培養(yǎng)物在無(wú)菌的普通瓊脂平板上做密集劃線后置于紫外燈下，將皿蓋蓋一半，接受紫外線照射30min；然后倒置溫箱培養(yǎng)18~24h后，觀察結(jié)果。紫外線殺菌作用操作注意事項(xiàng)：

1、無(wú)菌操作

2、密集劃線使細(xì)菌充分較均勻地分散在培養(yǎng)基表面

3、在平皿背面作好標(biāo)記（標(biāo)本名稱，姓名，日期，班級(jí))，再進(jìn)行紫外線照射和培養(yǎng)

.12341圖示膿標(biāo)本的分離培養(yǎng)（一）

四區(qū)劃線分離單菌落實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、掌握細(xì)菌分離培養(yǎng)的方法

2、掌握細(xì)菌單個(gè)菌落的觀察

3、熟悉混合標(biāo)本的分離鑒定程序?qū)嶒?yàn)原理將待檢材料進(jìn)行分離培養(yǎng)，常用的分離接種法是瓊脂板分區(qū)劃線法，是借劃線將混雜的細(xì)菌在瓊脂平板上分開(kāi)來(lái)，使個(gè)別的細(xì)菌能固定在某一點(diǎn)，經(jīng)培養(yǎng)繁殖后形成單個(gè)菌落，以達(dá)到分離獲得純種細(xì)菌，再進(jìn)一步鑒定的目的。今天實(shí)驗(yàn)主要使用的是分區(qū)劃線法中的四區(qū)劃線法。

1、膿標(biāo)本

2、培養(yǎng)基（普通瓊脂平皿），革蘭染色液一套

3、生理鹽水、載玻片、接種環(huán)、酒精燈等實(shí)驗(yàn)材料

1，四區(qū)劃線：膿標(biāo)本

接種環(huán)燒灼滅菌后取標(biāo)本涂布與平板1區(qū)內(nèi)作數(shù)次Z形劃線，再在2、3、4區(qū)依次Z形劃線（注意：劃完一區(qū)后應(yīng)燒掉環(huán)上的殘菌）。每一區(qū)的劃線與上區(qū)交叉接觸，每區(qū)保持一定距離，密而不重，如此后一區(qū)菌量少于前一區(qū)，逐漸減少以至劃線上的細(xì)菌呈單個(gè)菌分布。37℃溫箱倒置培養(yǎng)18～24小時(shí)。并作革蘭染色觀察混合細(xì)菌的種類、染色性和形態(tài)。實(shí)驗(yàn)方法12341、整個(gè)操作在酒精燈火焰邊進(jìn)行。2、接種環(huán)和培養(yǎng)皿呈30~45度角，用力均勻，不要?jiǎng)澠破矫蟆?、倒置培養(yǎng)，37℃溫箱培養(yǎng)18~24h。4、在皿底做上標(biāo)記(標(biāo)本名稱，姓名，班級(jí)，日期）（通常為1,2區(qū)）。注意事項(xiàng)2，革蘭染色：膿標(biāo)本，觀察混合細(xì)菌的種類、染色性和形態(tài)注意：上次革蘭染色實(shí)驗(yàn)所使用的是菌苔，所以在涂片前需加生理鹽水，而本實(shí)驗(yàn)所使用的是菌液，在涂片前不需加生理鹽水，且由于本次