流感項(xiàng)目課件

流感項(xiàng)目文獻(xiàn)調(diào)研報(bào)告2010年1月26日流行病學(xué)信息呼吸道感染是臨床常見疾病，急性上呼吸道感染90％以上是由病毒引起。最常見的傳染病，發(fā)病率高、傳播快，流行廣泛，對(duì)人民健康危害極大。感冒大約占所有人類疾病的1/4左右，人均年發(fā)病5～6次。所有急性傳染病中感冒的發(fā)病率占第一位。流行性感冒危害性最大，可引起局部乃至世界性范圍的大流行。近100年來人類經(jīng)歷了三次流感大流行：1918～1919，“西班牙流感”，引起很高的流感病毒死亡率，在美國(guó)死亡人數(shù)超過50萬人。在全球死亡人數(shù)為4000～5000萬人。此病毒的毒力高，發(fā)病快。死者多為年輕的健康成人。1957～1958年，“亞洲流感”，在美國(guó)死亡人數(shù)為7萬人。1968～1969年，“香港流感”，在美國(guó)有約3.4萬人死亡，迄今還在全球流行。2009年4月在墨西哥首先發(fā)生甲型H1N1流感病例，并迅速出現(xiàn)世界性蔓延。截止2009年12月6日，中國(guó)境內(nèi)31個(gè)省份報(bào)告甲型H1N1流感確診病例9737例，住院治療3225例，死亡125人。

流感病毒屬于正黏病毒科RNA病毒。根據(jù)其核蛋白的抗原性可以分為三類:甲型流感病毒（InfluenzaAvirus），又稱A型流感病毒乙型流感病毒（InfluenzaBvirus），又稱B型流感病毒丙型流感病毒（InfluenzaCvirus），又稱C型流感病毒。有些流感病毒引起嚴(yán)重的疾病大多發(fā)生于家禽方面，而人類缺很少出現(xiàn)。但經(jīng)過鳥類和哺乳動(dòng)物的傳播和變異，這可能導(dǎo)致疫情或人類流感大面積傳播。命名原則根據(jù)世界衛(wèi)生組織1980年通過的流感病毒毒株命名法修正案，流感毒株的命名包含6個(gè)要素：型別/宿主/分離地區(qū)/毒株序號(hào)/分離年份(HnNn)，例如A/swine/Lowa/15/30(H1N1)表示的是核蛋白為A型的，1930年在lowa分離的以豬為宿主的H1N1亞型流感病毒毒株，其毒株序號(hào)為15，這也是人類分離的第一支流感病毒毒株。甲型流感病毒亞型分類依據(jù)：HA和NA。16種H型別(H1～H16)和9種N型別(N1～N9)。H和N的組合不同，病毒的毒性和傳播速度也不相同。病毒基因變異H1、H2、H3和N1、N2亞型常見?？乖h移。RNA缺乏校正讀碼酶，病毒RNA復(fù)制時(shí)大約每10000個(gè)核苷酸會(huì)出現(xiàn)1個(gè)錯(cuò)誤，形成新的突變。基因重配。同一細(xì)胞感染2種或2種以上流感病毒亞型時(shí)，就可能出現(xiàn)RNA片段的混合或重配，從而導(dǎo)致病毒基因組大的改變，形成抗原轉(zhuǎn)變。新病毒會(huì)感染新的宿主或輕松克服原有宿主對(duì)其產(chǎn)生的免疫力，從而可能形成流感暴發(fā)流行。甲型流感病毒有5N1,H7N2,H1N7,H7N3,H13N6,H5N9,H11N6,H3N8,H9N2,H5N2,H4N8,H10N7,H2N2,H8N4,H14N5,H6N5,H12N5等變種。根據(jù)宿主，主要有以下變種：禽流感，人類流感，豬流感，馬流感，狗流感。病毒基因組：8個(gè)單體（非配對(duì)）RNA鏈，編碼11個(gè)蛋白(HA,NA,NP,M1,M2,NS1,NEP,PA,PB1,PB1-F2,PB2)?？偦蚪M大小是13588bp。分割性質(zhì)基因組允許整個(gè)基因在不同的病毒載體的細(xì)胞同時(shí)存在。呼吸道病毒感染是臨床最常見的疾病之一，且病原學(xué)復(fù)雜。多種病毒具有感染力強(qiáng)、傳播快、潛伏期短、發(fā)病急等特點(diǎn)，及時(shí)、準(zhǔn)確識(shí)別病原體不僅是確診依據(jù)，也是合理選擇治療方案的基礎(chǔ)。甲型H1N1流感是由一種新型流感病毒引起的急性、人畜共患呼吸道傳染性疾病。。目前，正式上市的抗流感藥物大體分為兩類：M2離子通道阻斷劑和NA抑制劑。金剛烷胺(Amantadine)和金剛乙胺(Rimantadine)可有效抑制甲型流感病毒株的復(fù)制。神經(jīng)氨酸酶抑制劑是通過選擇性地抑制A、B型流感病毒的神經(jīng)氨酸酶，使病毒難以釋放，并促進(jìn)已釋放的病毒相互凝聚，繼而死亡。神經(jīng)氨酸酶抑制劑：扎那米韋（zanzmivir）和奧司他韋（Oseltamivir）兩種藥物，因?yàn)榱鞲胁《镜母哳l率變異，耐藥性毒株的比例呈明顯上升的趨勢(shì)。目前已經(jīng)測(cè)序的甲型流感病毒基因組共有5811個(gè)，共有421個(gè)基因型。其中[A,D,B,3A,A,2A,B,1A]（基因型H3N2）包括1899個(gè)基因組，[K,G,D,5J,F,1J,F,1E]（基因型H5N1）包括1067個(gè)基因組，[A,A,B,1B,A,1A,B,1A]（基因型H1N1）包括757個(gè)基因組。[K,G,E,9C,F,2B,F,1E]（基因型H9N2）包括80個(gè)基因組[C,I,G,3F,C,8B,E,1D]（基因型H3N8）包括83個(gè)基因組[C,F,H,7F,H,2G,E,2B]（基因型H7N2）包括103個(gè)基因組，宿主非人類。[B,A,C,1A,A,1B,A,1A]（基因型H1N1）包括108個(gè)基因組，宿主非人類。[C,F,E,7F,H,2G,E,2B]（基因型H7N2）包括1899個(gè)基因組H109序列比對(duì)結(jié)果H1序列與引物比對(duì)結(jié)果H3基因與引物序列比對(duì)H5基因與引物序列比對(duì)A流感病毒M基因與引物比對(duì)B流感病毒M基因與引物比對(duì)中國(guó)CDC使用軟件中國(guó)CDC使用引物序列國(guó)家流感中心推薦的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程第一章基本生物學(xué)實(shí)驗(yàn)SOP

第二章標(biāo)本采集SOP

第三章病毒分離SOP

第四章病毒鑒定SOP

第五章核酸檢測(cè)SOP

血清學(xué)檢測(cè)SOP

動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)SOP耐藥性檢測(cè)SOP

第九章其他SOP

第四章病毒鑒定流感/禽流感病毒紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)鑒定流感/禽流感病毒方法流感病毒神經(jīng)氨酸酶活性試驗(yàn)及其活性抑制試驗(yàn)禽流感H5N1病毒感染間接免疫熒光檢測(cè)技第五章核酸檢測(cè)禽流感病毒RT-PCR檢測(cè)人禽流感實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)禽流感病毒H5N1NASBA檢測(cè)分子鑒別診斷技術(shù)禽流感病毒H5N1NASBA檢測(cè)核酸序列依賴性擴(kuò)增（Nuclearacidsequence-basedamplification，NASBA）：快速等溫核酸擴(kuò)增，實(shí)時(shí)觀測(cè)結(jié)果。主要原材料：AMV逆轉(zhuǎn)錄酶、噬菌體T7RNA多聚酶、核糖核酸酶H、兩種特別設(shè)計(jì)的特異性寡核苷酸引物和分子信標(biāo)探針共同協(xié)作而完成。樣品檢測(cè)信號(hào)值（WTsignal）：在擴(kuò)增過程中分子信標(biāo)探針與靶基因發(fā)生特異性結(jié)合后，產(chǎn)生熒光信號(hào)的熒光信號(hào)被收集經(jīng)軟件轉(zhuǎn)換后的強(qiáng)度值，即WTsignal。判斷閾值（threshold）：在NASBA反應(yīng)過程中會(huì)產(chǎn)生熒光信號(hào)，閾值是判斷陰性或陽(yáng)性結(jié)果的熒光信號(hào)界線值，樣本熒光信號(hào)≥閾值者為陽(yáng)性，反之為陰性。分子鑒別診斷技術(shù).分子鑒別診斷技術(shù)（MolecularDifferentialDiagnosis,MDD）原理：靶序列富集多重PCR（TargetenrichedmultiplexPCR，Tem-PCR）和MultipleAnalysisProfiling（xMAP）技術(shù)有機(jī)結(jié)合。雜交反應(yīng)過程分子在顏色編碼的微球表面進(jìn)行反應(yīng)，對(duì)于每一種病原體，靶序列特異的捕獲探針與一組顏色編碼的微球之間形成特異的共價(jià)結(jié)合。在雜交懸浮體系中，標(biāo)記的PCR產(chǎn)物被結(jié)合有微球的探針捕獲。結(jié)果判定：Luminex100分析樣品時(shí)，經(jīng)過一套微流體系統(tǒng)檢測(cè)裝置，紅色激光識(shí)別病原體，綠色激光檢測(cè)雜交信號(hào)，即MFI值，根據(jù)MFI值的強(qiáng)弱從而顯示特定病原體的有無。SFDA批準(zhǔn)的產(chǎn)品1.甲型流感病毒抗原檢測(cè)試劑盒(Dot-ELISA法)(北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司)2.甲型H1N1流感病毒(2009)RNA檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)(北京金豪制藥股份有限公司)3.甲型H1N1流感病毒(2009)RNA檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)(中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司)4.甲型流感病毒核酸診斷試劑盒(PCR-熒光法)Inf.AFQ-PCRKIT(廣州華銀醫(yī)藥科技有限公司)5.乙型流感病毒核酸診斷試劑盒(PCR-熒光法)Inf.BFQ-PCRKIT(廣州華銀醫(yī)藥科技有限公司)6.甲型流感病毒抗原診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)Inf.AELISAKIT(廣州華銀醫(yī)藥科技有限公司)7.乙型流感病毒抗原診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)Inf.BELISAKIT(廣州華銀醫(yī)藥科技有限公司)病毒診斷方法專利（免疫）禽流感免疫膠體金診斷試紙條和測(cè)試卡鑒別診斷禽流感自然感染雞群酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的方法禽流感病毒抗原檢測(cè)方法及其金標(biāo)快速診斷試劑盒和制備方法一種重組甲型H1N1流感病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS1的原核表達(dá)、純化及其檢測(cè)方法的建立一種禽流感病毒H5亞型乳膠凝集檢測(cè)試劑盒及應(yīng)用鑒別診斷禽流感感染雞群的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法一種雞禽流感疫苗免疫與病毒野毒感染的膠體金免疫層析快速鑒別診斷試劑盒及應(yīng)用重組豬流感病毒NP抗原、其制備方法及在診斷中的應(yīng)用檢測(cè)和診斷流感病毒的篩選方法一種檢測(cè)H5N1亞型禽流感病毒的方法及其專用試劑盒一種能同時(shí)檢測(cè)人類和禽類禽流感病毒感染的生物芯片方法

一種禽流感病毒乳膠凝集檢測(cè)試劑盒及應(yīng)用

/sipo/zljs/hyjs-yx-new.jsp?recid=CN98813706.2&leixin=fmzl&title=%E6%A3%80%E6%B5%8B%E5%92%8C%E8%AF%8A%E6%96%AD%E6%B5%81%E6%84%9F%E7%97%85%E6%AF%92%E7%9A%84%E7%AD%9B%E9%80%89%E6%96%B9%E6%B3%95&ipc=C12Q1/70型高致病性禽流感的納米量子點(diǎn)檢測(cè)方法/sipo/zljs/hyjs-yx-new.jsp?recid=CN200810117227.9&leixin=fmzl&title=A%E5%9E%8B%E6%B5%81%E6%84%9F%E7%97%85%E6%AF%92%E6%A0%B8%E8%9B%8B%E7%99%BD%E6%8D%95%E8%8E%B7ELISA%E6%8A%97%E5%8E%9F%E8%AF%8A%E6%96%AD%E8%AF%95%E5%89%82%E7%9B%92%E5%8F%8A%E4%B8%93%E7%94%A8%E5%8D%95%E5%85%8B%E9%9A%86%E6%8A%97%E4%BD%93&ipc=C12N5/20(2006.01)I型流感病毒核蛋白捕獲ELISA抗原診斷試劑盒及專用單克隆抗體/sipo/zljs/hyjs-yx-new.jsp?recid=CN200710129838.0&leixin=fmzl&title=H5%E4%BA%9A%E5%9E%8B%E7%A6%BD%E6%B5%81%E6%84%9F%E7%97%85%E6%AF%92%E4%B8%AD%E5%92%8C%E8%A1%A8%E4%BD%8D%E6%A8%A1%E6%8B%9F%E8%82%BD%E5%8F%8A%E5%85%B6%E7%94%A8%E9%80%94&ipc=C07K7/08(2006.01)I亞型禽流感病毒中和表位模擬肽及其用途/sipo/zljs/hyjs-yx-new.jsp?recid=CN200780003646.3&leixin=fmzl&title=H5%E4%BA%9A%E5%9E%8B%E7%A6%BD%E6%B5%81%E6%84%9F%E7%97%85%E6%AF%92%E8%A1%80%E5%87%9D%E7%B4%A0%E8%9B%8B%E7%99%BD%E7%9A%84%E5%8D%95%E5%85%8B%E9%9A%86%E6%8A%97%E4%BD%93%E6%88%96%E5%85%B6%E7%BB%93%E5%90%88%E6%B4%BB%E6%80%A7%E7%89%87%E6%AE%B5%E5%8F%8A%E5%85%B6%E7%94%A8%E9%80%94&ipc=G01N33/53(2006.01)I亞型禽流感病毒血凝素蛋白的單克隆抗體或其結(jié)合活性片段及其用途/sipo/zljs/hyjs-yx-new.jsp?recid=CN200820166369.X&leixin=syxx&title=H5%E4%BA%9A%E5%9E%8B%E7%8C%AA%E6%B5%81%E6%84%9F%E7%97%85%E6%AF%92%E6%8A%97%E4%BD%93%E6%A3%80%E6%B5%8B%E8%AF%95%E5%89%82%E7%9B%92&ipc=G01N33/569(2006.01)I亞型豬流感病毒抗體檢測(cè)試劑盒病毒診斷方法專利（核酸）一種基于液相芯片檢測(cè)禽流感病毒H5N1亞型的方法同步鑒別診斷新城疫病毒和禽流感病毒的核酸檢測(cè)試劑盒

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