教學(xué)課件 21動物細(xì)胞工程

如果將牛的細(xì)胞與植物細(xì)胞雜交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只要曬曬太陽就可以擠出牛奶啦！動物細(xì)胞也能融合嗎？如果將牛的細(xì)胞與植物細(xì)胞雜交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只要1動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)動物細(xì)胞融合單克隆抗體技術(shù)核移植與體細(xì)胞克隆動物細(xì)胞工程常用技術(shù)動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)是動物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)動物細(xì)胞融合單克隆抗體技術(shù)核移植與體細(xì)胞克2動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)3問題討論燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植，但對于大面積燒傷病人來講，健康皮膚很有限，請同學(xué)們想一想如何來治療該病人？取該患者的皮膚進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),獲得足量的細(xì)胞后再移植。問題討論燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植4動物細(xì)胞培養(yǎng)閱讀課本觀察圖片，簡述動物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程？就是指在體外模擬動物體內(nèi)環(huán)境，將動物細(xì)胞或組織在無菌、溫度適宜和營養(yǎng)充足的條件下培養(yǎng)，使其繼續(xù)生長、增殖并維持原有結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)過程。動物細(xì)胞培養(yǎng)閱讀課本觀察圖片，簡述動物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程？就5動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細(xì)胞加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液原代培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)部分細(xì)胞無限傳代動物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體傳代培養(yǎng)10代細(xì)胞50代細(xì)胞動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細(xì)胞加培養(yǎng)液制6思考討論總結(jié)：1.動物細(xì)胞培養(yǎng)取材時，一般是取胚胎組織或幼齡動物的組織或器官，請解釋原因？細(xì)胞的衰老與動物機體的衰老有著密切的關(guān)系，細(xì)胞的增殖能力與供體的年齡有關(guān)，幼齡動物細(xì)胞增殖能力強，有絲分裂旺盛，老齡動物則相反。所以，一般來說幼年動物的組織細(xì)胞比老年動物的組織細(xì)胞易于培養(yǎng)。同樣，組織細(xì)胞的分化程度越低，則增殖能力越強，所以更容易培養(yǎng)。動物組織或細(xì)胞培養(yǎng)的容易程度：幼體組織或細(xì)胞＞老齡組織或細(xì)胞分化程度低的組織或細(xì)胞＞分化程度高的組織或細(xì)胞腫瘤組織或細(xì)胞＞正常組織或細(xì)胞思考討論總結(jié)：1.動物細(xì)胞培養(yǎng)取材時，一般是取胚胎組織或幼齡72.在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，為什么要用胰蛋白酶對取出的動物組織進(jìn)行處理？胰蛋白酶處理動物組織，可以使動物組織細(xì)胞間的膠原纖維和細(xì)胞外的其他成分酶解，獲得單個細(xì)胞;成塊的組織細(xì)胞靠在一起,彼此限制了細(xì)胞的生長和增殖.思考討論總結(jié)：進(jìn)一步思考：①.植物組織培養(yǎng)過程將組織分散成單個細(xì)胞的嗎？②.胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細(xì)胞間的物質(zhì)是什么成份？③.細(xì)胞膜的主要成份是什么？胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？④.既然胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉，那將動物組織分散成單個細(xì)胞要注意什么問題呢？能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？注意時間的控制;不能，因為兩者最適PH不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近2.在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，為什么要用胰蛋白酶對取出的動物組織83.有關(guān)概念:原代培養(yǎng)：從機體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。其生物學(xué)特性未發(fā)生的大變化，最接近于體內(nèi)組織或細(xì)胞的生長特性，很適合用于藥物測試、基因表達(dá)等實驗研究。傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到40~50代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別：細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。3.有關(guān)概念:原代培養(yǎng)：從機體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞94.動物細(xì)胞培養(yǎng)條件：①、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）②、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。）③、溫度和PH

36.5+（-）0.5度,7.2-7.4④、氣體環(huán)境：O2和CO2（95%空氣和5%CO2）保證細(xì)胞順利的生長增殖思考：多細(xì)胞動物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所學(xué)的知識，認(rèn)為體培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)該模擬內(nèi)環(huán)境的哪些內(nèi)容呢？4.動物細(xì)胞培養(yǎng)條件：①、無菌、無毒的環(huán)境保證細(xì)胞順利的生長10脫分化又稱去分化，是指分化細(xì)胞失去特有的結(jié)構(gòu)和功能變?yōu)榫哂形捶只?xì)胞特性的過程。植物的任何一部分，甚至單個細(xì)胞都具有長成完整植株的能力。但要發(fā)育成完整植株，必須先脫分化，脫分化的細(xì)胞具有發(fā)育成任何組織的能力，然后進(jìn)行再分化，形成完整植株。植物細(xì)胞培養(yǎng)主要用于農(nóng)林生產(chǎn)中的作物、苗木育種，快速繁育種苗、培育無病毒植株等，這就要求植物的組織或細(xì)胞先進(jìn)行脫分化。動物細(xì)胞的培養(yǎng)有各種用途，一般而言，動物細(xì)胞培養(yǎng)不需經(jīng)過脫分化過程。因高度分化的動物細(xì)胞發(fā)育潛能變窄，失去了發(fā)育成完整個體的能力，所以，動物細(xì)胞也就沒有類似植物組織或細(xì)胞培養(yǎng)時的脫分化過程了。要想使培養(yǎng)的動物細(xì)胞定向分化，通常采用定向誘導(dǎo)動物干細(xì)胞，使其分化成所需要的組織或器官。5.動物細(xì)胞培養(yǎng)要經(jīng)過脫分化的過程嗎？為什么？脫分化又稱去分化，是指分化細(xì)胞失去特有的結(jié)構(gòu)和116.動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用:①.蛋白質(zhì)生物制品的生產(chǎn)如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體②.健康細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)健康細(xì)胞用于燒傷病人皮膚移植③.細(xì)胞的生理、藥理、病理研究

6.動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用:①.蛋白質(zhì)生物制品的生產(chǎn)12獲得細(xì)胞細(xì)胞的全能性植物體培養(yǎng)結(jié)果或細(xì)胞產(chǎn)物快速繁殖、培育無病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目7.植物細(xì)胞和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較細(xì)胞群體獲得細(xì)胞細(xì)胞的全能性植物體培養(yǎng)結(jié)果或細(xì)胞產(chǎn)物快速繁殖、培育無13細(xì)胞核移植動物體細(xì)胞克隆細(xì)胞核移植動物體細(xì)胞克隆14核移植胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植（難度高）受體細(xì)胞：MⅡ期的卵母細(xì)胞1.概念：細(xì)胞核移植P42體細(xì)胞克隆P42體細(xì)胞克隆的關(guān)鍵是細(xì)胞核移植技術(shù)核移植胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植（難度高）受體細(xì)胞：MⅡ期的15教學(xué)課件21動物細(xì)胞工程16卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育過程融合后的卵細(xì)胞卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎17練習(xí)：世界上第一只克隆綿羊“多莉”的培育等程序如圖所示。請仔細(xì)看圖后回答問題：黑面綿羊去核卵細(xì)胞白面綿羊卵腺細(xì)胞核重組細(xì)胞早期胚胎另一頭母綿羊子宮克隆綿羊多莉ab電脈沖處理妊娠、出生⑴寫出ａ、ｂ所指的細(xì)胞工程各稱：ａ

ｂ

。⑵實施細(xì)胞工程ａ時，所需的受體細(xì)胞大多采用動物卵細(xì)胞的原因是：。⑶多莉面部的毛色是

，判斷依據(jù)：

。⑷繼植物組織培養(yǎng)之后，克隆綿羊培育成功，證明動物細(xì)胞也具有

。⑸請舉例說明克隆綿羊培育成功的實際意義：。練習(xí)：世界上第一只克隆綿羊“多莉”的培育等程序如圖所示。請仔18克隆動物的研究意義1.克隆動物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白2.改良動物品種3.治療人類疾病，作為供體4.保護瀕危動物體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：在研究方面，克隆動物基因組重新編程的機制尚不清楚，克隆技術(shù)效率低，克隆動物易表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調(diào)等，畸形率高、死亡率高、易出現(xiàn)早衰等問題。這些問題尚在研究中。在應(yīng)用上，生產(chǎn)克隆動物費用昂貴，距大規(guī)模應(yīng)用還有一定距離?？寺游锏难芯恳饬x1.克隆動物作為生物體細(xì)胞核移植技術(shù)在研究19思考：1997年，美國威斯康星州的一個奶牛場有一頭名叫盧辛達(dá)（Lucinda）的奶牛，年產(chǎn)奶量為30.8t，創(chuàng)造了世界奶牛產(chǎn)奶量最高新紀(jì)錄。目前世界各國高產(chǎn)奶牛場奶牛，年平均產(chǎn)奶量一般為十幾噸，而我國奶牛產(chǎn)奶量年平均水平僅為3～4t。（1）能利用體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)嗎？請說明理由。（2）如果將克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)的任務(wù)交給你，你將如何對它進(jìn)行克??？思考：1997年，美國威斯康星州的一個奶牛場有一頭名叫盧辛達(dá)20（1）提示：可以用體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)。盧辛達(dá)的產(chǎn)奶量很高，說明它有高產(chǎn)奶的遺傳基礎(chǔ)，利用盧辛達(dá)的體細(xì)胞克隆的奶牛其遺傳物質(zhì)基本上全部來自該奶牛，其克隆牛具有高產(chǎn)的遺傳基礎(chǔ)，如果精心培育和飼養(yǎng)，有可能在世界范圍內(nèi)推廣，克隆牛再與高產(chǎn)的公牛自然繁殖，可得到很多高產(chǎn)的后代，從而加快奶牛改良進(jìn)程。但同時需注意，該克隆牛不能無限制地推廣，其數(shù)量不宜過多，尤其是在小范圍內(nèi)不能無限的繁殖，以避免奶牛群出現(xiàn)近親繁殖而引起種質(zhì)衰退。（2）提示：首先從盧辛達(dá)耳朵（也可用別的組織、器官，耳朵在活體上容易取）上剪取一小塊組織，在體外培養(yǎng)獲得該組織（如軟骨組織）的細(xì)胞。從屠宰場取廢棄的牛卵巢，抽取卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)成熟。用顯微針去除卵母細(xì)胞的核，再將耳細(xì)胞注入卵母細(xì)胞，用電刺激方法使卵母細(xì)胞與體細(xì)胞融合，這時供體核就進(jìn)入了受體卵母細(xì)胞，再用電刺激或化學(xué)物質(zhì)激活注入了體細(xì)胞核的卵母細(xì)胞，使其完成減數(shù)分裂和發(fā)育過程。核移植胚胎在體外短時間培養(yǎng)后，挑選正常卵裂的胚胎植入經(jīng)同期發(fā)情處理的受體母牛體內(nèi)。（1）提示：可以用體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)。盧辛達(dá)21教學(xué)課件21動物細(xì)胞工程22動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細(xì)胞加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液原代培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)部分細(xì)胞無限傳代動物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體傳代培養(yǎng)10代細(xì)胞50代細(xì)胞動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細(xì)胞加培養(yǎng)液制23卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育過程融合后的卵細(xì)胞卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎242.在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？1.用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，想一想，這是為什么？提示：培養(yǎng)的動物細(xì)胞一般當(dāng)傳代至10～50代左右時，部分細(xì)胞核型可能會發(fā)生變化，其細(xì)胞遺傳物質(zhì)可能會發(fā)生突變，而10代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型。因此，在體細(xì)胞核移植中，為了保證供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)，通常采用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞。提示：為使核移植的胚胎或動物的遺傳物質(zhì)全部來自有重要利用價值的動物提供的體細(xì)胞，在供體細(xì)胞的細(xì)胞核移至受體細(xì)胞之前，必須將受體細(xì)胞的遺傳物質(zhì)去掉或?qū)⑵淦茐摹?.在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉253.你認(rèn)為用上述體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物，是對體細(xì)胞供體動物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？提示：克隆動物絕大部分DNA來自于供體細(xì)胞核，但其核外還有少量的DNA，即線粒體中的DNA是來自于受體卵母細(xì)胞。所以，用教材中所述的方法克隆的動物不是供核動物完全相同的復(fù)制。此外，即便動物的遺傳基礎(chǔ)完全相同，但動物的一些行為、習(xí)性的形成與所處環(huán)境有很大關(guān)系，核供體動物生活的環(huán)境與克隆動物所生活的環(huán)境不會完全相同，其形成的行為、習(xí)性也不可能和核供體動物完全相同，從這一角度看，克隆動物不會是核供體動物100%的復(fù)制。3.你認(rèn)為用上述體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物，是對體細(xì)胞供26動物細(xì)胞融合與單克隆抗體動物細(xì)胞融合與單克隆抗體27（一）、動物細(xì)胞融合

細(xì)胞融合是正常的生命活動兩個細(xì)胞正在融合受精作用（一）、動物細(xì)胞融合細(xì)胞融合是正常的生命活動兩個細(xì)胞正在融合28動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合29細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法仙臺病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞滅活的病毒物理法仙臺病毒30細(xì)胞融合與融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)：誘導(dǎo)劑：仙臺病毒、聚乙二醇

誘導(dǎo)細(xì)胞融合的仙臺病毒必須滅活。思考討論：為什么細(xì)胞融合過程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎？因為滅活的病毒能使細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合，不滅活的話會感染細(xì)胞，而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合。細(xì)胞融合技術(shù)應(yīng)用于哪些方面？細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)及制備單克隆抗體。是研究細(xì)胞間遺傳信息的轉(zhuǎn)移，染色體上基因的定位等的有效途徑。細(xì)胞融合與融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)：誘導(dǎo)劑：仙臺病毒、聚乙二醇

31已成功的動物細(xì)胞融合實例生物種類細(xì)胞來源成功年代酵母菌—雞原生質(zhì)體—血紅細(xì)胞1975年人—胡蘿卜腹水癌細(xì)胞—原生質(zhì)體1976年人—小鼠纖維肉瘤細(xì)胞—畸胎瘤細(xì)胞1978年已成功的動物細(xì)胞融合實例生物種類細(xì)胞來源成功年代酵母菌—雞原32教學(xué)課件21動物細(xì)胞工程33（二）、單克隆抗體什么是抗體？抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體。（二）、單克隆抗體什么是抗體？34B淋巴細(xì)胞與抗體的關(guān)系：

１．B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。２．動物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。３．每一個淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。所以傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？怎樣解決這個問題？B淋巴細(xì)胞與抗體的關(guān)系：１．B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以35單克隆抗體由單個B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。?，形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。

特點：特異性強、純度高、靈敏度高、產(chǎn)量大、容易標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)。

單克隆抗體由單個B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克隆），形成基36如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞如何篩選？融合方式？如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能如何篩選？37單克隆抗體制備過程

注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體制備過程注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融38教學(xué)課件21動物細(xì)胞工程39單克隆抗體的制備注入小鼠細(xì)胞融合分離抗原注入小鼠體內(nèi)B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)選擇培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)從腹水提取從培養(yǎng)液提取單克隆抗體能產(chǎn)生的特定抗體

能在體外培養(yǎng)條件下大量增殖在滅活的仙臺病毒或

聚乙二醇的誘導(dǎo)下融合單克隆抗體的制備注入小鼠細(xì)胞融合分離抗原注入小鼠體內(nèi)B淋巴40思考：1、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動物細(xì)胞培養(yǎng)原理2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體.融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞。但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞，通常用“有限稀釋法”來選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀釋，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過一個，通過培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體（常用酶聯(lián)免疫吸附試驗法），那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。陽性孔中的細(xì)胞還不能保證是來自單個細(xì)胞，挑選陽性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋，一般需進(jìn)行3～4次，直至確信每個孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。該過程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)3.如何進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測及克隆化培養(yǎng)？思考：1、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動物41單克隆抗體的應(yīng)用

1、單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預(yù)防方面，與常規(guī)抗體相比，特異性強，靈敏度高，優(yōu)越性非常明顯。2、人們正在研究用單克隆抗體治療癌癥，就是在單抗上連接抗癌藥物，制成“生物導(dǎo)彈”，將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在部位，既消滅了癌細(xì)胞，又不會傷害健康細(xì)胞。

資料：目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個必然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別和定位體內(nèi)“病灶”也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。單克隆抗體的應(yīng)用1、單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預(yù)防方面42植物體細(xì)胞雜交和動物細(xì)胞融合的比較比較項目植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞融合的方法去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)方法物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒用途獲得雜種植株制備單克隆抗體植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動物細(xì)胞融合技術(shù)基本相同，不同的是植物體細(xì)胞融合前需去掉細(xì)胞壁，然后再融合；動物細(xì)胞融合是兩個體細(xì)胞直接融合。植物體細(xì)胞雜交和動物細(xì)胞融合的比較比較項目植物體細(xì)胞雜交動物43小結(jié)兩個過程動物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個“一”一個誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法－－滅活病毒一個新細(xì)胞－－雜交瘤細(xì)胞一個優(yōu)勢－－單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢小結(jié)兩個過程動物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個“一”一個44

練習(xí)：下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實驗方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中B為________過程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實驗方案的目的是__________3、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______5、C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括_____培養(yǎng)和_____培養(yǎng)兩個階段，其中_____代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。制備單克隆抗體B細(xì)胞抗體細(xì)胞融合滅活病毒雙親細(xì)胞分泌抗體無限增殖原代傳代50B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC練習(xí)：下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)451.動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：（）A．動物細(xì)胞融合 B．胚胎移植C．動物細(xì)胞培養(yǎng)D．核移植Ｃ1.動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：（）Ｃ46２．在動物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）A．結(jié)果是相同的

B．雜種細(xì)胞的形成過程基本相同C．操作過程中酶的作用相同D．誘導(dǎo)融合的手段相同Ｂ２．在動物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）47３.單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（）①淋巴細(xì)胞②小鼠骨髓瘤細(xì)胞③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞A．②④B．①③⑤C．①②③④D．②③C３.單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞C48再見再見49教學(xué)課件21動物細(xì)胞工程50動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細(xì)胞加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液原代培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞增殖部分細(xì)胞無限傳代去掉組織間蛋白動物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體傳代培養(yǎng)動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細(xì)胞加培養(yǎng)液制513、動物細(xì)胞培養(yǎng)過程：動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細(xì)胞懸浮液胰蛋白酶10代細(xì)胞原代培養(yǎng)50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)細(xì)胞株無限傳代細(xì)胞系單個細(xì)胞加培養(yǎng)液遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變動物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。（分解彈性纖維）3、動物細(xì)胞培養(yǎng)過程：動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細(xì)胞懸浮52思考下列問題：1、什么叫動物細(xì)胞融合？植物體雜交技術(shù)與動物細(xì)胞融合有什么不同呢？2、動物細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？這與它們雜交或融合過程有什么影響？3、動物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同？兩者的融合過程是否也一樣？思考下列問題：1、什么叫動物細(xì)胞融合？植物體雜交技術(shù)與動物細(xì)53如果將牛的細(xì)胞與植物細(xì)胞雜交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只要曬曬太陽就可以擠出牛奶啦！動物細(xì)胞也能融合嗎？如果將牛的細(xì)胞與植物細(xì)胞雜交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只要54動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)動物細(xì)胞融合單克隆抗體技術(shù)核移植與體細(xì)胞克隆動物細(xì)胞工程常用技術(shù)動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)是動物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)動物細(xì)胞融合單克隆抗體技術(shù)核移植與體細(xì)胞克55動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)56問題討論燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植，但對于大面積燒傷病人來講，健康皮膚很有限，請同學(xué)們想一想如何來治療該病人？取該患者的皮膚進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),獲得足量的細(xì)胞后再移植。問題討論燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植57動物細(xì)胞培養(yǎng)閱讀課本觀察圖片，簡述動物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程？就是指在體外模擬動物體內(nèi)環(huán)境，將動物細(xì)胞或組織在無菌、溫度適宜和營養(yǎng)充足的條件下培養(yǎng)，使其繼續(xù)生長、增殖并維持原有結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)過程。動物細(xì)胞培養(yǎng)閱讀課本觀察圖片，簡述動物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程？就58動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細(xì)胞加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液原代培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)部分細(xì)胞無限傳代動物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體傳代培養(yǎng)10代細(xì)胞50代細(xì)胞動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細(xì)胞加培養(yǎng)液制59思考討論總結(jié)：1.動物細(xì)胞培養(yǎng)取材時，一般是取胚胎組織或幼齡動物的組織或器官，請解釋原因？細(xì)胞的衰老與動物機體的衰老有著密切的關(guān)系，細(xì)胞的增殖能力與供體的年齡有關(guān)，幼齡動物細(xì)胞增殖能力強，有絲分裂旺盛，老齡動物則相反。所以，一般來說幼年動物的組織細(xì)胞比老年動物的組織細(xì)胞易于培養(yǎng)。同樣，組織細(xì)胞的分化程度越低，則增殖能力越強，所以更容易培養(yǎng)。動物組織或細(xì)胞培養(yǎng)的容易程度：幼體組織或細(xì)胞＞老齡組織或細(xì)胞分化程度低的組織或細(xì)胞＞分化程度高的組織或細(xì)胞腫瘤組織或細(xì)胞＞正常組織或細(xì)胞思考討論總結(jié)：1.動物細(xì)胞培養(yǎng)取材時，一般是取胚胎組織或幼齡602.在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，為什么要用胰蛋白酶對取出的動物組織進(jìn)行處理？胰蛋白酶處理動物組織，可以使動物組織細(xì)胞間的膠原纖維和細(xì)胞外的其他成分酶解，獲得單個細(xì)胞;成塊的組織細(xì)胞靠在一起,彼此限制了細(xì)胞的生長和增殖.思考討論總結(jié)：進(jìn)一步思考：①.植物組織培養(yǎng)過程將組織分散成單個細(xì)胞的嗎？②.胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細(xì)胞間的物質(zhì)是什么成份？③.細(xì)胞膜的主要成份是什么？胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？④.既然胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉，那將動物組織分散成單個細(xì)胞要注意什么問題呢？能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？注意時間的控制;不能，因為兩者最適PH不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近2.在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，為什么要用胰蛋白酶對取出的動物組織613.有關(guān)概念:原代培養(yǎng)：從機體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。其生物學(xué)特性未發(fā)生的大變化，最接近于體內(nèi)組織或細(xì)胞的生長特性，很適合用于藥物測試、基因表達(dá)等實驗研究。傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到40~50代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別：細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。3.有關(guān)概念:原代培養(yǎng)：從機體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞624.動物細(xì)胞培養(yǎng)條件：①、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）②、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。）③、溫度和PH

36.5+（-）0.5度,7.2-7.4④、氣體環(huán)境：O2和CO2（95%空氣和5%CO2）保證細(xì)胞順利的生長增殖思考：多細(xì)胞動物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所學(xué)的知識，認(rèn)為體培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)該模擬內(nèi)環(huán)境的哪些內(nèi)容呢？4.動物細(xì)胞培養(yǎng)條件：①、無菌、無毒的環(huán)境保證細(xì)胞順利的生長63脫分化又稱去分化，是指分化細(xì)胞失去特有的結(jié)構(gòu)和功能變?yōu)榫哂形捶只?xì)胞特性的過程。植物的任何一部分，甚至單個細(xì)胞都具有長成完整植株的能力。但要發(fā)育成完整植株，必須先脫分化，脫分化的細(xì)胞具有發(fā)育成任何組織的能力，然后進(jìn)行再分化，形成完整植株。植物細(xì)胞培養(yǎng)主要用于農(nóng)林生產(chǎn)中的作物、苗木育種，快速繁育種苗、培育無病毒植株等，這就要求植物的組織或細(xì)胞先進(jìn)行脫分化。動物細(xì)胞的培養(yǎng)有各種用途，一般而言，動物細(xì)胞培養(yǎng)不需經(jīng)過脫分化過程。因高度分化的動物細(xì)胞發(fā)育潛能變窄，失去了發(fā)育成完整個體的能力，所以，動物細(xì)胞也就沒有類似植物組織或細(xì)胞培養(yǎng)時的脫分化過程了。要想使培養(yǎng)的動物細(xì)胞定向分化，通常采用定向誘導(dǎo)動物干細(xì)胞，使其分化成所需要的組織或器官。5.動物細(xì)胞培養(yǎng)要經(jīng)過脫分化的過程嗎？為什么？脫分化又稱去分化，是指分化細(xì)胞失去特有的結(jié)構(gòu)和646.動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用:①.蛋白質(zhì)生物制品的生產(chǎn)如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體②.健康細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)健康細(xì)胞用于燒傷病人皮膚移植③.細(xì)胞的生理、藥理、病理研究

6.動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用:①.蛋白質(zhì)生物制品的生產(chǎn)65獲得細(xì)胞細(xì)胞的全能性植物體培養(yǎng)結(jié)果或細(xì)胞產(chǎn)物快速繁殖、培育無病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目7.植物細(xì)胞和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較細(xì)胞群體獲得細(xì)胞細(xì)胞的全能性植物體培養(yǎng)結(jié)果或細(xì)胞產(chǎn)物快速繁殖、培育無66細(xì)胞核移植動物體細(xì)胞克隆細(xì)胞核移植動物體細(xì)胞克隆67核移植胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植（難度高）受體細(xì)胞：MⅡ期的卵母細(xì)胞1.概念：細(xì)胞核移植P42體細(xì)胞克隆P42體細(xì)胞克隆的關(guān)鍵是細(xì)胞核移植技術(shù)核移植胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植（難度高）受體細(xì)胞：MⅡ期的68教學(xué)課件21動物細(xì)胞工程69卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育過程融合后的卵細(xì)胞卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎70練習(xí)：世界上第一只克隆綿羊“多莉”的培育等程序如圖所示。請仔細(xì)看圖后回答問題：黑面綿羊去核卵細(xì)胞白面綿羊卵腺細(xì)胞核重組細(xì)胞早期胚胎另一頭母綿羊子宮克隆綿羊多莉ab電脈沖處理妊娠、出生⑴寫出ａ、ｂ所指的細(xì)胞工程各稱：ａ

ｂ

。⑵實施細(xì)胞工程ａ時，所需的受體細(xì)胞大多采用動物卵細(xì)胞的原因是：。⑶多莉面部的毛色是

，判斷依據(jù)：

。⑷繼植物組織培養(yǎng)之后，克隆綿羊培育成功，證明動物細(xì)胞也具有

。⑸請舉例說明克隆綿羊培育成功的實際意義：。練習(xí)：世界上第一只克隆綿羊“多莉”的培育等程序如圖所示。請仔71克隆動物的研究意義1.克隆動物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白2.改良動物品種3.治療人類疾病，作為供體4.保護瀕危動物體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：在研究方面，克隆動物基因組重新編程的機制尚不清楚，克隆技術(shù)效率低，克隆動物易表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調(diào)等，畸形率高、死亡率高、易出現(xiàn)早衰等問題。這些問題尚在研究中。在應(yīng)用上，生產(chǎn)克隆動物費用昂貴，距大規(guī)模應(yīng)用還有一定距離?？寺游锏难芯恳饬x1.克隆動物作為生物體細(xì)胞核移植技術(shù)在研究72思考：1997年，美國威斯康星州的一個奶牛場有一頭名叫盧辛達(dá)（Lucinda）的奶牛，年產(chǎn)奶量為30.8t，創(chuàng)造了世界奶牛產(chǎn)奶量最高新紀(jì)錄。目前世界各國高產(chǎn)奶牛場奶牛，年平均產(chǎn)奶量一般為十幾噸，而我國奶牛產(chǎn)奶量年平均水平僅為3～4t。（1）能利用體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)嗎？請說明理由。（2）如果將克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)的任務(wù)交給你，你將如何對它進(jìn)行克隆？思考：1997年，美國威斯康星州的一個奶牛場有一頭名叫盧辛達(dá)73（1）提示：可以用體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)。盧辛達(dá)的產(chǎn)奶量很高，說明它有高產(chǎn)奶的遺傳基礎(chǔ)，利用盧辛達(dá)的體細(xì)胞克隆的奶牛其遺傳物質(zhì)基本上全部來自該奶牛，其克隆牛具有高產(chǎn)的遺傳基礎(chǔ)，如果精心培育和飼養(yǎng)，有可能在世界范圍內(nèi)推廣，克隆牛再與高產(chǎn)的公牛自然繁殖，可得到很多高產(chǎn)的后代，從而加快奶牛改良進(jìn)程。但同時需注意，該克隆牛不能無限制地推廣，其數(shù)量不宜過多，尤其是在小范圍內(nèi)不能無限的繁殖，以避免奶牛群出現(xiàn)近親繁殖而引起種質(zhì)衰退。（2）提示：首先從盧辛達(dá)耳朵（也可用別的組織、器官，耳朵在活體上容易取）上剪取一小塊組織，在體外培養(yǎng)獲得該組織（如軟骨組織）的細(xì)胞。從屠宰場取廢棄的牛卵巢，抽取卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)成熟。用顯微針去除卵母細(xì)胞的核，再將耳細(xì)胞注入卵母細(xì)胞，用電刺激方法使卵母細(xì)胞與體細(xì)胞融合，這時供體核就進(jìn)入了受體卵母細(xì)胞，再用電刺激或化學(xué)物質(zhì)激活注入了體細(xì)胞核的卵母細(xì)胞，使其完成減數(shù)分裂和發(fā)育過程。核移植胚胎在體外短時間培養(yǎng)后，挑選正常卵裂的胚胎植入經(jīng)同期發(fā)情處理的受體母牛體內(nèi)。（1）提示：可以用體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)。盧辛達(dá)74教學(xué)課件21動物細(xì)胞工程75動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細(xì)胞加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液原代培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)部分細(xì)胞無限傳代動物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體傳代培養(yǎng)10代細(xì)胞50代細(xì)胞動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細(xì)胞加培養(yǎng)液制76卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育過程融合后的卵細(xì)胞卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎772.在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？1.用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，想一想，這是為什么？提示：培養(yǎng)的動物細(xì)胞一般當(dāng)傳代至10～50代左右時，部分細(xì)胞核型可能會發(fā)生變化，其細(xì)胞遺傳物質(zhì)可能會發(fā)生突變，而10代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型。因此，在體細(xì)胞核移植中，為了保證供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)，通常采用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞。提示：為使核移植的胚胎或動物的遺傳物質(zhì)全部來自有重要利用價值的動物提供的體細(xì)胞，在供體細(xì)胞的細(xì)胞核移至受體細(xì)胞之前，必須將受體細(xì)胞的遺傳物質(zhì)去掉或?qū)⑵淦茐摹?.在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉783.你認(rèn)為用上述體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物，是對體細(xì)胞供體動物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？提示：克隆動物絕大部分DNA來自于供體細(xì)胞核，但其核外還有少量的DNA，即線粒體中的DNA是來自于受體卵母細(xì)胞。所以，用教材中所述的方法克隆的動物不是供核動物完全相同的復(fù)制。此外，即便動物的遺傳基礎(chǔ)完全相同，但動物的一些行為、習(xí)性的形成與所處環(huán)境有很大關(guān)系，核供體動物生活的環(huán)境與克隆動物所生活的環(huán)境不會完全相同，其形成的行為、習(xí)性也不可能和核供體動物完全相同，從這一角度看，克隆動物不會是核供體動物100%的復(fù)制。3.你認(rèn)為用上述體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物，是對體細(xì)胞供79動物細(xì)胞融合與單克隆抗體動物細(xì)胞融合與單克隆抗體80（一）、動物細(xì)胞融合

細(xì)胞融合是正常的生命活動兩個細(xì)胞正在融合受精作用（一）、動物細(xì)胞融合細(xì)胞融合是正常的生命活動兩個細(xì)胞正在融合81動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合82細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法仙臺病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞滅活的病毒物理法仙臺病毒83細(xì)胞融合與融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)：誘導(dǎo)劑：仙臺病毒、聚乙二醇

誘導(dǎo)細(xì)胞融合的仙臺病毒必須滅活。思考討論：為什么細(xì)胞融合過程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎？因為滅活的病毒能使細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合，不滅活的話會感染細(xì)胞，而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合。細(xì)胞融合技術(shù)應(yīng)用于哪些方面？細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)及制備單克隆抗體。是研究細(xì)胞間遺傳信息的轉(zhuǎn)移，染色體上基因的定位等的有效途徑。細(xì)胞融合與融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)：誘導(dǎo)劑：仙臺病毒、聚乙二醇

84已成功的動物細(xì)胞融合實例生物種類細(xì)胞來源成功年代酵母菌—雞原生質(zhì)體—血紅細(xì)胞1975年人—胡蘿卜腹水癌細(xì)胞—原生質(zhì)體1976年人—小鼠纖維肉瘤細(xì)胞—畸胎瘤細(xì)胞1978年已成功的動物細(xì)胞融合實例生物種類細(xì)胞來源成功年代酵母菌—雞原85教學(xué)課件21動物細(xì)胞工程86（二）、單克隆抗體什么是抗體？抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體。（二）、單克隆抗體什么是抗體？87B淋巴細(xì)胞與抗體的關(guān)系：

１．B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。２．動物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。３．每一個淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。所以傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？怎樣解決這個問題？B淋巴細(xì)胞與抗體的關(guān)系：１．B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以88單克隆抗體由單個B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。?，形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。

特點：特異性強、純度高、靈敏度高、產(chǎn)量大、容易標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)。

單克隆抗體由單個B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。?，形成基89如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞如何篩選？融合方式？如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能如何篩選？90單克隆抗體制備過程

注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體制備過程注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融91教學(xué)課件21動物細(xì)胞工程92單克隆抗體的制備注入小鼠細(xì)胞融合分離抗原注入小鼠體內(nèi)B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)選擇培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)從腹水提取從培養(yǎng)液提取單克隆抗體能產(chǎn)生的特定抗體

能在體外培養(yǎng)條件下大量增殖在滅活的仙臺病毒或

聚乙二醇的誘導(dǎo)下融合單克隆抗體的制備注入小鼠細(xì)胞融合分離抗原注入小鼠體內(nèi)B淋巴93思考：1、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動物細(xì)胞培養(yǎng)原理2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體.融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞。但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞，通常用“有限稀釋法”來選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀釋，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過一個，通過培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體（常用酶聯(lián)免疫吸附試驗法），那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。陽性孔中的細(xì)胞還不能保證是來自單個細(xì)胞，挑選陽性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋，一般需進(jìn)行3～4次，直至確信每個孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。該過程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)3.如何進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測及克隆化培養(yǎng)？思考：1、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動物94單克隆抗體的應(yīng)用

1、單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預(yù)防方面，與常規(guī)抗體相比，特異性強，靈敏度高，優(yōu)越性非常明顯。2、人們正在研究用單克隆抗體治療癌癥，就是在單抗上連接抗癌藥物，制成“生物導(dǎo)彈”，將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在部位，既消滅了癌細(xì)胞，又不會傷害健康細(xì)胞。

資料：目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個必然趨勢。另外，