簡(jiǎn)介抗菌肽課件

簡(jiǎn)介抗菌肽

2011年3月抗菌肽來(lái)源動(dòng)物產(chǎn)生抗菌肽動(dòng)物源抗細(xì)菌肽這個(gè)研究領(lǐng)域最為火熱，主要來(lái)源是動(dòng)物的皮膚，分泌腺，腸道，肺，血管，等黏膜面和白細(xì)胞。馬艷.黃芪等四種中藥誘導(dǎo)小鼠肺組織β－防御素2、3的基因表達(dá)[D].四川大學(xué)，2006.舉例：黃芪等四種中藥誘導(dǎo)小鼠肺組織β-防御素2、3的基因表達(dá)選擇健康小鼠，雌雄各半，分為4個(gè)實(shí)驗(yàn)組和2個(gè)對(duì)照組（每組6只），4個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別為黃芪、魚(yú)腥草、板藍(lán)根及香菇多糖4個(gè)藥物組，每個(gè)藥物組再分成2個(gè)劑量組。對(duì)照組分為脂多糖陽(yáng)性對(duì)照和生理鹽水陰性對(duì)照組。24小時(shí)后處死小鼠，取右肺組織約50mg，提取總RNA，以β-防御素2和β-防御素3為引物及β-肌球蛋白為內(nèi)參引物，使用二步法RT-PCR擴(kuò)增得到特異性產(chǎn)物。半定量檢測(cè)小鼠肺組織B．防御素2，3的表達(dá)水平，各樣本防御素2、3的mRNA水平用防御素2，3與β-actin的校正光密度值之比表示。結(jié)論：1、β-防御素2、3在小鼠肺組織呈誘導(dǎo)表達(dá)。2、中藥黃芪能夠誘導(dǎo)β-防御素2、3在小鼠肺組織表達(dá)增加，且呈劑量依賴性。3、沒(méi)有檢測(cè)到中藥魚(yú)腥草、板藍(lán)根和香菇多糖誘導(dǎo)小鼠肺組織β-防御素2、3基因表達(dá)上調(diào)。。郭雅靜.黃芪等中藥誘導(dǎo)大鼠子宮組織β－防御素的基因表達(dá)及其分子克隆[D].蘭州大學(xué)，2009.郭雅靜用黃芪注射液、苦參注射液、紅芪注射液、雙黃連口服液和黃芩口服液灌胃大鼠每天0.3ml，于第7天處死大鼠提取子宮組織RNA，用RT-PCR法檢測(cè)大鼠β－防御素－2基因的表達(dá)情況，并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行了純化、克隆及測(cè)序。研究顯示黃芪、紅芪和苦參等中藥可以誘導(dǎo)大鼠子宮β－防御素－2基因的表達(dá)，提示可以利用這些中藥來(lái)增強(qiáng)局部組織的免疫力，以達(dá)到殺滅病原微生物的作用，這可能是中藥抗感染的作用機(jī)理之一。趙玉蓉、陳清華、賀建華等.牛膝多糖對(duì)斷奶仔豬抗菌肽Protegrin-1mRNA表達(dá)的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2008，20（1）：80－84.

趙玉蓉等研究了牛膝多糖對(duì)斷奶仔豬抗菌肽Protegrin-1mRNA表達(dá)的影響。仔豬基礎(chǔ)日糧中分別添加0.05%牛膝多糖、0.10%牛膝多糖、0.15%牛膝多糖，飼喂28d。提取股骨骨髓中的RNA，采用半定量RT-PCR法，以18SrRNA為內(nèi)標(biāo)，檢測(cè)PG-1mRNA相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果表明，日糧中添加牛膝多糖均不同程度地促進(jìn)了斷奶仔豬骨髓抗菌肽PG-1mRNA的表達(dá)。與空白對(duì)照組相比，0.05%、0.10%、0.15%牛膝多糖組分別使斷奶仔豬PG-1mRNA的表達(dá)量增加14.9%、36.4%和7.3%；即牛膝多糖顯著促進(jìn)了斷奶仔豬骨髓中抗菌肽PG-1mRNA的表達(dá)。啟示：既然動(dòng)物抗菌肽是通過(guò)誘導(dǎo)產(chǎn)生，是否可以在動(dòng)物飼料開(kāi)發(fā)上使用中藥這種誘導(dǎo)劑，誘導(dǎo)動(dòng)物機(jī)體抗菌肽例如肺臟β-防御素2、3基因表達(dá)，產(chǎn)生β-防御素2、3，提高機(jī)體抗病能力

中藥與酵母發(fā)酵或與雙歧桿菌發(fā)酵飼喂家禽來(lái)檢測(cè)家禽體內(nèi)抗菌肽及檢測(cè)家禽的免疫指標(biāo)，從而開(kāi)發(fā)動(dòng)物飼料。黃粉蟲(chóng)抗菌肽韓靜菲.黃粉蟲(chóng)抗菌肽的誘導(dǎo)、生物學(xué)活性測(cè)定及初步分離純化[D],吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)采用不同的誘導(dǎo)方法對(duì)黃粉蟲(chóng)進(jìn)行誘導(dǎo)，分別采用了紫外線誘導(dǎo)法、超聲波誘導(dǎo)法、針刺誘導(dǎo)法、菌液浸泡誘導(dǎo)法、饑餓誘導(dǎo)法、菌液注射誘導(dǎo)法等方法，每種誘導(dǎo)方法分別采用不同劑量或不同的誘導(dǎo)時(shí)間，且誘導(dǎo)后分別培養(yǎng)不同的時(shí)間，之后取其血淋巴并通過(guò)進(jìn)行抑菌圈試驗(yàn)確定其是否已經(jīng)產(chǎn)生抗菌活性物質(zhì)，若產(chǎn)生則觀察其抗菌活性的強(qiáng)弱，從而篩選出較優(yōu)的誘導(dǎo)方法。以最佳誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)后取血淋巴進(jìn)行抗菌肽生物學(xué)活性的測(cè)定。分別進(jìn)行了對(duì)熱穩(wěn)定性、反復(fù)凍溶的穩(wěn)定性、蛋白酶穩(wěn)定性、pH值及有機(jī)溶劑對(duì)抗菌肽抑菌活性影響的測(cè)定。

中藥與酵母菌后產(chǎn)物用來(lái)誘導(dǎo)黃粉蟲(chóng)產(chǎn)抗菌肽植物抗菌肽植物防御素磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白核糖體失活蛋白蛋白酶抑制劑寡肽大環(huán)寡肽環(huán)肽植物防御素堇菜科茜草科葫蘆科微生物抗菌肽1、Nisin抗茵肽：Nisin抗菌肽又可稱為乳球菌肽或乳鏈菌肽，是由乳酸鏈球菌(Streptococcuslactis)和乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)在代謝過(guò)程中合成、分泌的具有很強(qiáng)殺菌作用的天然生物活性抗菌肽，它對(duì)許多G+具有抑菌活性，在絡(luò)合劑聯(lián)合作用下對(duì)G-有一定抑制作用。2、多粘菌素：多粘菌素類是由多粘菌素（Bacilluspolymyxa）產(chǎn)生的，是由多種氨基酸和脂肪酸合成的堿性多肽。根據(jù)結(jié)構(gòu)差異將其分為多黏菌素A、B、C、D、E和M等組分，主要作用于革蘭氏陰性桿菌，同時(shí)與磺胺藥，四環(huán)素連用有協(xié)同作用。3、桿菌肽：桿菌肽又名枯草菌素、枯草菌肽、崔西桿菌素，由苔蘚樣桿菌發(fā)酵獲得，它對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌有殺菌作用，但是對(duì)腎毒性很大，所以一般不用于全身感染，歐盟從2000年開(kāi)始禁用本品作為促生長(zhǎng)劑。4、酵母菌產(chǎn)生的嗜殺毒素（Ki11ertoxins）：1963年，人們首次發(fā)現(xiàn)釀酒酵母在生長(zhǎng)過(guò)程中能向菌體外分泌一種毒蛋白(即嗜殺毒素)，可以殺死同族或親緣酵母，但自身具有免疫力。此后又在假絲酵母屬、德巴利酵母屬、克魯維氏酵母屬、畢赤酵母屬和圓酵母屬的真菌中發(fā)現(xiàn)了嗜殺毒素。目前研究最為深入的是來(lái)自釀酒酵母的K1毒素。5、植物內(nèi)生菌抗菌肽內(nèi)生真菌是在宿主植物的莖和葉內(nèi)生存并完成生活周期的真菌。與病原菌不同，這些真菌對(duì)宿主植物幾乎沒(méi)有害處，它們和植物之間或者是相互依存的共生關(guān)系，或者是不太密切的共生關(guān)系。化學(xué)合成抗菌肽化學(xué)合成：對(duì)于氨基酸組成較少的抗菌肽來(lái)說(shuō)可以通過(guò)化學(xué)合成方法進(jìn)行較為方便合成。然而以天然抗菌肽為模板設(shè)計(jì)合成的人造抗菌肽克服了天然抗菌肽的種種缺點(diǎn)和不足，不僅可以直接通過(guò)計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)得到比天然抗菌肽更精短的肽序列，避免分離純化等復(fù)雜步驟，同時(shí)經(jīng)過(guò)設(shè)計(jì)改造還可增強(qiáng)天然抗菌肽的抗菌活性、穩(wěn)定性、降低或消除溶血性等副作用，但通過(guò)固相合成法得到的抗菌肽每克費(fèi)用高達(dá)上百甚至上千美元，這種高價(jià)合成方式阻礙了化學(xué)合成腳步。基因工程抗菌肽基因工程手段隨著基因工程技術(shù)的飛速發(fā)展，抗菌肽基因的克隆與表達(dá)成為大規(guī)模生產(chǎn)抗菌肽的主要途徑，具有廣闊的前景。目前基因工程手段研究抗菌肽大體有以下兩個(gè)方向:1、直接利用基因工程手段將抗菌肽基因?qū)雱?dòng)植物經(jīng)轉(zhuǎn)化進(jìn)入微生物表達(dá)系統(tǒng)(其主要通過(guò)質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)移到生物體基因組),得到抗病的植物和動(dòng)物。例如：Yarus等將牛氣管黏膜抗菌肽構(gòu)建入由鼠乳清酸性蛋白序列控制的表達(dá)載體中，然后通過(guò)顯微注射的方法轉(zhuǎn)入小鼠乳腺組織中，結(jié)果在mRNA與蛋白水平均檢測(cè)到了該肽，抑菌試驗(yàn)表明其對(duì)大腸桿菌、肺炎克雷白菌以及白色念珠菌均具有抗菌活性。2、另一個(gè)方向是根據(jù)已知的天然抗菌肽氨基酸順序，設(shè)計(jì)并合成指導(dǎo)抗菌肽合成的基因做抗菌肽的表達(dá)。目前現(xiàn)有酵母菌、大腸桿菌、桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)和哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)體系。其中利用原核表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)生的抗菌肽分子小，易被宿主菌中的蛋白酶降解，而且表達(dá)產(chǎn)物對(duì)原核宿主菌具有殺傷作用，難以在原核表達(dá)體系中直接表達(dá)具有天然生物活性的抗菌肽。酵母表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)生抗菌肽雖然有很多優(yōu)勢(shì)，但酵母表達(dá)系統(tǒng)仍有部分問(wèn)題有待解決，如抗菌肽被蛋白酶降解:表達(dá)出的小分子抗菌肽易被分離純化等等。桿狀病毒體系雖是一個(gè)高效的體系,但其最大缺點(diǎn)是外源蛋白處在極晚期病毒啟動(dòng)與調(diào)控下,而此時(shí)細(xì)胞已經(jīng)開(kāi)始死亡,因此依靠此體系大量制備抗菌肽還有許多問(wèn)題有待解決。

1、根據(jù)目前文獻(xiàn)的報(bào)道，利用真菌提取