外周血鐵調(diào)素25 mRNA及蛋白表達(dá)水平在白血病患兒中的臨床價值

外周血鐵調(diào)素25mRNA 及蛋白表達(dá)水平在白血病患兒中臨床價值楊衛(wèi)紅;李培嶺;李樹軍【摘要】ObjectiveTostudytheexpressionofHepc-25mRNAandproteininperipheralbloodofchildrenwithleukemiaandtoexplorethecorrelationbetweenexpressionlevelandefficacyofchemotherapy.Method93casesofchildrenwithleukemiawhowereadministeredwithMRregimenwereincludedasstudygroup,whileanother20casesofhealthychildrenwereenrolledascontrolgroup;peripheralbloodwasextractedtodeterminetheHepc-25mRNAandpro-teinlevelsusingRT-PCRandELISA;thecorrelationbetweenHepc-25andefficacywasanalyzed.ResultHepc-25mRNAandproteinlevelsinstudygroupweresignificantlyhigherthanthoseinthecontrolgroup(P<0.05).Aftertreat-ment,Hepc-25mRNAandproteinlevelsinchildrenwithresponseweresignificantlydecreased(P<0.05),andtherewerenosignificantdifferencesbeforeandaftertreatmentinchildrenwithoutresponse(P>0.05).ConclusionTheexpressionofHepc-25inperipheralbloodofchildrenwithleukemiaishigh,whichisusefulinpredictingrecurrence,andiscloselycorrelatedtheefficacyofchemotherapy.%（ALL）患兒外周血鐵調(diào)素25（Hepc-25）mRNA 和蛋白表達(dá)情況，并探討其與ALL化療療效的關(guān)系。方法選取接受MR方案治療的白血病患兒93例作為觀察組，另選取同20例健康體檢兒童作為對照組。采用實時定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定兩組外周血中Hepc-25mRNA 和蛋白表達(dá)水平。分析Hepc-25與ALL療效的關(guān)系。結(jié)果白血病患兒外周血Hepc-25mRNA 及蛋白表達(dá)水平均高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.05）；經(jīng)治療好轉(zhuǎn)組患兒外周血Hepc-25mRNA 及蛋白表達(dá)水平較治療前均下降（P﹤0.05）；而治療無效組患兒Hepc-25mRNA 及蛋白表達(dá)水平較治療前比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P﹥0.05）。結(jié)論ALL患兒外周血Hepc-25過表達(dá)對疾病復(fù)發(fā)有一定的預(yù)測價值，白血病患兒的化療療效有密切關(guān)系?！栋┌Y進(jìn)展》2016(014)004【總頁數(shù)】4頁(P360-362,365)【關(guān)鍵詞】急性淋巴細(xì)胞白血病;患兒;Hepc-25;化療療效【作者】楊衛(wèi)紅;李培嶺;李樹軍【作者單位】4531000;4531000;4531000【正文語種】中文【中圖分類】R733.7急性淋巴細(xì)胞白血?。╝cutelymphoblasticleukemia，ALL）是一類造血干細(xì)胞貧血、出血、感染、發(fā)熱以及肝、脾、淋巴結(jié)腫大和骨骼疼痛［1-2］。白血病的5病因?qū)W的研究也獲得了一些進(jìn)展［3-5］。鐵調(diào)素（hepcidin，Hepc）是一種由細(xì)胞系統(tǒng)鐵釋放，是一種重要的負(fù)性鐵調(diào)節(jié)激素［6-7］Hepc有密切聯(lián)系，近幾年的研究證實，HepcHepc缺乏則導(dǎo)致多數(shù)家族性血色沉著病和無效性紅細(xì)胞生成性貧血伴隨鐵離子吸收增加，其中，Hepc-25是其主要活性部分［8-10］。目前，國內(nèi)外對Hepc-25在白血病中的發(fā)生與疾病進(jìn)展機制研究鮮見報道，本研究觀察分析了白血病患兒外周血Hepc-25mRNA和研究對象經(jīng)新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，選取2011年2月至2014年293ALL［11］；②排除63302～13歲，平均年齡（8.7±2.4）歲。所有患兒均根據(jù)文獻(xiàn)11］的標(biāo)準(zhǔn)化療方案進(jìn)行治20儀器與試劑MPBiomedicals公司；SYBRGreen通用型qPCRMasterMixRoche生物公司；RT-PCR擴增儀購自Bio-RadTAKARA公司；Hepc-25蛋白ELISAR&D公司。檢測方法RT-PCR分析外周血Hepc-25mRNA 變化抽取觀察組患兒治療前與治療后抗凝外周血各5m并抽取對照組健康兒童外周血作為對照。根據(jù)RNA提取試劑盒說明書和逆轉(zhuǎn)錄試劑盒提取RNA，并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。根據(jù)GeneBank供的Hepc-25序列，設(shè)計如下引物：Hepc-25-F：5'-ACGGCACGATCGCACTGAGC-3' ；Hepc-25-R：5'-TCGCCTCCTTCGCCTCTGGA-3' 。。采用實時熒光定量PCR儀析Hepc-25mRNA 的表達(dá)水平。ELISAHepc-25蛋白表達(dá)水平抽取觀察組患兒治療前和治療后2m4000r/min10minELISAELISAHepc-253492nm波長測OD值。采用同種方法檢測對照組兒童外周Hepc-25蛋白表達(dá)水平。隨訪與觀察終點治療后根據(jù)《兒童急性淋巴細(xì)胞白血病診療建議（第三次修訂草案）準(zhǔn)進(jìn)行療效評價［11］，（完全緩解+部分緩解）例數(shù)/總例數(shù)×100%，未緩解視為治療無效。隨訪至2014年12月，對93例患兒均完成全部隨訪觀察，隨訪率為100%。統(tǒng)計學(xué)方法所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0軟-件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差tPearsonP＜0.05意義。兩組兒童外周血Hepc-25mRNA 和蛋白表達(dá)水平比較結(jié)果顯示，觀察組患兒外周血Hepc-25mRNA 水平高于對照組健康兒童（P=0.008）；Hepc-25差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（1）觀察組患兒治療前后外周血Hepc-25mRNA 和蛋白表達(dá)水平比較觀察組患兒經(jīng)治療后隨訪結(jié)果顯示，完全緩解14例，部分緩解47例，未緩解例。好轉(zhuǎn)率為64.89%。根據(jù)療效評價結(jié)果將觀察組分為好轉(zhuǎn)組（61例）與無效組（32例），好轉(zhuǎn)組患兒治療前外周血Hepc-25mRNA 和蛋白表達(dá)水平均低于無效組患兒，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.014P=0.007）；治療后好轉(zhuǎn)組患兒Hepc-25mRNA 和蛋白表達(dá)水平亦低于治療前（P＜0.01、P=0.012）；而無效組患兒Hepc-25mRNA 和蛋白表達(dá)水平較治療前比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。（表2）2.3Hepc-25mRNA 及蛋白表達(dá)水平與療效的關(guān)系如上結(jié)果所述，Hepc-25mRNA 和蛋白表達(dá)水平較高的患兒療效較差，而Hepc-25mRNA 和蛋白表達(dá)水平較低的患兒療效較好。相關(guān)性分析顯示mRNA 和蛋白表達(dá)水平與患兒的療效呈負(fù)相關(guān)（r=-1.032，P＜0.05）。無定論，因而較缺乏針對性的病因預(yù)防手段［12-13］。根據(jù)白血病細(xì)胞不成熟的現(xiàn)貧血、出血和感染癥狀［14］。Hepc-25具有廣譜殺菌、抑菌作用，屬于防御性蛋白家族。目前國內(nèi)外多項研究已證實Hepc-25是Hepc的主要活性成分。Hepc由肝細(xì)胞分泌，又叫肝臟抗菌多肽。Hepc作為一種炎癥急性期反應(yīng)蛋白，積極參與了機體對貧血、組織缺氧和血等與鐵代謝相關(guān)性疾病中也具有一定作用［15-17］。研究顯示，貧血、組織缺HepcHepc-25還與多種炎性和轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)，它們共同影響了炎性反應(yīng)的發(fā)生［18-20］。Nicolas［21］對慢性炎癥和貧血小鼠尿液的分析結(jié)果顯示，與對照組比較，Hepc的升高可達(dá)100倍，而在較輕的炎性疾病中，尿液中Hepc-25相應(yīng)減少，且與血清急性期反應(yīng)蛋白鐵蛋白水平成正比。陳姣等［22］采用RT-PCR和ELISA法分析了54例多發(fā)性骨髓瘤患者外周血Hepc-25mRNA 及蛋白表達(dá)水平，研究Hepc-25的動態(tài)變化與患者臨床表現(xiàn)的相關(guān)性及對預(yù)后的臨床預(yù)測價值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，患者的Hepc-25蛋白表達(dá)水平高與慢性貧血密切相關(guān)，且較高水平的Hepc-25蛋白表對臨床復(fù)發(fā)具有一定的預(yù)測價值，并與患者療效、預(yù)后有密切關(guān)系。本研究檢測了白血病患兒外周血中Hepc-25mRNA 和蛋白表達(dá)水平，研究結(jié)果顯示，與對照組比較，白血病患兒外周血中Hepc-25mRNA 和蛋白表達(dá)水平均升高提示Hepc-25蛋白表達(dá)水平是白血病發(fā)生過程中較敏感指標(biāo)，并有可能成為白血病臨床輔助診斷指標(biāo)。另外，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，好轉(zhuǎn)組患兒Hepc-25mRNA 和蛋白表達(dá)水平低于無效組患兒，提示Hepc-25mRNA 和蛋白表達(dá)水平可作為臨床判斷白血病患兒化療療效的預(yù)測指標(biāo)。好轉(zhuǎn)組患兒在接受治療后Hepc-25mRNA 和蛋白表達(dá)水平下降，無效組患兒治療前后Hepc-25mRNA 和蛋白表達(dá)水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。進(jìn)一步說明Hepc-25mRNA 和蛋白表達(dá)水平與白血病患兒化療療效存在密切關(guān)系，原因可能是Hepc-25蛋白是一種炎癥急性期蛋白，其水平代表患兒機體炎性水平的高低，炎性水平愈高，則治療效果越不佳。綜上所述，白血病患兒體內(nèi)Hepc-25mRNA 和蛋白表達(dá)水平高于正常兒童，且與患兒的化療療效密切相關(guān)，對白血病患兒的臨床治療與復(fù)發(fā)診斷亦具有指導(dǎo)意義?！鞠嚓P(guān)文獻(xiàn)】［1］LuXT.Therapeuticstrategiesforchildhoodhigh-riskacutelymphoblasticleukemiaDaXueXueBao，2013，45（2）:327-332.［2］2008，15（2）:355-357.［3］KarakaZ，KoBS， 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