杭州免疫學(xué)會(huì)議發(fā)言

0靜脈免疫球蛋白對(duì)早產(chǎn)兒臍血T淋巴細(xì)胞功能的影響1引言—研究目的靜脈免疫球蛋白(IVIG)被廣泛應(yīng)用于感染性和免疫相關(guān)性疾病的治療。IVIG在新生兒尤其早產(chǎn)兒感染預(yù)防與重癥感染治療中療效確切，但其安全性也日益受到關(guān)注。近年研究發(fā)現(xiàn)足月新生兒應(yīng)用大劑量IVIG后，T、B淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)下降。而有關(guān)早產(chǎn)兒應(yīng)用IVIG對(duì)其免疫功能影響的研究資料較少。本研究目的：采用體外實(shí)驗(yàn)，選擇不同劑量IVIG作用于早產(chǎn)兒臍血單個(gè)核細(xì)胞，觀察其對(duì)Th細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞功能的影響，從免疫學(xué)角度探討IVIG早產(chǎn)兒用藥安全性。2材料與方法—研究對(duì)象

選擇2011年6月～2011年12月在青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院母孕32～34周娩出的早產(chǎn)兒15例為研究對(duì)象，出生體重1300g～2450g，平均(1923±349)g。其母親分娩前4周內(nèi)無明顯感染史，未使用免疫增強(qiáng)或抑制劑等藥物。所有受試的早產(chǎn)兒母親均知情同意。3材料與方法—研究方法標(biāo)本采集CBMC制備CBMC培養(yǎng)(設(shè)置A組、B組、C組）CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞IFN-r、IL-4、IL-10、TGF-β14材料與方法—分

組IVIG的濃度選擇

37℃、飽和濕度、5%CO2條件培養(yǎng)72hA組（近生理狀態(tài)組）B組（低劑量組）C組（高劑量組）6mg/ml9mg/ml12mg/ml5材料與方法—統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布且方差齊，以x±s表示。采用單因素方差分析，LSD檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。6結(jié)果組別例數(shù)IFN-γIL-4A組15175.68±86.8229.04±8.27▲B組15124.51±56.0618.01±5.72C組1532.59±26.82＊14.44±5.18注：＊與B組和A組比較,P<0.01；▲與B組和C組比較，P<0.01表1不同濃度IVIG對(duì)早產(chǎn)兒臍血CBMC分泌IFN-γ及IL-4水平的影響1、不同濃度IVIG對(duì)早產(chǎn)兒臍血CBMC分泌IFN-γ及IL-4水平的影響7結(jié)果組別例數(shù)IFN-γ/IL-4A組155.61±2.38B組158.22±4.21☆

C組152.41±1.72△

表2不同濃度IVIG對(duì)CBMC上清液IFN-γ/IL-4比值變化的影響注：△與B組和A組比較，P<0.01；☆與A組比較，P<0.05.2、不同濃度IVIG對(duì)CBMC上清液IFN-γ/IL-4比值變化的影響8結(jié)果020406080100120140160180200IFN-γIL-4A組B組C組圖1不同濃度IVIG對(duì)CBMC分泌細(xì)胞因子影響0123456789A組B組C組A組B組C組圖2不同濃度IVIG對(duì)CBMC上清液IFN-γ/IL-4比值變化影響9結(jié)

果3、IVIG對(duì)早產(chǎn)兒CBMC體外培養(yǎng)后CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞表達(dá)的影響:

實(shí)驗(yàn)顯示：早產(chǎn)兒CBMC在不同濃度IVIG干預(yù)下，各組CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞的表達(dá)率比較均無顯著性差異(P均>0.05)。10結(jié)

果4、IVIG對(duì)早產(chǎn)兒CBMC體外產(chǎn)生IL-10和TGF-β1水平的影響：

C組CBMC分泌IL-10水平明顯低于B組(P<0.05)，顯著低于A組(P<0.01)；B組CBMC分泌IL-10水平也明顯低于A組(P<0.05)。

C組CBMC分泌TGF-β1水平顯著低于A組(P<0.01)，但與B組比較無顯著性差異(P>0.05)；B組CBMC分泌TGF-β1水平明顯低于A組(P<0.05)。

11圖3

IVIG對(duì)早產(chǎn)兒CBMC體外培養(yǎng)后CD4+CD25+Foxp3+Treg

細(xì)胞表達(dá)的影響結(jié)果圖4IVIG對(duì)早產(chǎn)兒CBMC體外培養(yǎng)后IL-10和TGF-β1水平影響12討論IVIG除免疫替代外可通過多種機(jī)制發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用、用于治療多種免疫相關(guān)性疾病

中和清除致病抗原，特別是超抗原

改變免疫復(fù)合物的特性，減少免疫復(fù)合物的沉積

免疫封閉巨噬細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞，抑制巨噬細(xì)胞的吞噬功能和B淋巴細(xì)胞的活化

恢復(fù)獨(dú)特型-抗獨(dú)特型網(wǎng)絡(luò)，抑制自身抗體的產(chǎn)生

抑制T淋巴細(xì)胞活化，減少各種細(xì)胞因子的產(chǎn)生等13新生兒（包括早產(chǎn)兒）Thl/Th2功能狀態(tài)特點(diǎn)

足月兒T淋巴細(xì)胞功能呈生理性低下狀態(tài)，且其Th細(xì)胞亞群功能發(fā)育不平衡，Th2類細(xì)胞功能相對(duì)占優(yōu)勢(shì)

早產(chǎn)兒IFN-γ、IL-4的水平明顯低于足月兒，以IFN-γ更為突出，即仍然Th2亞群功能相對(duì)占優(yōu)勢(shì)

14IVIG對(duì)新生兒T細(xì)胞功能的影響：

體外實(shí)驗(yàn)顯示：IVIG10mg/ml可以明顯抑制PHA-P誘導(dǎo)的足月新生兒CBMC分泌IFN-γ，也可以抑制CBMC中IL-4mRNA的表達(dá)；同時(shí)抑制PHA誘導(dǎo)的足月新生兒CBMC分泌IL-10與TGF-β1。

IVIG能抑制脂多糖誘導(dǎo)的新生兒單核巨噬細(xì)胞的活化，從而抑制其分泌IL-6，而IL-6能促進(jìn)T細(xì)胞的活化及向Thl、Th2分化，間接證明了IVIG對(duì)T細(xì)胞尤其是Thl、Th2細(xì)胞因子的抑制作用15

IVIG對(duì)新生兒肺炎似無明顯療效，大劑量使用IVIG可能因其至少短期內(nèi)具有抑制T、B淋巴細(xì)胞功能作用而加重新生兒期暫時(shí)免疫缺陷。

對(duì)極低出生體重兒過大劑量或短期內(nèi)反復(fù)使用IVIG預(yù)防感染無明顯療效，而且可能加重暫時(shí)免疫低應(yīng)答反應(yīng)，影響細(xì)胞免疫的自然發(fā)育過程。16本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果：

與近似生理狀態(tài)組比較，低劑量IVIG組CBMC分泌IL-4顯著降低，而IFN-γ變化輕微；較大劑量IVIG組IFN-γ和IL-4的水平皆明顯降低，但以IFN-γ降低更為顯著

結(jié)果提示：IVIG可抑制早產(chǎn)兒臍血Thl、Th2細(xì)胞功能，并且與其劑量相關(guān)。低劑量時(shí)主要抑制Th2細(xì)胞功能，較大劑量時(shí)Th1、Th2細(xì)胞均受抑，但以Th1細(xì)胞更為顯著17本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示：

早產(chǎn)兒CBMC經(jīng)不同劑量IVIG干預(yù)后，其CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞表達(dá)率無顯著差異。

較大劑量IVIG組CBMC分泌IL-10水平明顯低于低劑量組和近生理狀態(tài)組，低劑量組也明顯低于近生理狀態(tài)組；較大和低劑量組CBMC分泌TGF-β1水平均明顯低于近生理狀態(tài)組，但較大劑量組與低劑量組比較無顯著性差異。

結(jié)果提示：IVIG對(duì)早產(chǎn)兒CBMC中天然Treg細(xì)胞的數(shù)量并無影響。但I(xiàn)VIG能抑制早產(chǎn)兒CBMCIL-10和TGF-β1的分泌。IVIG濃度越高，IL-10分泌越少；而TGF-β1當(dāng)IVIG達(dá)到一定濃度后其抑制分泌程度無進(jìn)一步加重。18正常過敏體質(zhì)伴炎癥反應(yīng)過敏體質(zhì)未伴炎癥反應(yīng)123TH1/TH17/TH2/Treg細(xì)胞19綜合國內(nèi)外文獻(xiàn)和本研究結(jié)果：

早產(chǎn)兒應(yīng)用較大劑量IVIG對(duì)其T細(xì)胞功能有明顯影響，可進(jìn)一步加重Th1/Th2失衡，抑制Treg細(xì)胞功能，加重暫時(shí)免疫低應(yīng)答反應(yīng)，影響細(xì)胞免疫的自然發(fā)育過程，可能增加日后變態(tài)反應(yīng)性疾病的發(fā)生。提示早產(chǎn)兒應(yīng)用IVIG需選擇適宜劑量。20結(jié)論IVIG可抑制早產(chǎn)兒臍血Thl、Th2細(xì)胞功能，并且與其劑量相關(guān)。低劑量時(shí)主要抑制Th2細(xì)胞功能，較大劑量時(shí)Th1、Th2細(xì)胞均受抑，但以Th1細(xì)胞更為顯著。IVIG不能直接影響早產(chǎn)兒臍血天然Treg細(xì)胞的數(shù)量，但可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子IL-10和TGF-β1的分泌抑制Treg細(xì)胞的功能且有劑量依賴效應(yīng)。21樹突細(xì)胞（DC）在機(jī)體免疫系統(tǒng)中處于中心地位作為一種專職抗原提