常用電泳技術(shù)和電泳方法簡(jiǎn)介

常用電泳技術(shù)和電泳方法簡(jiǎn)介濟(jì)寧市中醫(yī)院設(shè)備科科室業(yè)務(wù)學(xué)習(xí)1可編輯ppt一、常用電泳技術(shù)和電泳方法（一）根據(jù)工作原理的不同：可分為移界電泳、區(qū)帶電泳、等速電泳、等電聚焦電泳、免疫電泳等。（二）根據(jù)有無(wú)固體支持物可分為：自由電泳和支持物電泳2可編輯ppt一、常用電泳技術(shù)分類(lèi)（三）根據(jù)支持載體的位置或形狀可分成：水平電泳、垂直電泳、板狀電泳、柱狀電泳、U型管電泳、倒V字形電泳、毛細(xì)管電泳等。（一）根據(jù)支持物的特點(diǎn)又可分為：①無(wú)阻滯支持物電泳。②高密度的凝膠電泳。3可編輯ppt一、常用電泳技術(shù)分類(lèi)（二）根據(jù)電源控制的不同，一般可分為以下3類(lèi)：1.恒壓電泳;2.恒流電泳;3.恒功率電泳。（一）根據(jù)自動(dòng)化程度的不同，可分為半自動(dòng)和全自動(dòng)型。4可編輯ppt一、常用電泳技術(shù)分類(lèi)（七）根據(jù)其功能的不同，可分為制備型、分析型、轉(zhuǎn)移型、濃縮型等。（八）根據(jù)用法的類(lèi)型可分為：雙向電泳、交叉電泳、連續(xù)紙電泳、電泳－層析相結(jié)合技術(shù)等。（九）根據(jù)不同的使用目的可分為：核酸電泳、血清蛋白電泳、制備電泳、DNA測(cè)序電泳等。5可編輯ppt二、電泳方法簡(jiǎn)介（一）紙電泳指用濾紙作為支持載體的電泳方法。是最早使用的區(qū)帶電泳。將濾紙條水平地架設(shè)在兩個(gè)裝有緩沖溶液的容器之間，樣品點(diǎn)于濾紙中央。當(dāng)濾紙條被緩沖液潤(rùn)濕后，再蓋上絕緣密封罩，即可由電泳電源輸入直流電壓（100V～1000V）進(jìn)行電泳。

6可編輯ppt二、電泳方法簡(jiǎn)介（二）醋酸纖維素薄膜電泳電泳時(shí)經(jīng)過(guò)膜的預(yù)處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳的特點(diǎn)是分離速度快、電泳時(shí)間短、樣品用量少。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測(cè)。7可編輯ppt二、電泳方法簡(jiǎn)介（三）凝膠電泳

由區(qū)帶電泳中派生出一種用凝膠物質(zhì)作支持物進(jìn)行電泳的方式，被稱(chēng)為凝膠電泳。普通的凝膠電泳在板上進(jìn)行，以凝膠作為介質(zhì)（多孔性，類(lèi)似分子篩的作用）。電泳中常用的凝膠為葡聚糖、交聯(lián)聚丙烯酰胺和瓊脂糖。它具有機(jī)械強(qiáng)度好、彈性大、透明、化學(xué)穩(wěn)定性高、無(wú)電滲作用、設(shè)備簡(jiǎn)單、樣品量小

(1～100μg）、分辨率高等優(yōu)點(diǎn)。8可編輯ppt二、電泳方法簡(jiǎn)介（一）等電聚焦電泳1．等電聚焦電泳過(guò)程

一種利用有pH值梯度的介質(zhì)，分離等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。將等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)混合物加入有pH值梯度的凝膠介質(zhì)中，在電場(chǎng)內(nèi)經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，各組分將分別聚焦在各自等電點(diǎn)相應(yīng)的pH值位置上，最后，樣品的各組分在各自的等電點(diǎn)聚焦成一條清晰而穩(wěn)定的窄帶。

9可編輯ppt二、電泳方法簡(jiǎn)介2．等電聚焦電泳的特點(diǎn)①使用兩性載體電解質(zhì)，在電極之間形成穩(wěn)定、連續(xù)、線性的pH梯度；②由于“聚焦效應(yīng)”，即使很小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區(qū)帶界面；③電泳速度快;④分辨率高;⑤加入樣品的位置可任意選擇；⑥可用于測(cè)定蛋白質(zhì)類(lèi)物質(zhì)的等電點(diǎn);⑦適用于中、大分子量（如蛋白質(zhì)、肽類(lèi)、同工酶等）生物組分的分離分析。10可編輯ppt二、電泳方法簡(jiǎn)介（二）等速電泳采用兩種不同濃度的電解質(zhì)組成，一種為前導(dǎo)電解質(zhì)，充滿整個(gè)毛細(xì)管柱；另一種為尾隨電解質(zhì)，置于一端的電泳槽中。前導(dǎo)電解質(zhì)的遷移率高于任何樣品組分，后者則低于任何樣品組分，被分離的組分按其不同的遷移率夾在中間，在強(qiáng)電場(chǎng)的作用下，各被分離組分在前導(dǎo)電解質(zhì)與尾隨電解質(zhì)之間的空隙中移動(dòng)，實(shí)現(xiàn)分離。11可編輯ppt二、電泳方法簡(jiǎn)介（一）雙向凝膠電泳（二維電泳）第一向采用等電聚焦根據(jù)復(fù)雜的蛋白質(zhì)成分中各個(gè)蛋白質(zhì)的PI的不同，將蛋白質(zhì)進(jìn)行分離。第二向采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS）就是按蛋白質(zhì)分子量的大小使其在垂直方向進(jìn)行分離。其結(jié)果不再是條帶狀，而是呈現(xiàn)為斑點(diǎn)狀。12可編輯ppt二、電泳方法簡(jiǎn)介膠性PH9中電加解入質(zhì)了溶雙液

PH3加上電場(chǎng)后建立穩(wěn)定PH梯度蛋白質(zhì)溶液加入，建立電場(chǎng)染色后，蛋白質(zhì)因PI值不同，沿PH梯度分離開(kāi)第一向等電聚焦PI逐漸降低等電聚焦膠放在SDS－聚丙烯酰胺凝膠上

第二向SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳分子量逐漸降低

06-07雙向凝膠電泳示意圖PI逐漸降低13可編輯ppt二、電泳方法簡(jiǎn)介（七）免疫電泳

免疫電泳是瓊脂平板電泳和雙相免疫擴(kuò)散兩種方法的結(jié)合。將抗原樣品在瓊脂平板上先進(jìn)行電泳，使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開(kāi)，然后加入抗體做雙相免疫擴(kuò)散，把已分離的各抗原成分與抗體在瓊脂中擴(kuò)散而相遇，在二者比例適當(dāng)?shù)牡胤剑纬扇庋劭梢?jiàn)的沉淀弧。14可編輯ppt三、常用電泳設(shè)備的基本結(jié)構(gòu)（一）電泳電源（二）電泳槽（三）附加裝置15可編輯ppt四、電泳儀的主要技術(shù)指標(biāo) 1．輸出電壓8．連續(xù)工作時(shí)間2．輸出電流9．保護(hù)措施3．輸出功率