基于TLR4NF-κB信號通路的蘇木乙酸乙酯提取物抗動(dòng)脈粥樣硬化作用機(jī)制研究

基于TLR4/NF-κ信號通路蘇木乙酸酯提取物動(dòng)脈粥樣硬化作用機(jī)研究目的:通過建立動(dòng)物模型及LPS誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型,應(yīng)用蘇木乙酸乙酯提取物進(jìn)行干預(yù),觀察其與TLR4/NF-κ

B號通路的關(guān)系,探討蘇木乙酸乙酯提取物抗AS的作用機(jī)理方法實(shí)驗(yàn)一:將60只體重在200±20gSPF級SD大鼠隨機(jī)分為6組,每組10只。分別為空白對照組、模型對照組、蘇木低劑量組、蘇木中劑量組、蘇木高劑量組和辛伐他汀組?？瞻讓φ战M給予普通飼料喂養(yǎng)其余5組給予腹腔注射維生素D3聯(lián)合高脂飼料喂養(yǎng)進(jìn)行模型復(fù)制。12周后空白對照組模型對照組給予等體積羧甲基纖維素鈉懸濁液灌胃其余4組分別給予相應(yīng)劑量的蘇木乙酸乙酯提取物懸濁液和辛伐他汀懸濁液灌胃每日給藥1次,連續(xù)給藥4周。HE染色法觀察大鼠腹主動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué)的變化;全自動(dòng)生化分析儀測定血清TGTC、LDL-C、HDL--C水平;ELISA法檢測血清IL-1β含量;實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測主動(dòng)脈、NF-κBp65mRNA的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)二:將HUVECs分為7組,分別為空白對照組、模型對照組、蘇木低劑量組、蘇木中劑量組、蘇木高劑量組、辛伐他汀組和蘇木預(yù)防組。采LPS溶液(1μg/mL)處理12h誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷進(jìn)行模型復(fù)制?？瞻讓φ战M細(xì)胞正常培養(yǎng)模型對照組細(xì)胞進(jìn)行模型復(fù)制后正常培養(yǎng)12h;蘇木低、中、高劑量和辛伐他汀組細(xì)胞進(jìn)行模型復(fù)制后分別加入蘇木乙酸乙酯提取物低、中、高劑量含藥血清和辛伐他汀含藥血清治療蘇木預(yù)防組細(xì)胞用蘇木中劑量含藥血清預(yù)處理12h,加入溶液處理內(nèi)皮細(xì)胞察各

組內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)的改變;流式細(xì)胞儀檢測內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡ELISA法觀察細(xì)胞上清TNF-α水平;實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測細(xì)胞、NF-κ表達(dá);Western-blot法檢測TLR4、NF-KBp65蛋白的表達(dá)。

Bp65mRNA的結(jié)果:1.大鼠腹主動(dòng)脈病理形態(tài)結(jié)果顯示:蘇木低劑量組蘇木中劑量組蘇木高劑量組伐他汀組內(nèi)皮細(xì)胞輕度腫脹,中層平滑肌細(xì)胞排列輕度紊亂,細(xì)胞核數(shù)量增多,與模型對照組比較,病理損傷減輕。大鼠血脂結(jié)果顯示與模型對照組比較,蘇木中劑量組、蘇木高劑量組、辛伐他汀組大鼠血清、TC、LDL-C含量降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P><0.05);木低劑量組大鼠血清LDL-C含量降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3.大鼠血清ELISA結(jié)果顯示:與模型對照組比較,蘇木低劑量組木中劑量組、蘇木高劑量組、辛伐他汀組大鼠血清IL-1β含量降低,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)大鼠腹主動(dòng)脈RealTimePCR果顯示:與模型對照組比較,蘇木中劑量組、蘇木高劑量組、辛伐他汀組mRNA表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。5.細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示:與模型對照組比較,蘇木中劑量組蘇木高劑量組辛代他汀組、蘇木預(yù)防組細(xì)胞調(diào)亡比例降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。6.細(xì)胞上清ELISA結(jié)果顯示:與模型對照組比較蘇木中劑量組蘇木高劑量組辛伐他汀組、蘇木預(yù)防組TNF-α含量降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)7.細(xì)胞RealTimePCR果顯示:與模型對照組比較,蘇木中劑量組、蘇木高劑量組、辛伐他汀組、蘇木預(yù)防組TLR4mRNA、NF-κ

Bp65mRNA表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。8.細(xì)胞WesternBlot結(jié)果顯示:與模型對照組比較,蘇木中劑量組蘇木高劑量組辛伐他汀組蘇木預(yù)防組細(xì)胞NF-κ

B

p65蛋白表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)結(jié)論:1.蘇木乙酸乙酯提取物能改善模型大鼠腹主動(dòng)脈病理損傷,降低模型大鼠血清TGTCLDL-CIL-1β含量2.蘇木乙酸乙酯提取物能夠改善LPS誘導(dǎo)內(nèi)皮損傷細(xì)胞形態(tài),降低內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率降低細(xì)胞上清TNF-α含量。3.蘇木乙酸乙酯提取物能夠