免疫組化相關(guān)

抗原的定義外來(lái)非該種屬物質(zhì)：物質(zhì)(如細(xì)菌、

)花粉由于其能導(dǎo)致免疫反應(yīng)，所以又被稱為免疫原外來(lái)物質(zhì)的表面部分應(yīng)具有一定的大小一般由蛋白或糖類構(gòu)成抗原的定義抗體不能識(shí)別整個(gè)抗原與抗原表面的物理和化學(xué)結(jié)構(gòu)特異性的反應(yīng)通過(guò)“鎖匙”耦連的關(guān)系連接到這些結(jié)構(gòu)之上結(jié)合的強(qiáng)度取決于抗原和抗體的化學(xué)和結(jié)構(gòu)相互作用抗原能夠被抗體結(jié)合的部位稱為抗原表位或抗原決定簇與抗原表位特異性結(jié)合的抗體表位或結(jié)構(gòu)稱為表位（idiotype）抗原結(jié)合位點(diǎn)抗原結(jié)合區(qū)域的三維構(gòu)象和化學(xué)屬性決定了能夠與抗體結(jié)合的物質(zhì)。Antigen

bindingFragment

(Fab

)抗體可以是多克隆(識(shí)別多種表位)單克隆(僅識(shí)別一個(gè)表位)“雞尾酒“(含有多種抗體的混合物，能夠識(shí)別多個(gè)抗原表位)可以來(lái)自于不同動(dòng)物種屬，如多克隆–兔、

、大鼠、豬、馬等。單克隆–小鼠、大鼠、兔等?？梢允钦麄€(gè)分子或片段可以通過(guò)多種方式提供（濃縮液、工作液、凍干粉）多克隆抗體直接與很多表位（靶結(jié)合位點(diǎn)）反應(yīng)來(lái)源于動(dòng)物產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)收集血液從

中提取多用途S-100Herceptin測(cè)試+人抗原注射到動(dòng)物體內(nèi)收集動(dòng)物血液，并獲取含抗體的通過(guò)產(chǎn)生免疫反應(yīng)產(chǎn)生抗體多克隆抗體多克隆抗體使用易生產(chǎn)用途廣直接針對(duì)多個(gè)抗原位點(diǎn)，因此敏感度高易于篩選或組合抗體缺點(diǎn)特異性低易產(chǎn)生較高背景批間差異較大–

其穩(wěn)定性依靠同一個(gè)動(dòng)物目前更傾向于使用單克隆抗體單克隆抗體直接針對(duì)單個(gè)抗原表位高特異性低靈敏度例如，大部分的CD標(biāo)志物來(lái)源于來(lái)源于動(dòng)物的免疫反應(yīng)收集B細(xì)胞將B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合培養(yǎng)增殖細(xì)胞從培養(yǎng)液中收集

的抗體人抗原注射入動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生免疫反應(yīng)生產(chǎn)多克隆抗體單克隆抗體收獲脾細(xì)胞淋巴細(xì)胞增殖免疫反應(yīng)使激活的細(xì)胞增殖單克隆抗體將B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合

(雜交瘤)并在培養(yǎng)基中生長(zhǎng):++++單克隆抗體抗表位A抗表位C抗表位B抗表位D分離克隆單獨(dú)培養(yǎng)每個(gè)克隆被分離到獨(dú)立的試管中單克隆抗體抗表位A抗表位C抗表位B抗表位D單克隆抗體:不同克隆特異性針對(duì)不同的表位單克隆抗體單克隆抗體小鼠是生產(chǎn)單克隆抗體最常用的宿主動(dòng)物價(jià)格低廉的宿主成本效應(yīng)能夠與骨髓瘤融合易操作為大多數(shù)生物技術(shù)所采用用途可以定位特定的抗原表位–特異性更高的精確度增強(qiáng)降低背景培養(yǎng)可批間差異小缺點(diǎn)需要

的技術(shù)

操作不如多克隆抗體靈敏低親和力(結(jié)合靶單被的能力弱)一般需要非常的前處理方法或特殊的緩沖液/稀釋液來(lái)修飾抗體的靶位一般需要更高的濃度LCA–淋巴瘤抗體:CD45顯色劑:DAB陽(yáng)性部位:膜Stains

all

theepitheliallayersStains

theducts

andglandsAnti-Pankeratin–正常對(duì)照組織抗體:Pancytokeratin顯色劑:DAB陽(yáng)性部位:細(xì)胞質(zhì)Vimentin–正常對(duì)照組織抗體:Vimentin顯色劑:DAB陽(yáng)性部位:細(xì)胞質(zhì)抗黑色素–黑色素瘤抗體:lanosome顯色劑:堿性磷酸酶陽(yáng)性部位:細(xì)胞質(zhì)TumorPigment兔單克隆抗體兔單克隆抗體直接與單個(gè)表位反應(yīng)生產(chǎn)方式為多克隆與單克隆方法的結(jié)合：多克隆組分鑒定抗原(蛋白、多肽、cDNA、小分子)靶分子(抗原)免疫兔子測(cè)試 滴度單克隆組分選擇含有最佳滴度的兔子進(jìn)行融合*收集能夠結(jié)合抗原的雜交瘤克隆選擇最好的雜交瘤(理想的雜交瘤)對(duì)理想的雜交瘤再進(jìn)行克隆，并從中獲得單克隆抗體*第4步中提到的使用炎癥腫瘤細(xì)胞（類似雜交瘤）融合為專利技術(shù)兔單克隆抗體Ventana

c-KIT靈敏度特異性干凈的背景專有的克隆(9.7)可靠的供應(yīng)由Ventana驗(yàn)證由Ventana生產(chǎn)Orig.

polyclonal

-

normalOrig.

polyclonal

-

GISTRabbit

Monoclonal

-GISTRabbit

Monoclonal

-

normalER克隆:SP1顯色劑:DAB陽(yáng)性部位:胞核免疫組化抗體組什么樣的治療方案會(huì)有效?Her2

–HerceptinER,

PR

-

Tamoxifen腫瘤生長(zhǎng)速度?Ki-67

–

Protein雌激素受體(ER)?雌激素受體?–

雌激素是一種正常的類固醇激素，能夠刺激乳腺內(nèi)皮生長(zhǎng)–

激素受 于細(xì)胞核中染色的成份?ER

直接與位于細(xì)胞核中的正常細(xì)胞和成瘤細(xì)胞結(jié)合為什么重要?受體 的腫瘤復(fù)發(fā)率高受體陽(yáng)性的腫瘤可以通過(guò)激素治療，如它

（Tamoxifen）和Aromatase抑制劑邊注：Tamoxifen能夠與雌激素受體結(jié)合，達(dá)到組織激素與受體結(jié)合的目的。是一種競(jìng)爭(zhēng)抑制。Aromatase阻止和肝臟雌激素。大多數(shù)采用Aromatase治療的婦女都已過(guò)了絕經(jīng)期。孕激素受體(PR)?孕激素受體?–孕激素是體內(nèi)正常的類固醇激素，能夠加快導(dǎo)管成熟，并切其受體由雌激素介導(dǎo)（沒(méi)有ER就不會(huì)有PR）。染色靶分子?PR直接與正常細(xì)胞和瘤細(xì)胞核里的

PR蛋白反應(yīng)為什么重要?受體 的腫瘤復(fù)發(fā)率高–

受體陽(yáng)性的腫瘤可以應(yīng)用激素治療，如如它

（Tamoxifen）和Aromatase抑制劑。邊注：通過(guò)使用如它（Tamoxifen）和Aromatase抑制劑抑制雌激素，不會(huì)再產(chǎn)生孕激素Ki-67染色目標(biāo)?增殖細(xì)胞：細(xì)胞增殖速度過(guò)快為什么重要?該抗原在細(xì)胞中的高表達(dá)意味著腫瘤的侵襲性更強(qiáng)。好的Ki-67

克隆染的是細(xì)胞核NucleoliHER-2/neu?HER-2/neu?又稱為ErbB2

or

c-erbB-2屬于EGFR該蛋白加速癌細(xì)胞生長(zhǎng)染色靶標(biāo)?–

癌細(xì)胞表面大量增生的HER-2/neu蛋白為什么重要?高水平的HER-2/neu

存活率低HER-2/neu

陽(yáng)性表明

采用Herceptin?治療有效。邊注：Herceptin是人單克隆抗體，嫩構(gòu)結(jié)合HER-2蛋白并激活免疫系統(tǒng)使細(xì)胞的生長(zhǎng)停止在低水平，并且下調(diào)細(xì)胞表面的HER-2，它的工作原理與抗體的染色原理類似。兔多克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)兔識(shí)別的抗原及表位與小鼠或大鼠不同源更高的特異性更高的靈敏度廣闊的應(yīng)用范圍治療–藥物開發(fā)篩選標(biāo)志表皮結(jié)構(gòu)皮膚及皮膚附屬神經(jīng)結(jié)構(gòu)感覺(jué)神經(jīng)大腦顱神經(jīng)眼脊髓脊髓動(dòng)感神經(jīng)間葉細(xì)胞來(lái)源的組織骨組織肌肉組織循環(huán)組織腎組織內(nèi)皮或腺上皮組織.食道和咽胰腺甲狀腺副甲狀腺胸腺正常組織癌神經(jīng)腫瘤肉瘤淋巴瘤相關(guān)腫瘤HMW

cytokeratinS-100VimentinMSADesminLCALMW

cytokeratin抗體陽(yáng)性