微生物檢驗(yàn) 第五章 G+球菌課件

第十四章

革蘭陽性球菌

第一節(jié)葡萄球菌屬在自然界廣泛分布。存在于人和動物的皮膚黏膜上的菌株可致多種化膿性感染癤、癰、膿腫、菌血癥等燙傷樣皮膚綜合癥毒性休克綜合癥二、臨床意義致病物質(zhì)：酶

血漿凝固酶耐熱核酸酶毒素葡萄球菌溶素 殺白細(xì)胞素腸毒素表皮剝脫毒素毒性休克綜合征毒素凝固酶陰性葡萄球菌（CoNS）所致疾病1、CoNS是人體皮膚黏膜正常菌群之一，是醫(yī)院感染的主要病原菌。2、表皮葡萄球菌：人工瓣膜性心內(nèi)膜炎、靜脈導(dǎo)管感染、腹膜透析性腹膜炎、血管移植物感染和人工關(guān)節(jié)感染等。3、腐生葡萄球菌：女性尿路感染的重要病原菌。1.菌體形態(tài)：球形，葡萄串狀，無鞭毛，無芽胞，體外培養(yǎng)無莢膜。革蘭染色陽性球菌。2.培養(yǎng)特性：兼性厭氧，易培養(yǎng)，在普通平板、血平板上生長良好。大部分菌落產(chǎn)生有色素：金黃色、白色、檸檬色。有些菌溶血，產(chǎn)生透明的β溶血環(huán)。三、生物學(xué)特性3.生化反應(yīng)和抗原構(gòu)造觸酶陽性多數(shù)菌分解葡萄糖、麥芽糖和蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。4.抵抗力對外界因素的抵抗力強(qiáng)于其他無芽胞菌。干燥膿汁、痰液中可存活2~3個(gè)月。耐鹽性強(qiáng)，能在10%~15%NaCl培養(yǎng)基中生長。易產(chǎn)生耐藥性，對青霉素G的耐藥性已達(dá)90%以上，尤其是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌MRSA已經(jīng)成為醫(yī)院內(nèi)感染最常見的致病菌。病原性葡萄球菌一般分布在人的皮膚和鼻咽部，帶菌率達(dá)20%~50%，醫(yī)務(wù)人員帶菌率達(dá)70%，是醫(yī)院內(nèi)交叉感染的重要傳染源。（二）檢驗(yàn)程序

（四）分離培養(yǎng)與鑒定膿液、分泌物等接種于血瓊脂平板有污染的標(biāo)本如糞便等應(yīng)接種在選擇平板上，如甘露醇高鹽平板、哥倫比亞多粘菌素奈啶酸平板血液標(biāo)本則用肉湯增菌培養(yǎng)基

2．凝固酶試驗(yàn)

玻片法-測定結(jié)合型凝固酶試管法-測定分泌型凝固酶金黃色葡萄球菌、中間型葡萄球菌呈現(xiàn)陽性反應(yīng)3．耐熱核酸酶試驗(yàn)

大多數(shù)金黃色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中間葡萄球菌、豬葡萄球菌能產(chǎn)生耐熱核酸酶。表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、肉葡萄球菌含微弱耐熱核酸酶。4．磷酸酶試驗(yàn)

大多數(shù)的表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中間葡萄球菌和豬葡萄球菌為陽性。將待測菌種點(diǎn)種在加有硝基酚磷酸鹽的pH5.6~6.8MH瓊脂上，孵育18~24h，菌落周圍出現(xiàn)黃色為陽性。定義：凡對甲氧西林、苯唑西林、頭孢西丁耐藥，或PBP2a陽性、mecA基因陽性的葡萄球菌定義為耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）。

耐甲氧西林葡萄球菌第二節(jié)鏈球菌屬（Streptococcus）傳統(tǒng)分類Lancefield抗原血清分型

種系分類法溶血現(xiàn)象

丙型（γ）鏈球菌甲型（α）溶血性鏈球菌乙型（β）溶血性鏈球菌血清群與溶血特性沒有相關(guān)性

遺傳學(xué)和血清學(xué)分型不能統(tǒng)一

一、分類二、臨床意義酶：鏈激酶、鏈道酶、透明質(zhì)酸酶脂磷壁酸化膿性鏈球菌

肺炎鏈球菌致病物質(zhì)所致疾病毒素：鏈球菌溶素O和S、紅疹毒素M蛋白致病物質(zhì)：莢膜、溶血素、神經(jīng)氨酸酶

所致疾?。捍笕~性肺炎、支氣管炎、中耳炎、乳突炎、鼻竇炎、腦膜炎和菌血癥。超敏反應(yīng)性疾?。杭毙阅I小球腎炎、風(fēng)濕熱

化膿性感染中毒性疾?。盒杉t熱鏈球菌是直徑小于2μm的球形或卵圓形革蘭陽性球菌，呈鏈狀排列，鏈的長短和細(xì)菌的種類及生長環(huán)境有關(guān)。1.形態(tài)染色三、微生物學(xué)特性肺炎鏈球菌呈矛尖狀，寬端相對尖端向外，成雙排列，無芽胞、無動力，但能形成莢膜和粘液層。兼性厭氧菌營養(yǎng)要求高血平板α、β、γ三種特征性溶血現(xiàn)象肺炎鏈球菌莢膜多糖使菌落呈粘液狀產(chǎn)生自溶酶，培養(yǎng)48h后出現(xiàn)“臍窩狀”菌落。

2．培養(yǎng)特性3．生化特性和抗原構(gòu)造發(fā)酵葡萄糖和多種糖，不產(chǎn)氣，乳酸為代謝終末產(chǎn)物，觸酶陰性分20個(gè)群M抗原莢膜蛋白質(zhì)多糖肽聚糖細(xì)胞膜細(xì)胞質(zhì)近年對青霉素耐藥甚至多重耐藥的肺炎鏈球菌的出現(xiàn)并在全球播散，引起高度關(guān)注。4.抵抗力大多數(shù)細(xì)菌對干燥和消毒劑敏感；較少引起細(xì)菌耐藥性。（二）標(biāo)本采集咽拭子、痰液、膿汁和血液等標(biāo)本采集后在2h內(nèi)運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室，立即進(jìn)行檢查和接種。對B群溶血鏈球菌的檢查，用無菌棉簽采集第35周~37周妊娠婦女的陰道分泌物，置于含多粘菌素(10μg/ml)和萘啶酸(15μg/ml)選擇性培養(yǎng)肉湯中孵育18~24h，再作分離培養(yǎng)。（三）標(biāo)本直接檢查直接顯微鏡檢查標(biāo)本涂片、革蘭染色、顯微鏡檢查見鏈狀排列革蘭陽性球菌有助于無正常菌群污染標(biāo)本的診斷莢膜腫脹試驗(yàn)用于檢查肺炎鏈球菌直接檢測抗原咽拭標(biāo)本的A群鏈球菌和女性生殖道標(biāo)本的B群鏈球菌可用抗原檢測莢膜腫脹試驗(yàn)（四）分離培養(yǎng)與鑒定用羊血瓊脂平板培養(yǎng)初代分離需用5%CO2環(huán)境，35~37℃孵育24h。觀察菌落性狀：溶血現(xiàn)象及菌落大小。革蘭染色為革蘭陽性球菌，鏈狀或短鏈狀排列，觸酶試驗(yàn)陰性，6.5%NaCl不生長者可確定為鏈球菌屬細(xì)菌。

(1)Lancefield群特異性抗原鑒定：B群為無乳鏈球菌，F(xiàn)群為米勒鏈球菌。(2)PYR試驗(yàn)：化膿性鏈球菌陽性(3)桿菌肽敏感試驗(yàn)：化膿性鏈球菌陽性。(4)VP試驗(yàn)：挑取平板上孵育過夜菌落置于2mlVP肉湯中，孵育6h后加入VP試劑，搖勻30秒，出現(xiàn)桃紅色者為陽性。（5）CAMP試驗(yàn)β-溶血鏈球菌鑒定鏈球菌屬內(nèi)的鑒定試驗(yàn)非β溶血鏈球菌鑒定

菌種optochin敏感試驗(yàn)

膽汁溶菌試驗(yàn)?zāi)懼呷~苷試驗(yàn)肺炎鏈球菌S+—草綠色鏈球菌R——牛鏈球菌R—+抗鏈球菌溶素O抗體檢測常用于風(fēng)濕熱的輔助診斷?；顒有燥L(fēng)濕熱患者抗體效價(jià)一般超過400單位。標(biāo)本分離培養(yǎng)膿汁，血液，咽喉拭子直接涂片鏡檢革蘭陽性鏈球菌與葡萄球菌菌的鑒別H2O2陽性1.肚臍樣菌落2.莢膜腫脹試驗(yàn)3.膽汁溶菌試驗(yàn)溶血環(huán)與肺炎鏈球菌的鑒別αLancefeild、PYR、桿菌肽敏感試驗(yàn)、CAMP試驗(yàn)βH2O2陰性6.5%NaCl不生長者第三節(jié)腸球菌屬廣泛分布在自然界。常棲居在人、動物的腸道和女性生殖道。為醫(yī)院感染的重要病原菌。一、分類腸球菌屬原歸類于鏈球菌屬。于1984年將其命名為腸球菌屬。至今，經(jīng)由16SrRNA序列分析和核酸雜交等，證實(shí)腸球菌可分為5群19個(gè)種。臨床標(biāo)本分離的腸球菌多屬于第2群。二、臨床意義腸球菌所致感染最多見于泌尿道感染,是重要的醫(yī)院感染病原菌。多與泌尿道器械操作、留置導(dǎo)尿、尿路結(jié)構(gòu)異常有關(guān)。腹腔和盆腔創(chuàng)傷時(shí)也是常見的感染菌。腸球菌引起的菌血癥常發(fā)生于有嚴(yán)重基礎(chǔ)疾患的老年人、長期住院接受抗菌藥物治療的免疫功能低下患者。近年來不斷上升的腸球菌感染率和廣泛使用抗菌藥物出現(xiàn)的耐藥性有關(guān)。在臨床診斷前應(yīng)認(rèn)真評估分離菌的臨床意義。臨床標(biāo)本中分離的80%~90%是糞腸球菌。屎腸球菌約占5%~10%。很少分離到腸球菌屬的其它種。腸球菌為革蘭陽性球菌、呈單個(gè)，成對或短鏈狀排列，瓊脂平板上生長的細(xì)菌呈球桿狀。液體培養(yǎng)基中呈卵圓形、鏈狀排列。無芽胞和莢膜，個(gè)別菌種有稀疏鞭毛。1.形態(tài)2.培養(yǎng)特性兼性厭氧，最適生長溫度35℃，10℃和45℃均能生長。營養(yǎng)要求不高。所有菌株在含6.5%NaCl肉湯中能生長。在40%膽汁培養(yǎng)基中能分解七葉苷。3.生化反應(yīng)和抗原構(gòu)造多數(shù)菌種具有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺（PYR）。不含細(xì)胞色素氧化酶和觸酶。但糞腸球菌培養(yǎng)于含血的培養(yǎng)基中，可合成細(xì)胞色素或觸酶或兩者皆有，因而某些菌株表現(xiàn)為觸酶弱陽性。含鏈球菌D群抗原。G+C為37~45mol%。4.抵抗力對頭孢菌素類、林可霉素類和磺胺類抗菌藥物耐藥。近年來獲得性耐藥菌株不斷增多，表現(xiàn)為對氨基糖苷類耐藥和對萬古霉素耐藥。對萬古霉素的耐藥是由vanA、vanB和vanC等基因介導(dǎo)。（一）檢驗(yàn)程序

（二）標(biāo)本采集常規(guī)方法采集血、尿、創(chuàng)傷標(biāo)本和其他拭子，標(biāo)本于1小時(shí)內(nèi)接種完畢。（三）標(biāo)本直接檢查涂片染色顯微鏡檢查可見單個(gè)、成雙或短鏈排列卵圓形革蘭陽性球菌。（四）分離培養(yǎng)與鑒定標(biāo)本接種于含血瓊脂平板。若送檢標(biāo)本中含革蘭陰性桿菌可選用選擇鑒別培養(yǎng)基，常用的有：疊氮膽汁七葉苷瓊脂，可抑制革蘭陰性菌生長，而腸球菌分解七葉苷產(chǎn)生黑色菌落；哥倫比亞多粘菌素-萘啶酸瓊脂(CAN)和苯乙基乙醇瓊脂(PEA)。由于耐萬古霉素腸球菌發(fā)生率增高，為早期檢出耐藥菌株，可使用含萬古霉素瓊脂篩選方法。鑒定方法菌屬的鑒定。腸球菌屬細(xì)菌革蘭染色陽