醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1

第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異2021/7/18星期日1醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁(yè)!主要內(nèi)容3-1細(xì)菌的生長(zhǎng)及特性3-2細(xì)菌的遺傳與變異2021/7/18星期日2醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁(yè)!一、生長(zhǎng)與繁殖的概念二、細(xì)菌生長(zhǎng)的測(cè)定方法三、細(xì)菌的生長(zhǎng)特性四、微生物膜的生長(zhǎng)特性2021/7/18星期日3醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁(yè)!3-1-1生長(zhǎng)與繁殖同化作用大于異化作用時(shí)，細(xì)胞質(zhì)的量增加，表現(xiàn)在細(xì)胞體積或重量的不斷增加，這種現(xiàn)象稱生長(zhǎng)。生長(zhǎng)一定程度后細(xì)胞分裂，這就是繁殖。個(gè)體的生長(zhǎng)和繁殖體現(xiàn)為群體的生長(zhǎng)。（微生物重量或數(shù)目的增加）。

群體生長(zhǎng)＝個(gè)體生長(zhǎng)＋個(gè)體繁殖在微生物學(xué)中“只有群體的重復(fù)”才有意義，因此“生長(zhǎng)”一般指群體生長(zhǎng)。2021/7/18星期日4醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁(yè)!（一）計(jì)數(shù)法1、直接計(jì)數(shù)法（顯微鏡）①涂片染色法：一定量樣品涂布在載玻片上，染色后計(jì)數(shù)。②濾膜染色法：一定量樣品過(guò)濾到濾膜上，然后染色計(jì)數(shù)。③比例計(jì)數(shù)法——將已知顆粒濃度的液體與待測(cè)菌液按一定比例混合后在顯微鏡下，測(cè)各自的數(shù)目。2021/7/18星期日5醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁(yè)!2021/7/18星期日6醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁(yè)!數(shù)了80個(gè)小格中有120個(gè)細(xì)菌，樣品中的細(xì)菌濃度是多少？(120個(gè)÷80)×400/1×10-4

ml=600×104個(gè)/ml適用范圍：測(cè)定個(gè)體較大的細(xì)菌或原生動(dòng)物細(xì)菌個(gè)體若太小、過(guò)多，由于每一小格中細(xì)菌層層疊加，相互遮擋，難以準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。數(shù)數(shù)細(xì)菌（或其他微生物或細(xì)胞）數(shù)目，（一般數(shù)16×5=80個(gè)小格），折算樣品細(xì)菌濃度；2021/7/18星期日7醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁(yè)!③比例計(jì)數(shù)法比例——樣品菌液與等體積（或成一定比例）的血液混合，觀測(cè)二者比例如果平均每個(gè)視野中細(xì)菌數(shù)量/紅血球的數(shù)量比例為5.5：1，則細(xì)菌數(shù)量=？5.5×400萬(wàn)個(gè)/ml=2.2×107個(gè)/mL樣品紅血球數(shù)已知(男性400~500萬(wàn)個(gè)／mL，女性350~450萬(wàn)個(gè)／mL)，平均400萬(wàn)個(gè)/mL細(xì)菌紅血球比例計(jì)數(shù)法——將已知顆粒濃度的液體與待測(cè)菌液按一定比例混合后在顯微鏡下，測(cè)各自的數(shù)目。（特點(diǎn)：不要求記體積）2021/7/18星期日8醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁(yè)!5-DTAF:5-(4,6-dichlorotriazinyl)aminofluoresceinDNAOOHOOHOOHNHNNClNClMeasurementoftotalcellcounts全細(xì)胞染色法（死活不分）：DAPI染色，DTAF2021/7/18星期日9醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁(yè)!美藍(lán)染色法（酵母活細(xì)胞計(jì)數(shù)）活細(xì)胞：無(wú)色死細(xì)胞：藍(lán)色活菌直接計(jì)數(shù)（DVC，DirectViableCounts）吖啶橙（AO）染色直接計(jì)數(shù)BacLight染色直接計(jì)數(shù)法N.A.法CTC染色直接計(jì)數(shù)2021/7/18星期日10醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁(yè)!BacLight染色直接計(jì)數(shù)法(一種核酸探針)BacLight染色直接計(jì)數(shù)法：將試劑按照產(chǎn)品要求配制后，取2mL固定后水樣加入60μL所配BacLight染色試劑，避光培養(yǎng)15~20分鐘；然后按照AODC處理方法制片，觀察計(jì)數(shù)視野中發(fā)紅色或綠色熒光的菌體。所用濾光片波段同AODC相同。鏡檢計(jì)數(shù)視野中發(fā)綠色熒光的菌體為活菌。BacLight2021/7/18星期日11醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁(yè)!CTC染色直接計(jì)數(shù)——活菌計(jì)數(shù)將0.2mL1.67%的CTC加入10mL水樣中（CTC最終濃度1mM），避光室溫培養(yǎng)4h，然后2%甲醛固定，再按照AODC法直接鏡檢計(jì)數(shù)視野中的紅色菌體。CTC2021/7/18星期日12醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁(yè)!

rRNA核糖體核酸Oligonucleotideprobe核酸探針FluorescenceFISH（熒光原位雜交法）FluorescenceInsituhybridization16sRNA的堿基組成—設(shè)計(jì)特異的探針（probe）

2021/7/18星期日13醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁(yè)!10μmFISH法DTAF染色土壤中微生物的測(cè)定細(xì)菌同視野2021/7/18星期日14醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁(yè)!2021/7/18星期日15醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁(yè)!無(wú)菌水稀釋平板計(jì)數(shù)法—固體培養(yǎng)法步：菌樣巧妙稀釋得到不同稀釋度（10-x）菌液2021/7/18星期日16醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁(yè)!第四步：計(jì)數(shù)細(xì)菌數(shù)量=？細(xì)菌數(shù)量=數(shù)出的菌落數(shù)/稀釋度例如：10-5稀釋度時(shí)菌落數(shù)為125個(gè)細(xì)菌數(shù)量=125/10-5=1.25×107個(gè)/mL

平板計(jì)數(shù)法是采用最廣的一種活菌計(jì)數(shù)法如國(guó)標(biāo)法水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定。注意：作空白及取平行樣（2～3組）均值減小誤差2021/7/18星期日17醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁(yè)!2、間接計(jì)數(shù)法——一種活菌計(jì)數(shù)法②濾膜法：過(guò)濾到濾膜上（把膜放在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)），然后把濾膜貼到培養(yǎng)基上，細(xì)菌獲得營(yíng)養(yǎng)而生長(zhǎng)，形成菌落?！竽c菌群測(cè)定2021/7/18星期日18醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁(yè)!

332010-4

10-5

10-63

10-

10-210-3

10-410-5（1）稀釋（2）稀釋接種樣品在液體表面加一層無(wú)菌液體石蠟隔絕氧氣恒溫37℃培養(yǎng)14天記錄變黑的試管情況（3）培養(yǎng)1ml+9ml培養(yǎng)基提問(wèn)：為什么有些試管變黑有些沒(méi)有？稀釋程度、取樣概率2021/7/18星期日19醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁(yè)!MPN三管法測(cè)數(shù)統(tǒng)計(jì)表（個(gè)菌/毫升）水中大腸菌群、鐵細(xì)菌、硝化菌、亞硝化菌也用這種方法進(jìn)行數(shù)量統(tǒng)計(jì)。上面例子中數(shù)量指標(biāo)“320”對(duì)應(yīng)的細(xì)菌最可能數(shù)為9.5個(gè)菌/毫升，最低稀釋度為10-4，折算出樣品中菌濃度為

9.5x104個(gè)菌/毫升。②查MPN表2021/7/18星期日20醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁(yè)!細(xì)菌不完全透光，一定范圍內(nèi)菌溶液的混濁度與菌數(shù)量成正比（3）比濁法/光密度法

OD（opticaldensity）Λ＝450~660nm,可見(jiàn)光2021/7/18星期日21醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁(yè)!（5）細(xì)胞含氮量細(xì)菌含氮量12.5%、酵母為7.5%

粗蛋白量＝6.25×N量（6）DNA、蛋白質(zhì)同一細(xì)菌所DNA和蛋白質(zhì)的量相對(duì)穩(wěn)定，所以可以測(cè)DNA、蛋白質(zhì)。（7）ATP、RNA可以反映活性微生物的量（8）微生物醌類

1g細(xì)胞平均含1μmol醌類。（4）測(cè)細(xì)胞含碳量POC（particulateorganiccarbon）POC＝12Xmg/l特點(diǎn)：快、低濃度也可測(cè)TOC（totalorganiccarbon）：總有機(jī)碳DOC（dissolvedorganiccarbon）：溶解性有機(jī)碳2021/7/18星期日22醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁(yè)!Fig.1Bacteriagrowthwithdifferentphosphorus(0～3μg/L)and10μgAOC/L2021/7/18星期日23醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁(yè)!時(shí)間活細(xì)菌重量生長(zhǎng)率上升階段生長(zhǎng)率下降階段內(nèi)源呼吸階段細(xì)菌生長(zhǎng)曲線（按細(xì)菌重量繪制）2021/7/18星期日24醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁(yè)!延滯期、緩慢期（lagphase）細(xì)菌特點(diǎn)：生長(zhǎng)速率常數(shù)近于零細(xì)胞形態(tài)變大，但基本不分裂

rRNA含量增高合成代謝較活躍影響延滯期長(zhǎng)短的因素：接種齡：種子（inoculum）處于什么生長(zhǎng)期。

Ⅰ、Ⅳ>Ⅲ>Ⅱ

接種量：特別是X0/S0，即初期微生物濃度與基質(zhì)濃度的比。產(chǎn)生延滯期的原因：

缺乏分解新環(huán)境中有關(guān)基質(zhì)的酶；缺乏充足的代謝中間產(chǎn)物?？偧?xì)胞數(shù)活細(xì)胞數(shù)ⅠⅡIIIⅣ培養(yǎng)時(shí)間細(xì)胞個(gè)數(shù)底物特點(diǎn)：底物充足2021/7/18星期日25醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁(yè)!指數(shù)期數(shù)學(xué)描述世代時(shí)間n世代數(shù)2021/7/18星期日26醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁(yè)!數(shù)學(xué)表達(dá)生長(zhǎng)下降階段S很低，其濃度對(duì)微生物影響大即有機(jī)物分解速度與其濃度成正比2021/7/18星期日27醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁(yè)!細(xì)菌生長(zhǎng)的數(shù)學(xué)描述生長(zhǎng)與基質(zhì)濃度的關(guān)系微生物比增長(zhǎng)速度：?jiǎn)挝粫r(shí)間，單位微生物量的增加量基質(zhì)濃度s2021/7/18星期日28醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁(yè)!對(duì)于像活性污泥這樣的混合微生物群，也有類似的生長(zhǎng)曲線。細(xì)菌生長(zhǎng)期與廢水生物處理：

水處理中如何避免緩慢期接種對(duì)數(shù)期或代謝旺盛的污泥增加接種量污泥馴化

微生物維持到對(duì)數(shù)期可獲得高的處理能力，即分解速度高，但處理效果不一定好菌活力大，不易凝聚和沉淀需要充足的營(yíng)養(yǎng)物，故得不到好的水質(zhì)2021/7/18星期日29醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第29頁(yè)!食料/微生物代謝速率內(nèi)源呼吸階段生長(zhǎng)率下降階段生長(zhǎng)率上升階段（沉降性能好）（沉降性能差）大多數(shù)活性污泥處理系統(tǒng)運(yùn)行范圍延時(shí)曝氣，污泥消化微生物代謝速率與食料/微生物的關(guān)系注意：各個(gè)階段的食物/菌量比發(fā)生變化，相當(dāng)于活性污泥中的負(fù)荷。F/M（食稀比）2021/7/18星期日30醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第30頁(yè)!4.分批補(bǔ)料式培養(yǎng)（fedbatch）以低速把高濃度的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)連續(xù)加入培養(yǎng)器中，但不出料。體積是隨時(shí)間變化的特點(diǎn)：能任意控制培養(yǎng)液中的底物濃度，所以沒(méi)有流出。供應(yīng)速度與微生物消費(fèi)速度達(dá)到平衡，所以能保持一定的濃度。主要用于：有抑制作用的底物生長(zhǎng)因子添加高濃度菌體培養(yǎng)2021/7/18星期日31醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第31頁(yè)!延滯期加速增長(zhǎng)期恒速增長(zhǎng)期減速增長(zhǎng)期安定期脫落期2021/7/18星期日32醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第32頁(yè)!（1）延滯期：細(xì)胞吸附在固體表面上的過(guò)程（沉降）影響吸附速度的因子：材質(zhì)、表面性質(zhì)、形狀、細(xì)胞的性質(zhì)、操作條件（2）加速增長(zhǎng)期：還沒(méi)有形成完整的膜（3）恒速增長(zhǎng)期：活性細(xì)胞量達(dá)到最大，形成完整的膜。膜表面凹凸不平。2021/7/18星期日33醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第33頁(yè)!2.生物膜的特性（1）有效膜厚并不是全部有活性基質(zhì)的擴(kuò)散細(xì)胞的死亡70～200μm（平均100μm），并不是越厚越好。（2）密度（與膜厚有關(guān)）

微生物膜的濕密度：密度有時(shí)小于水，一般接近于1。（因?yàn)橛袣馀莸拇嬖冢?021/7/18星期日34醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第34頁(yè)!膜厚＝膜體積/載體表面積＝生物膜濕重/表面積生物膜濕重＝（載體＋膜）－載體生物膜生物量的測(cè)定方法：超聲波脫落，按照細(xì)菌數(shù)量測(cè)定。生物膜的測(cè)量方法2021/7/18星期日35醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第35頁(yè)!3-1-2細(xì)菌的生長(zhǎng)測(cè)定方法計(jì)數(shù)法直接計(jì)數(shù)法——借助顯微鏡間接計(jì)數(shù)法——平板計(jì)數(shù)生長(zhǎng)量測(cè)定法測(cè)定重量、體積、含氮量來(lái)反映細(xì)菌的生長(zhǎng)2021/7/18星期日36醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第36頁(yè)!①涂片染色法1視野菌液(ml)＝(0.1ml

／1cm2)*視野面積(cm2)2021/7/18星期日37醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第37頁(yè)!計(jì)數(shù)器(血球計(jì)數(shù)板）測(cè)定法1×10-4

ml菌液2021/7/18星期日38醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第38頁(yè)!②濾膜染色法一定量樣品過(guò)濾到濾膜上，然后染色計(jì)數(shù)。需要知道濾液的體積和濾膜的面積。在顯微鏡下計(jì)數(shù)，方法相同。2021/7/18星期日39醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第39頁(yè)!DAPI:4'6-diamidino-2-phenylindole,dihydrochloride4,6-二脒基-2苯基吲哚DNA2Cl-H2N+NH2CNHH2N

-CNH2Measurementoftotalcellcounts全細(xì)胞染色法（死活不分）：DAPI染色，DTAFDAPI:無(wú)毒性熒光染料，能夠與DAN雙鏈強(qiáng)力結(jié)合并產(chǎn)生熒光。采用358nm紫外光照射能發(fā)射明亮的藍(lán)色熒光。2021/7/18星期日40醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第40頁(yè)!有必要區(qū)分細(xì)菌的死活嗎？飲用水中衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)是TBC<100個(gè)/mL（平板計(jì)數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)），如果我們采用染色顯微鏡檢測(cè)技術(shù)對(duì)剛剛加氯消毒的飲用水進(jìn)行檢測(cè)，可能會(huì)發(fā)現(xiàn)細(xì)菌數(shù)量會(huì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)100個(gè)/mL，是不是飲用水就是不合格的飲用水呢？2021/7/18星期日41醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第41頁(yè)!吖啶橙（AO）染色直接計(jì)數(shù)（AODC）吖啶橙染色直接計(jì)數(shù)法（AODC）：水樣采集后迅速加入甲醛固定，甲醛最終濃度2%；取10mL固定后水樣加入0.5mL0.2%吖啶橙（AcridineOrange，Sigma公司）染色1~2min.；將染色水樣經(jīng)濾膜（孔徑0.2μm，直徑25mm，黑色聚碳酸脂濾膜，Nuclepore公司）過(guò)濾；過(guò)濾后將濾膜置于載玻片上，用落射熒光顯微鏡（日本Nikon，EF-D型）計(jì)數(shù)視野中發(fā)橙色或綠色熒光的菌體；顯微鏡光源為200W汞燈，激發(fā)光濾光片為450~490nm，光束分離濾光片510nm，阻擋濾光片520nm。

吖啶橙染色，在紫外顯微鏡下觀察細(xì)胞的熒光活細(xì)胞：橙色熒光死細(xì)胞：綠色熒光AODC2021/7/18星期日42醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第42頁(yè)!N.A.法向水樣中加入0.002%萘啶酮酸（NA，NalidixicAcid，F(xiàn)luka公司）和0.025%酵母膏（均為最終濃度），避光，25℃培養(yǎng)6h，然后2%甲醛固定，再按照AODC法直接鏡檢計(jì)數(shù)。視野中長(zhǎng)大或變粗的菌體被認(rèn)為是活菌。N.A.2021/7/18星期日43醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第43頁(yè)!

雙重染色10μmDTAF和CTC雙重染色法2021/7/18星期日44醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第44頁(yè)!FISH法的步驟rRNA螢光標(biāo)示探針(Probe)滲透Hybridization螢光顯微鏡觀察、計(jì)數(shù)細(xì)胞2021/7/18星期日45醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第45頁(yè)!2、間接計(jì)數(shù)法——一種活菌計(jì)數(shù)法①平板計(jì)數(shù)法：描述：CFU（colonyformationunit）/mL將一定體積的菌液，均勻涂布在固體培養(yǎng)基上（例如水中細(xì)菌總數(shù)采用的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基），一定溫度下培養(yǎng)，計(jì)數(shù)平板形成的菌落，一個(gè)菌落代表一個(gè)細(xì)菌。計(jì)數(shù)活細(xì)菌，死細(xì)菌不能夠生長(zhǎng)注意：一般可培養(yǎng)的微生物很少，計(jì)數(shù)結(jié)果與采用顯微鏡直接計(jì)數(shù)的結(jié)果差幾百倍，甚至千、萬(wàn)。2021/7/18星期日46醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第46頁(yè)!稀釋平板計(jì)數(shù)法—固體培養(yǎng)法菌樣被無(wú)菌水不同稀釋倍率后平板培養(yǎng)圖2021/7/18星期日47醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第47頁(yè)!

10-210-3

10-410-5

各取1ml，均勻涂布于冷固體培養(yǎng)基平板上或與溫?zé)嵋簯B(tài)固體培養(yǎng)基混合冷卻。第三步：培養(yǎng)稀釋度過(guò)低，菌落密集無(wú)法計(jì)數(shù)可以計(jì)數(shù)，但數(shù)量過(guò)多，費(fèi)時(shí)費(fèi)力數(shù)量合適，統(tǒng)計(jì)計(jì)算，作為結(jié)果數(shù)量太少，誤差因素太大，不做計(jì)數(shù)第二步：接種平板每一個(gè)細(xì)菌會(huì)生成一個(gè)菌落一般計(jì)數(shù)平板的細(xì)菌生長(zhǎng)菌落數(shù)以30~300個(gè)為宜。2021/7/18星期日48醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第48頁(yè)!2021/7/18星期日49醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第49頁(yè)!2、間接計(jì)數(shù)法——一種活菌計(jì)數(shù)法

③液體計(jì)數(shù)法（MPN法，mostprobablenumber法）最可能數(shù)法

特點(diǎn)：液體培養(yǎng)、統(tǒng)計(jì)學(xué)查表計(jì)數(shù)主要用于不能在平板培養(yǎng)基上形成菌落的菌（硝化菌、反硝化菌、硫酸還原菌）將菌接種于液體培養(yǎng)基，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間培養(yǎng)，采用一定的技術(shù)來(lái)檢測(cè)是否有細(xì)菌生長(zhǎng)。例如硫酸鹽還原菌的檢測(cè)是利用它們生長(zhǎng)時(shí)產(chǎn)生的硫化亞鐵黑色特征進(jìn)行檢測(cè)，按MPN法進(jìn)行計(jì)數(shù)。2021/7/18星期日50醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第50頁(yè)!(4)統(tǒng)計(jì)－查表－計(jì)算

①統(tǒng)計(jì)數(shù)量指標(biāo)的確定根據(jù)不同稀釋度變黑試管，得到三位數(shù)及其中最低稀釋度取重復(fù)管數(shù)都有菌生長(zhǎng)的最高稀釋度的生長(zhǎng)管數(shù)，為數(shù)量指標(biāo)的位數(shù)字，后面兩個(gè)稀釋度的生長(zhǎng)管數(shù)后兩位數(shù)提問(wèn)：上例情況而言統(tǒng)計(jì)數(shù)量是幾？

32010-42021/7/18星期日51醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第51頁(yè)!（二）測(cè)生長(zhǎng)量法（1）測(cè)體積：粗放的方法，離心或自然沉降后觀察體積；（2）測(cè)細(xì)胞干重：離心法、過(guò)濾法兩種；

105~110oC下干燥后稱重（干重約為濕重的10~20%）活性污泥濃度測(cè)定方法：MLSS（mixedliquidsuspendedsolid）混合懸浮固體MLVSS（mixedliquidvolatilesuspendedsolid）

550oC、2h、馬福爐2021/7/18星期日52醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第52頁(yè)!

①制標(biāo)準(zhǔn)曲線（OD~No）②測(cè)菌液濁度，查圖表得出細(xì)菌數(shù)量濁度儀或721分光光度儀2021/7/18星期日53醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第53頁(yè)!3-1-3細(xì)菌的生長(zhǎng)特性間歇培養(yǎng)（Batchcultivation）和生長(zhǎng)曲線（growthcurve）將少量細(xì)菌接種于一定量的液體培養(yǎng)基內(nèi)，在一定條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)過(guò)程不投加或取出任何東西。這種培養(yǎng)方式叫間歇培養(yǎng)。細(xì)胞量隨時(shí)間的變化曲線稱生長(zhǎng)曲線。接種2021/7/18星期日54醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第54頁(yè)!總細(xì)胞數(shù)細(xì)菌典型生長(zhǎng)曲線活細(xì)胞數(shù)ⅠⅡIIIⅣ培養(yǎng)時(shí)間細(xì)胞個(gè)數(shù)2021/7/18星期日55醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第55頁(yè)!細(xì)菌生長(zhǎng)曲線（按細(xì)菌數(shù)目的對(duì)數(shù)繪制）00時(shí)間細(xì)菌數(shù)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)速度緩慢期對(duì)數(shù)期穩(wěn)定期衰老期活菌數(shù)總菌數(shù)2021/7/18星期日56醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第56頁(yè)!2）指數(shù)期（exponentialphase）對(duì)數(shù)期、生長(zhǎng)率上升階段細(xì)胞數(shù)（量）以指數(shù)形式增加的時(shí)間段。細(xì)菌特點(diǎn)：生長(zhǎng)速率最大，世代時(shí)間（generationtime）最短酶系活躍、代謝旺盛細(xì)胞進(jìn)行平衡生長(zhǎng)，體內(nèi)各成分最為均勻

底物特點(diǎn)：底物充足，大量被細(xì)菌消耗，降解速率最高總細(xì)胞數(shù)活細(xì)胞數(shù)ⅠⅡIIIⅣ培養(yǎng)時(shí)間細(xì)胞個(gè)數(shù)2021/7/18星期日57醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第57頁(yè)!3）穩(wěn)定期（stationaryphase）：恒定期、靜止期、生長(zhǎng)下降期細(xì)菌特點(diǎn)：凈增長(zhǎng)速度為零繁殖與死亡速度相等正生長(zhǎng)與負(fù)生長(zhǎng)相等底物特點(diǎn)：底物被大量消耗，不能夠維持對(duì)數(shù)期細(xì)菌高生長(zhǎng)速率所需要的有機(jī)物質(zhì)，導(dǎo)致細(xì)菌生長(zhǎng)率下降出現(xiàn)穩(wěn)定期的原因：

營(yíng)養(yǎng)物尤其是生長(zhǎng)因子耗盡營(yíng)養(yǎng)物比例失調(diào)

pH、DO、氧化還原電位的變化總細(xì)胞數(shù)活細(xì)胞數(shù)ⅠⅡIIIⅣ培養(yǎng)時(shí)間細(xì)胞個(gè)數(shù)2021/7/18星期日58醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第58頁(yè)!4）衰亡期（declinephase,deathphase）內(nèi)源呼吸期（endogenousrespirationphase）內(nèi)源呼吸：體內(nèi)貯藏物質(zhì)酶等一部分細(xì)胞物質(zhì)的氧化。細(xì)菌特點(diǎn)：細(xì)胞會(huì)發(fā)生自溶現(xiàn)象（autolysis），蛋白質(zhì)水解酶活力往往產(chǎn)生芽孢出現(xiàn)死亡期的原因：

營(yíng)養(yǎng)物不足外界條件惡化底物特點(diǎn)：底物被微生物大量耗盡，微生物因得不到營(yíng)養(yǎng)而進(jìn)行內(nèi)源呼吸總細(xì)胞數(shù)活細(xì)胞數(shù)ⅠⅡIIIⅣ培養(yǎng)時(shí)間細(xì)胞個(gè)數(shù)2021/7/18星期日59醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第59頁(yè)!Ks:飽和常數(shù)，與的s值相等Ks>>S時(shí)sKsMonod公式（莫諾特公式）經(jīng)驗(yàn)公式（微生物增長(zhǎng)）2021/7/18星期日60醫(yī)學(xué)資料6第三章細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異-1共67頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第60頁(yè)!

處于穩(wěn)定期污泥雖然生長(zhǎng)速度有所下降，但