齊魯醫(yī)學(xué)寄生蟲3

第三章

細(xì)菌感染的病原學(xué)診斷

褚云卓11/20/20221寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!本章內(nèi)容節(jié)標(biāo)本的采集和處理原則第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定第四節(jié)細(xì)菌的非培養(yǎng)檢測方法11/20/20222寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!節(jié)標(biāo)本的采集和處理原則一、標(biāo)本采集的一般原則1．早期采集2．無菌采集3．根據(jù)目的菌的特性用不同的方法采集4．采集適量標(biāo)本5．安全采集

11/20/20223寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!節(jié)標(biāo)本的采集和處理原則二、標(biāo)本的處理1.對(duì)環(huán)境敏感的細(xì)菌如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血桿菌等應(yīng)保溫并立即送檢2.其他所有的標(biāo)本采集后最好在2h之內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室3.若不能及時(shí)送檢，標(biāo)本應(yīng)置于一定環(huán)境中保存4.一般情況下，用于細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本保存時(shí)間不應(yīng)超過24h11/20/20224寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查1.包括不染色標(biāo)本檢查法和染色標(biāo)本檢查法2.鏡檢可以了解有無細(xì)菌及大致的菌量3.根據(jù)細(xì)菌形態(tài)、結(jié)構(gòu)和染色性有助于對(duì)病原菌的初步識(shí)別和分類4.通過形態(tài)學(xué)檢查可得到初步診斷，對(duì)臨床早期診斷和治療疾病有一定的參考意義11/20/20225寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查3.有些病原菌通過不染色標(biāo)本的動(dòng)力檢查可作出初步鑒定如疑似霍亂患者，鏡下觀察到來回穿梭似流星狀運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌，制動(dòng)試驗(yàn)陽性，可初步推斷為“疑似O1群霍亂弧菌”。11/20/20226寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查（二）常用的染色方法1．革蘭染色（gramstain）革蘭陽性球菌革蘭陰性桿菌11/20/20227寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查3．熒光染色（1）熒光染色法敏感性強(qiáng)，效率高而且容易觀察結(jié)果，在臨床細(xì)菌鑒定中有很大的實(shí)用價(jià)值。（2）主要用于結(jié)核分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌、白喉棒狀桿菌及痢疾志賀菌等的檢測。11/20/20228寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查6.芽胞染色：綠色部分為芽胞11/20/20229寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定一、培養(yǎng)基的種類和選擇培養(yǎng)基的組成成分、培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)基的選擇二、分離及培養(yǎng)細(xì)菌的分離、細(xì)菌培養(yǎng)方法三、生化反應(yīng)和鑒定碳水化合物的代謝試驗(yàn)蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝試驗(yàn)碳源和氮源利用試驗(yàn)11/20/202210寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定(一)培養(yǎng)基的組成成分1．營養(yǎng)物質(zhì)蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖類、醇類、血液、無機(jī)鹽類、雞蛋和動(dòng)物血清生長因子2．凝固物質(zhì)瓊脂、明膠、卵白3．抑制劑和指示劑11/20/202211寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定1．基礎(chǔ)培養(yǎng)基含有基礎(chǔ)生長所需的基本營養(yǎng)成分，最常用的是肉浸液，俗稱肉湯（broth），主要成分含牛肉浸液和蛋白胨。11/20/202212寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定

3．鑒別培養(yǎng)基（diferentialmedium）糖發(fā)酵管、克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）、伊紅-鎂藍(lán)瓊脂和動(dòng)力-吲哚-尿素（MIU）培養(yǎng)基等。11/20/202213寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定5．特殊培養(yǎng)基（specialmedium）皰肉培養(yǎng)基、巰基乙醇酸納培養(yǎng)基11/20/202214寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定（三）培養(yǎng)基的選擇從血液、骨髓中分離病原菌用血液增菌培養(yǎng)基11/20/202215寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定（二）細(xì)菌培養(yǎng)方法1．需氧培養(yǎng)法2．二氧化碳培養(yǎng)法3．厭氧培養(yǎng)法

11/20/202216寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定2．氧化―發(fā)酵試驗(yàn)（O/F試驗(yàn)）主要用于腸桿菌科細(xì)菌與非發(fā)酵菌的鑒別，前者均為發(fā)酵型，而后者通常為氧化型或產(chǎn)堿型。也可用于葡萄球菌與微球菌間的鑒別。11/20/202217寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定4．七葉苷水解試驗(yàn)主要用于D群鏈球菌與其他鏈球菌的鑒別。5．甲基紅試驗(yàn)主要用于鑒別大腸埃希菌與產(chǎn)氣腸桿菌。6．V―P試驗(yàn)本試驗(yàn)常與甲基紅試驗(yàn)一起使用，因?yàn)榍罢哧栃缘募?xì)菌，后者通常為陰性。11/20/202218寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定3．硫化氫試驗(yàn)培養(yǎng)基：醋酸鉛培養(yǎng)基應(yīng)用：主要用于腸桿菌科中屬及種鑒別11/20/202219寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定（三）碳源和氮源利用試驗(yàn)1．枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)用于腸桿菌科中菌屬間的鑒定。2．丙二酸鹽利用試驗(yàn)?zāi)c桿菌科中屬間及種的鑒別。11/20/202220寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定3．硝酸鹽還原試驗(yàn)本試驗(yàn)在細(xì)菌鑒定中廣泛應(yīng)用。腸桿菌科細(xì)菌均能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽；銅綠假單胞菌、嗜麥芽假單胞菌等假單胞菌可產(chǎn)生氮?dú)猓挥行﹨捬蹙珥f榮球菌等試驗(yàn)也為陽性。11/20/202221寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定8．

CAMP試驗(yàn)在鏈球菌中，只有B群鏈球菌CAMP試驗(yàn)陽性，故可作為特異性鑒定。7．凝固酶試驗(yàn)作為鑒定葡萄球菌致病性的重要指標(biāo)，也是葡萄球菌鑒別時(shí)常用的一個(gè)試驗(yàn)。11/20/202222寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁!第四節(jié)細(xì)菌的非培養(yǎng)檢測方法一、免疫學(xué)檢測抗原檢測、抗體檢測二、分子生物學(xué)檢測核酸雜交、聚合酶鏈反應(yīng)、生物芯片技術(shù)三、細(xì)菌毒素的檢測內(nèi)毒素、外毒素四、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

11/20/202223寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁!第四節(jié)

細(xì)菌的非培養(yǎng)檢測方法一、免疫學(xué)檢測（二）抗體檢測抗體的量常隨感染過程而增多，表現(xiàn)為效價(jià)的升高。因此用已知的細(xì)菌或其特異性抗原檢測病人血清中有無相應(yīng)抗體及其效價(jià)的動(dòng)態(tài)變化，可作為某些傳染病的輔助診斷。主要適用于抗原性較強(qiáng)的致病菌和病程較長的感染性疾病。11/20/202224寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁!第四節(jié)

細(xì)菌的非培養(yǎng)檢測方法二、分子生物學(xué)檢測（一）核酸雜交1.探針的種類（1）全染色體DNA探針（2）染色體克隆片段DNA探針（3）質(zhì)粒DNA探針（4）rRNA基因探針（5）寡核苷酸探針11/20/202225寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁!第四節(jié)

細(xì)菌的非培養(yǎng)檢測方法（二）聚合酶鏈反應(yīng)（polymerasechainreaction,PCR）1.特異性DNA體外擴(kuò)增技術(shù)2.特異、靈敏、快速、操作簡便3.廣泛應(yīng)用于細(xì)菌的鑒定11/20/202226寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁!第四節(jié)

細(xì)菌的非培養(yǎng)檢測方法（三）生物芯片技術(shù)1.通過微加工技術(shù)和微電子技術(shù)在固體芯片表面構(gòu)建微型生物化學(xué)分析系統(tǒng)。2.對(duì)細(xì)胞、蛋白質(zhì)、DNA以及其他生物組分的準(zhǔn)確、快速、大信息量的檢測。3.常用的生物芯片分為二大類：即基因芯片和蛋白芯片。11/20/202227寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁!第四節(jié)

細(xì)菌的非培養(yǎng)檢測方法（二）外毒素外毒素的測定可用于待檢菌的鑒定，同時(shí)可區(qū)分產(chǎn)毒株與非產(chǎn)毒株。方法：1.體內(nèi)毒力試驗(yàn)

2.體外毒力試驗(yàn)11/20/202228寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁!５.病人標(biāo)本中可能含有大量致病菌，必須注意安全防護(hù)６.標(biāo)本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必須包裝好，防止送檢過程中倒翻或碰破流出７.對(duì)于烈性傳染病標(biāo)本運(yùn)送時(shí)更要特別嚴(yán)格，必須按規(guī)定包裝，由專人運(yùn)送８.厭氧性標(biāo)本應(yīng)放在專門的運(yùn)送瓶或試管內(nèi)運(yùn)送，有時(shí)可直接用抽取標(biāo)本的注射器運(yùn)送11/20/202229寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第29頁!第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查一、不染色標(biāo)本1.細(xì)菌不經(jīng)染色直接鏡檢，主要用于檢查生活狀態(tài)下細(xì)菌的動(dòng)力及運(yùn)動(dòng)狀況2.常用的方法有壓滴法和懸滴法有動(dòng)力：可看到細(xì)菌自一處移至另一處，有明顯的方向性位移無動(dòng)力：細(xì)菌呈現(xiàn)布朗運(yùn)動(dòng)，只在原地顫動(dòng)而無位置的改變11/20/202230寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第30頁!第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查二、染色標(biāo)本（一）常用染料1．堿性染料：堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫、美藍(lán)等2．酸性染料：有伊紅、剛果紅等3．復(fù)合染料（中性染料）及熒光染料：復(fù)合染料有瑞氏染料（伊紅美藍(lán)）、姬姆薩染料（伊紅天青）等；熒光染料有熒光標(biāo)記的抗體

11/20/202231寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第31頁!第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查2．抗酸染色（acid-faststain）可將細(xì)菌分為兩大類：即-抗酸性細(xì)菌-非抗酸性細(xì)菌11/20/202232寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第32頁!第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查4.鞭毛染色可觀察到菌體上有無鞭毛、鞭毛的位置及數(shù)量，在細(xì)菌鑒定中，特別是非發(fā)酵菌的鑒定中很重要。5.異染顆粒染色用于白喉棒狀桿菌染色。11/20/202233寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第33頁!第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查7.墨汁染色:一般用于新型隱球菌檢查11/20/202234寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第34頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定一、培養(yǎng)基的種類和選擇培養(yǎng)基（culturemedium）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)物制品。

11/20/202235寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第35頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定（二）培養(yǎng)基種類1．基礎(chǔ)培養(yǎng)基（basedmedium）2．營養(yǎng)培養(yǎng)基（nutrientmedium）3．鑒別培養(yǎng)基（diferentialmedium）4．選擇培養(yǎng)基（selectivemedium）5．特殊培養(yǎng)基（specialmedium）11/20/202236寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第36頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定2．營養(yǎng)培養(yǎng)基（nutrientmedium）最常用的是血瓊脂平板、巧克力血平板等11/20/202237寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第37頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定4．選擇培（selectivemedium）SS瓊脂使致病的沙門菌、志賀菌容易分離到11/20/202238寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第38頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定（三）培養(yǎng)基的選擇根據(jù)標(biāo)本來源和可能存在的病原菌，確定選用各種分離培養(yǎng)基。伊紅美藍(lán)/麥康凱用于篩選革蘭陰性桿菌。11/20/202239寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第39頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定1．平板劃線分離法2．斜面接種法3．液體接種法二、分離及培養(yǎng)（一）細(xì)菌的分離4．穿刺接種法5．傾注平板法6．涂布接種法11/20/202240寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第40頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定三、生化反應(yīng)和鑒定（一）碳水化合物的代謝試驗(yàn)1.糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗(yàn)是鑒定細(xì)菌最主要和最基本的試驗(yàn)，特別對(duì)腸桿菌科細(xì)菌的鑒定尤為重要11/20/202241寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第41頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定3．β―半乳糖苷酶試驗(yàn)（ONPG試驗(yàn)）迅速及遲緩分解乳糖的細(xì)菌ONPG試驗(yàn)為陽性，而不發(fā)酵乳糖的細(xì)菌為陰性。本試驗(yàn)主要用于遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定。11/20/202242寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第42頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定2．吲哚(靛基質(zhì))試驗(yàn)主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。（二）蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝試驗(yàn)1．明膠液化試驗(yàn)主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒別。11/20/202243寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第43頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定4．尿素分解試驗(yàn)主要用于腸桿菌科中變形桿菌屬細(xì)菌的鑒定。5．苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。變形桿菌屬、普羅菲登斯菌屬和摩根菌屬細(xì)菌均為陽性，腸桿菌科中其他細(xì)菌均為陰性。6．氨基酸脫羧酶試驗(yàn)主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。11/20/202244寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第44頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定（四）各種酶類試驗(yàn)1．氧化酶試驗(yàn)主要用于腸桿菌科細(xì)菌與假單胞菌的鑒別。2．過氧化氫酶試驗(yàn)（觸酶試驗(yàn)）用于革蘭陽性球菌的初步分群。11/20/202245寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第45頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定4．脂酶試驗(yàn)主要用于厭氧菌的鑒別。5．卵磷脂酶試驗(yàn)主要用于厭氧菌的鑒定。6．

DNA酶試驗(yàn)在革蘭陽性球菌中只有金黃色葡萄球菌產(chǎn)生

DNA酶，在腸桿菌科中沙雷氏菌和變形桿菌產(chǎn)生此酶。11/20/202246寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第46頁!第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定（五）抑菌試驗(yàn)1．O/129抑菌試驗(yàn)用于弧菌科的屬間鑒別，弧菌屬、鄰單胞菌屬對(duì)O/129敏感，而氣單胞菌屬耐藥。2．桿菌肽試驗(yàn)用于A群鏈球菌與非A群鏈球群的鑒別。3．奧普托欣（Optochin）試驗(yàn)主要用于肺炎鏈球菌與其他鏈球菌的鑒別。11/20/202247寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第47頁!第四節(jié)

細(xì)菌的非培養(yǎng)檢測方法一、免疫學(xué)檢測（一）抗原檢測免疫熒光技術(shù)是利用免疫學(xué)特異性反應(yīng)與熒光示蹤技術(shù)相結(jié)合的顯微鏡檢查手段。既保持了血清學(xué)的高特異性，又極大地提高了檢測的敏感性，在細(xì)菌鑒定方面占有重要地位。常用的方法有直接法、間接法和免疫熒光菌球法。11/20/202248寄生蟲3共53頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第48頁!第四節(jié)

細(xì)菌的非培養(yǎng)檢測方法二、分子生物學(xué)檢測（一）核酸雜交DNA可進(jìn)行變性、