福爾馬林固定石蠟包埋ffpe樣品制備及預處理用于rnascope2.5分析第一部分

研究用途在物中RNAscope?在公開物中描述使用本產(chǎn)品的實驗流程時，請稱其為RNAscope?分析，并：WangF,FlanaganJ,SuN,WangL-C,BuiS,NielsonAWuXVoH-TMaX-JandLuoY.RNAscope?:ANovelInSituRNAysisPlatformforFormalinFixedParaffinEmbeddedTissues.J.Mol.Diagnostics,2012,14:22-29。盡管本手冊已盡最大可能確保準確性，但對于因使用本信息導致的任何錯誤、疏忽或損失，AdvancedCellDiagnosticsInc?2015.AdvancedCellDiagnostics,Inc.保留所利第1章產(chǎn)品信 RNAscope?2.5試劑 第2章開始之 第3章樣品及預處 FFPE切片 RNASCOPE?抗原修復試劑 RNASCOPE?雙氧水處 RNASCOPE?抗原修復試劑處 疑難解 附錄A組織預處理條 附錄B安全 獲取 獲得支 聯(lián)系信 1關于本指產(chǎn)品說

本用戶手冊提供在載玻片上進行福爾固定的、石蠟包埋(FFPE)組織樣品及預處理的適用指南及操作手冊。載玻片隨后可用RNAscope?2.5試劑盒進行分析。RNAscope?2.5試劑盒附有單獨的e.分析用戶手冊。必須在正確用戶手冊的指導下進行RNAscope?分析。請nical-support/user-manuals，RNAscope?2.5分析用RNAscope?2.5分析采用創(chuàng)新的專利原位雜交(ISH)方法，將固定于載玻片上的樣品中每個細胞中的單個交，然后與一系列信號放大分子結合，最后進行信號檢測（圖1）?？蛇M行單通道、雙通道、多通道和自動化分析。e2分析流程如61示，根據(jù)分析類型，可6-10時內完成，或方便地分兩e?.分析須使用經(jīng)適當和預處理的樣品。pe.分析可兼容多種樣品類型，包括：福爾固定石蠟包埋(FFPE)組織、新鮮冷凍組織、固定冷凍組織、組織(TMA)和細胞樣品。信息請或聯(lián)系 2：與靶RNA雜 當?shù)那衅?，以靶RNA。1流程概

與靶標mRNA雜交。

使用兩個獨立的信號放大系統(tǒng)檢測兩個靶標RNA。探針與一系列信HRP或AP標記的探針檢測RNA。

RNA。試劑盒內含物及條RNAscope?2.5RNAscope?分析需要使用RNAscope?探針和RNAscope?2.5試劑盒。如果您使用Ventana?DISCOVERYXT或ULTRA系統(tǒng)進行自動化分析，則必須使用RNAscope?VS探針和RNAscope?VS試劑盒。探針和試劑盒需分別。RNAscope?2.5

訂購每個RNAscope?2.5試劑盒的試劑足以用于染色約20個面積約為20mmx20mm的組織切片。使用較大的組織切片時，每個試劑盒包含3個子試劑盒，包括一個抗原修復液試劑盒（貨號322000）、RNAscope?雙氧水和蛋白酶（貨號RNAscope?雙氧3mLx22-8°RNAscope?抗原修復試70mLx415-30°RNAscope?蛋白酶4.5mLx12-8°所需材料與設RNAscope?2.5析需要使用以下材料和重點！該系統(tǒng)是唯一經(jīng)驗證的RNAscope?2.5析系統(tǒng)HybEZ?雜交系統(tǒng)（110VAC，貨號310010；220VAC，貨號310013）專為RNAscope?2.5分析中的雜交和孵育步驟設計。RNAscope?分析的孵育步驟需要在濕潤環(huán)境下進行，以防止切片變干。關于HybEZ?雜交系統(tǒng)的使用方法，請參閱《HybEZ?雜交系統(tǒng)用戶手冊》 support/user-manuals或培訓： HybEZ?雜交爐（1102201310010HybEZ?濕度控制盤（帶蓋1HybEZ?載玻片架（可容納20載玻片1HybEZ?2—HybEZ?加濕紙15ImmEdge?阻水筆（必需VectorH-SuperFrost?Plus（必需Fisher12-550-100AmericanMasterTechFisherX3P10%中爾————AmericanMasterAmericanMasterTechAmericanMaster—————玻璃燒杯（1L2—熱板（能維700ML體100+/-Fisher11300——— 的主要用品供應商。其他地區(qū)的用戶可查閱當?shù)赜闷饭痰漠a(chǎn) 2在您在您第一次對樣品進行RNAscope?分析之前 重要流程指

FFPERNAscope?對照玻片（人源性樣品對照玻片HeLa3100453T3，貨號310023）上使用陽性和對照探針進行分析請務必在您的樣品上測試陽性和對照探針，以評價樣品RNA的質量和最優(yōu)通透性3 第3章樣 及預處下面的實驗方案說明了福爾固定石蠟包埋(FFPE)樣品的和預處理方法。對于其他樣品類型和 獲取的實驗方案和指南。 件或nical-support/solutionsFFPE切片10%中爾1X100SuperFrost?Plus玻

警告！請適當處理生物樣本。重點！固定時間少于16時或長于32小時將影RNAscope?分析的結果用1XPBS樣品將石蠟切片放入40-45°C的水浴，將切片貼附到SUPERFROST?PLUS載玻片上。 用于RNAscope?2.5析的FFPE

重點FFPE100%停止點可選?？酒瓿珊罅⒓词褂?，或在室溫下使用干燥劑，時間不超過1停止點可選?？酒瓿珊罅⒓词褂?，或在室溫下使用干燥劑，時間不超過1周 致樣RNA降解如果烤片完成后繼續(xù)分析，請在烤片時準備用于以下實驗方案的材料：下一節(jié)的FFPE切片脫石蠟頁的樣品預處理RNAscope?2.5析材頁的在兩Tissue-Tek?200mL在兩Tissue-Tek?200mL鮮100%EtOH將載玻片放入TissueTek?100%EtOH皿中使用新鮮100%EtOH復步67樣品預處

立即進行RNASCOPE?2.5分析由RNAscope?試劑盒提供的材RNASCOPE?雙氧RNASCOPE?抗原修復RNASCOPE?蛋白酶玻璃燒杯（1L2HybEZ?雜交Tissue-Tek?載玻片Tissue-Tek?染色ImmEdge?

HybEZ雜交爐，將溫度40°CRNASCOPE?抗原修復試劑重點！使用前煮沸1XRNASCOPE?抗原修復試劑的時間不得超過30分鐘向燒杯中倒入1瓶(70mL)10XRNASCOPE?抗原修復試劑，然后加入630mL蒸餾水，得到700mL新鮮的1XRNASCOPE?抗原修復試劑。充分混合。1XRNASCOPE?抗原修復試劑的燒杯放在熱板上。用鋁箔覆蓋燒杯，將熱板調至高檔10-151XRNASCOPE?98-102°C)RNASCOPE?雙氧水處理將已脫石蠟的載玻片置于實驗臺上，添5-8滴RNASCOPE?RNASCOPE?雙氧水，每次處理一個載玻片。立即將載玻片浸沒在盛滿蒸餾水的Tissue-Tek?染色皿中的Tissue-Tek?載玻片架上。RNASCOPE?抗原修復試劑處理

用鑷子將載玻片架非常緩慢地1XRNASCOPE?抗原修復試劑中。用鋁箔覆蓋燒杯，按照第17頁的附錄A組織預處理條件中的表格給出的時間對載玻片進行沸水浴處理。用鑷子立即將熱載玻片架從1XRNASCOPE?抗原修復試劑中轉移到盛有蒸餾水的染色皿中。RNASCOPE?抗原修復試劑中冷卻載玻片阻水組分鐘將載玻片置于HybEZ?載玻片架中，加入約5滴RNASCOPE?蛋白酶plus，使其完切片的每個區(qū)域。注意：如果您要執(zhí)行第17頁的附錄A組織預處理條件，請在該步驟使用3個梯度稀釋的RNASCOPE?蛋白酶Plus，每個濃度均有陽性和對照玻片。如果您之前對預處理步驟進行了優(yōu)化，請3。HybEZ?雜交爐中取HybEZ?HybEZ?載玻片架放入盤中。蓋上蓋，密封，將盤放17注意：必要，可在此步驟期間準備RNAscope?2.5分析所需材料從雜交爐取HybEZ?濕度控制盤。從盤中取出HybEZ?滿蒸餾水的Tissue-Tek?染色皿中的Tissue-Tek?載玻片架上。進行RNAscope?2.5分疑難解

附錄A組織預處理條采用不同于第1部分《FFPE組織樣品和預處理指南》（文件322452）中的樣品實驗方案組織預處理條注意：請采用的組織固定時間。如果固定過度或固定不足，RNAscope?分析會出現(xiàn)明顯的信號損失根據(jù)您的組織類型（見下節(jié)），RNAscope?抗原修復試劑和RNAscope?蛋白PlusRNAscope?抗原修復試151530RNAscope?蛋白酶153030RNASCOPE?抗原修復試劑的處理時間改為8分鐘，將RNASCOPE?蛋白酶Plus的處理時間改為15分鐘。 如果您的樣品在新鮮10%NBF中成功固定（上述步驟2），請參照下表的組織特異性預處理條件。關于此 小鼠大腸腸腦脾肝腎人肺肺淋淋頸頸腦腦頭頸肝腎痣細胞沉淀物，用10%NBF—HeLa細胞，用10%福 PBS/ACD對—*化學品化學品全(MSDS)。如需獲取MSDS， 請確保廢棄物的、轉移、、棄置符合所有地方、州/省和/或生物危害安全

警告！生物危害。生物樣品（例如組織、體液、病原物以及人和其他動物的血液）具有傳配備的設施在有適當（例如物理設備）防護的條件下完成。在操作有潛在傳染性危害的物質之前，操作應根據(jù)適用的規(guī)定和公司/機構要求接受培訓。清閱讀并遵循以下適用的指南和/或規(guī)定要求：衛(wèi)生及公共服務部的微生物和生物醫(yī)學生物安全性指南，參見 職業(yè)安全性和健康標準，血液病原體(29CFR§1910.1030)，參見： 您的公司/機構關于潛在傳染性物質的操作/關于生物危害性指南的其他外信息，請 查詢關于生物危害和生物安全性預防措施的地方性指南和法律，參照世界衛(wèi)生組織（WHO）《生 獲得支聯(lián)系信

安全說明書(SDS)可通過以下獲得： 是由Ad