離子色譜課件

離子色譜技術(shù)現(xiàn)代生物技術(shù)導(dǎo)論目錄離子色譜定義離子色譜分類離子色譜原理離子色譜結(jié)構(gòu)離子色譜應(yīng)用2優(yōu)點(diǎn)：快速方便、靈敏度高選擇性好、可同時(shí)分析多種離子化合物、分離柱的穩(wěn)定性好、容量高狹義定義：以低交換容量的離子交換樹(shù)脂為固定相，對(duì)離子性物質(zhì)進(jìn)行分離，用電導(dǎo)檢測(cè)器連續(xù)檢測(cè)流出物電導(dǎo)變化的一種液相色譜方法.廣義定義：離子色譜法就是利用被測(cè)物質(zhì)的離子性進(jìn)行分離和檢測(cè)的液相色譜。離子色譜定義分離模式

分離機(jī)理

分析對(duì)象或應(yīng)用領(lǐng)域離子交換

庫(kù)侖力無(wú)機(jī)和有機(jī)離子分析離子排斥Donnan平衡有機(jī)酸氨基酸醇離子對(duì)疏水作用離子性物質(zhì)分析離子分配疏水作用生物大分子金屬配合物疏水、螯合金屬離子反向液相色譜疏水作用極性和離子型化合物離子色譜分類(根據(jù)分離原理)目錄離子色譜定義離子色譜分類離子色譜原理離子色譜結(jié)構(gòu)離子色譜應(yīng)用6陰離子交換陽(yáng)離子交換離子色譜原理在色譜柱中填充無(wú)數(shù)的離子交換劑作為離子分離的固定相，樣品離子和固定相基團(tuán)之間存在相互作用，對(duì)于不同的樣品離子，作用大小是不同的，因此在隨流動(dòng)相通過(guò)色譜柱的過(guò)程中，淋洗液中的離子與樣品中的待測(cè)離子可逆交換，作用力強(qiáng)的樣品離子保留時(shí)間要比作用力弱的離子長(zhǎng)，最終不同的樣品離子都依次流出色譜柱并分別到達(dá)檢測(cè)器被檢測(cè)，以保留時(shí)間定性，峰高或峰面積定量，從而實(shí)現(xiàn)樣品離子的分離和測(cè)定目錄離子色譜定義離子色譜分類離子色譜原理離子色譜結(jié)構(gòu)離子色譜應(yīng)用離子色譜流程圖2.進(jìn)樣器：

以前采用25ul的進(jìn)樣管，通過(guò)注射劑將樣品注入六通閥中，由閥進(jìn)行自動(dòng)切換進(jìn)樣。目前為了適應(yīng)純凈水中含氧酸根等痕量離子的測(cè)定，100ul的進(jìn)樣管問(wèn)世了，解決了許多行業(yè)中痕量離子低檢出限的需要，采用自動(dòng)進(jìn)樣器加大體積進(jìn)樣，不僅節(jié)約材料而且操作簡(jiǎn)便，速度快，準(zhǔn)確性強(qiáng)。4.抑制器系統(tǒng):以陰離子色譜分析為例，在未進(jìn)樣前，陰離子分離柱的樹(shù)脂為R-HCO型，流動(dòng)相不與它發(fā)生作用，進(jìn)入到含R-H型樹(shù)脂的抑制柱，發(fā)生如下反應(yīng)：R-H+NaHCO3→R-Na+H2CO3,即作為流動(dòng)相的強(qiáng)電解質(zhì)NaHCO3和Na2CO3經(jīng)抑制柱后轉(zhuǎn)化為弱電解質(zhì)H2CO3(包括CO2)，電導(dǎo)率儀對(duì)它顯示低的電導(dǎo)率(本底)，基線平穩(wěn)后，用注射器通過(guò)進(jìn)樣閥注入試樣，試樣中的陰離子進(jìn)入分離柱中，被固定相(分離樹(shù)脂)和流動(dòng)相進(jìn)行無(wú)數(shù)次交換，洗脫，再交換，再洗脫過(guò)程，使陰離子得到有效的分離。分離后的物質(zhì)進(jìn)到陽(yáng)離子抑制柱，柱中的樹(shù)脂又將陽(yáng)離子進(jìn)行交換，產(chǎn)生與陰離子相應(yīng)的酸，這樣試樣中與陰離子相對(duì)應(yīng)的鹽經(jīng)過(guò)抑制后，就轉(zhuǎn)化為陰離子對(duì)應(yīng)的酸.

由此看出，抑制柱同時(shí)起到了抑制背景電導(dǎo)和增強(qiáng)被測(cè)組分信號(hào)電導(dǎo)的雙重作用.對(duì)任一物質(zhì)進(jìn)行定量分析時(shí)，先要注入該物質(zhì)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，儀器會(huì)自動(dòng)記下出峰時(shí)間和峰高(或峰面積）并作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，而后注入未知含量的試樣，標(biāo)準(zhǔn)曲線自動(dòng)記下相同出峰時(shí)間和峰高(或峰面積）.根據(jù)比值顯示該離子的濃度。5.檢測(cè)器系統(tǒng)：

對(duì)任一物質(zhì)進(jìn)行定量分析時(shí)，先要注入該物質(zhì)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，儀器會(huì)自動(dòng)記下出峰時(shí)間和峰高(或峰面積）并作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后注入未知含量的試樣，標(biāo)準(zhǔn)曲線自動(dòng)記下相同出峰時(shí)間和峰高(或峰面積）.根據(jù)比值顯示該離子的濃度。數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)：

儀器本身自帶色譜控制及數(shù)據(jù)分析軟件，可對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行自動(dòng)分析。目錄離子色譜定義離子色譜分類離子色譜原理離子色譜結(jié)構(gòu)離子色譜應(yīng)用條件：DEAE纖維素樹(shù)脂柱

洗脫液分別用考馬斯亮蘭和5%苯酚-硫酸試劑檢測(cè)蛋白質(zhì)和多糖

aminopacPA10(2×250mm)離子色譜分離柱；柱溫30℃（優(yōu)化）以10.0mMNaoH為流動(dòng)相（優(yōu)化）Au為工作電極，Ag/Agcl為參比電極的脈沖安培檢測(cè)器目的：分離檢測(cè)大蒜多糖水解產(chǎn)生的單糖成分及含量。儀器：ICS-2500離子色譜儀(美國(guó)戴安公司)試劑與藥品：200mmol/L氫氧化鈉溶液(美國(guó)Fisher公司)、超純水(Milli-Q純水系統(tǒng))、單糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露醇和果糖,德國(guó)Augsburg公司)優(yōu)點(diǎn)：靈敏度和精密度高、分離效果好及樣品不需要衍生化處理的優(yōu)點(diǎn),適合大蒜樣品中單糖或大蒜多糖水解后單糖的分析。離子色譜測(cè)定大蒜中的糖類樣品的前處理：

將大蒜洗滌、去皮后,用3倍量水煮沸20min,破碎、打漿、壓榨取上清液于60℃下濃縮至可溶性固形物濃度為10%,然后上DEAE纖維素樹(shù)脂柱,水洗,洗脫液分別用考馬斯亮蘭和5%苯酚-硫酸試劑檢測(cè)蛋白質(zhì)和多糖。將含有大蒜多糖產(chǎn)品的部分合并,經(jīng)冷凍干燥得到中性多糖部分。將大蒜多糖樣品13mg至于具塞玻璃管中,加入0.7mL6mol/L硫酸,室溫下放置1h,充分溶解后,再用6倍蒸餾水稀釋,再封口,100℃水解1h。水解液用2mol/L的氫氧化鈉中和至pH約為7,用0.2um的一次性濾頭過(guò)濾,收集濾液并用蒸餾水定容至10mL鼠李糖阿拉伯糖半乳糖;葡萄糖甘露醇果糖由圖1：6種單糖基本上是完全分離。各單糖相應(yīng)的校準(zhǔn)曲線采用色譜峰的峰高(nC)為計(jì)算依據(jù)，糖標(biāo)準(zhǔn)的濃度單位為mg/L。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行多次分析,考察分析方法的重現(xiàn)性。在5次重復(fù)分析同一個(gè)混合標(biāo)樣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中,各單糖的保留時(shí)間差別在0.18min以內(nèi),峰高的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.62—2.12之間,重現(xiàn)性較好,可以滿足微量糖分析的精度要求。由圖2表2表3可見(jiàn),大蒜多糖主要由果糖和葡萄糖組成,此外還有及少量的半乳糖及醇。

利用離子色譜-積分安培檢測(cè)法,可以有效、準(zhǔn)確地分析大蒜多糖的單糖組分。這種分析