腸桿菌科細(xì)菌鑒定

關(guān)于腸桿菌科細(xì)菌鑒定第1頁，共17頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)35分，星期五腸桿菌科細(xì)菌一般性鑒定程序未知腸桿菌分離培養(yǎng)挑取可疑菌落純培養(yǎng)革蘭染色鏡檢生化實(shí)驗(yàn)鑒定藥敏試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)第2頁，共17頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)35分，星期五一.分離培養(yǎng)無菌操作用接種環(huán)提取可疑腸道桿菌，在EMB上分區(qū)劃線接種。送37℃培養(yǎng)24小時(shí)。第3頁，共17頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)35分，星期五二.純培養(yǎng)（一）確定可疑菌落。1.觀察EMB表面的菌落特征：（1）.凡紫黑色的單個(gè)菌落可初步定為可疑大腸桿菌菌落，標(biāo)號為。（2）.凡光滑無色透明的單個(gè)小菌落可初步定為痢疾桿菌屬菌落或傷寒桿菌屬菌落，標(biāo)號為。第4頁，共17頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)35分，星期五（二）.可疑菌落純化培養(yǎng)

無菌操作用接種針挑取已編號可疑菌落，分別接種在雙糖鐵高層瓊脂斜面和半固體培養(yǎng)基上，送37℃溫箱培養(yǎng)24~48小時(shí)。（三）.雙糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)特征觀察與動力觀察初步確定為傷寒桿菌初步確定為大腸桿菌第5頁，共17頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)35分，星期五革蘭染色鏡檢挑取純培養(yǎng)后的可疑菌落進(jìn)行革蘭染色，確定為革蘭陰性菌后進(jìn)行細(xì)菌的生化培養(yǎng)基接種。革蘭陰性菌短桿狀，分散排列第6頁，共17頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)35分，星期五生化試驗(yàn)鑒定將需全面鑒定的可疑細(xì)菌從雙糖鐵瓊脂斜面挑菌分別接種于各種生化反應(yīng)培養(yǎng)基。每株可疑菌需接種的培養(yǎng)基計(jì)有糖發(fā)酵管（葡.乳.麥.甘.蔗）各1支，蛋白胨水1支（I），葡萄糖蛋白胨水2支（M.Vp），枸櫞酸鹽瓊脂斜面1支（C）。接種完畢后，試管置于試管架上，送37℃溫箱培養(yǎng)24~48小時(shí)后觀察記錄結(jié)果。第7頁，共17頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)35分，星期五1.不變黃，小管無氣泡：糖發(fā)酵為陰性（—）。2.黃色，小管有氣泡（產(chǎn)酸，產(chǎn)氣）：糖發(fā)酵為陽性（+）。黃色，小管無氣泡（產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣）：糖發(fā)酵為陽性（+）。糖發(fā)酵試驗(yàn)第8頁，共17頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)35分，星期五結(jié)果：紅色為吲哚試驗(yàn)陽性（+），無變化為陰性（-）紅色為甲基紅試驗(yàn)陽性（+），桔黃色為陰性（-）吲哚試驗(yàn)(I)甲基紅試驗(yàn)(MR)試驗(yàn)第9頁，共17頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)35分，星期五VP試驗(yàn)枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)(C)斜面上有菌苔，且變成深藍(lán)色，為陽性；斜面上無菌苔，仍是綠色為陰性。紅色為VP陽性。第10頁，共17頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)35分，星期五表1腸桿菌科細(xì)菌生化反應(yīng)鑒定結(jié)果記錄表表2腸桿菌科細(xì)菌生化反應(yīng)鑒定數(shù)據(jù)參考表第11頁，共17頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)35分，星期五

實(shí)驗(yàn)原理：含有定量抗菌藥物的紙片貼在己接種測試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后便不斷地向紙片周圍區(qū)域擴(kuò)散，形成遞減的梯度濃度。在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的細(xì)菌的生長被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對測試菌的最低抑菌濃度（MIC）呈負(fù)相關(guān)，即抑菌圈愈大，MIC愈小。

藥物敏感試驗(yàn)第12頁，共17頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)35分，星期五實(shí)驗(yàn)方法（一）接種肉湯培養(yǎng)基（二）菌液均勻涂抹平板培養(yǎng)基（三）分別夾取青霉素、鏈霉素、慶大霉素和頭孢拉定四種抗生素紙片貼在平板上進(jìn)行培養(yǎng)第13頁，共17頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)35分，星期五實(shí)驗(yàn)結(jié)果第14頁，共17頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)35分，星期五●實(shí)驗(yàn)結(jié)果

三種菌對鏈霉素和慶大霉素敏感，但對青霉素和頭孢拉定耐藥。第15頁，共17頁，2022年，5月20