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文檔簡介
流式細(xì)胞術(shù)
(FlowCytometry,FCM)作者:笛風(fēng)流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!1、流式細(xì)胞儀(FlowCytometer):是集光電子物理,光電測(cè)量,計(jì)算機(jī),細(xì)胞熒光化學(xué),單抗技術(shù)為一體的高科技細(xì)胞分析儀。2、流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry):利用流式細(xì)胞儀對(duì)處于快速流動(dòng)的細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行多參數(shù)、快速(每秒可達(dá)1000-10000個(gè))的定量分析和分選(純度可達(dá)99%以上)的技術(shù)?;靖拍盍魇郊?xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!流式細(xì)胞儀結(jié)構(gòu)
?激光光源及光束形成系統(tǒng)?流動(dòng)室及液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)?光學(xué)系統(tǒng):透鏡、濾光片、小孔,聚焦光源,收集不同波長的熒光信號(hào)。?信號(hào)檢測(cè)與分析:光電倍增管(PMT)、補(bǔ)償電路。熒光信號(hào)轉(zhuǎn)換為電信號(hào),并將信號(hào)放大。?存儲(chǔ)、顯示、分析系統(tǒng):計(jì)算機(jī)。?細(xì)胞分選系統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!FCM的主要測(cè)定指標(biāo)FSC,SSC,FL1,FL2,FL3(FL4)其中: FSC:反映細(xì)胞的大小 SSC:反映細(xì)胞內(nèi)顆粒性流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!熒光素種類FITC(異硫氰酸熒光素):綠色530nmPE(藻紅蛋白):橙黃色575nmPerCP(多甲藻黃素葉綠素蛋白):深紅色 675nmPI(碘化丙啶):橙紅色620nm 488nm波長的氬離子激光激發(fā)APC(別藻蘭蛋白):紅色660nm630nm波長的氦氖激光或紅色二極管激光激發(fā)流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!數(shù)據(jù)顯示方式單參數(shù)直方圖雙參數(shù)二維點(diǎn)圖等高圖二維密度圖三維圖流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!流式細(xì)胞的主要信息:FluorescenceFL1FL2FL3FL4最常用的標(biāo)記方法是熒光素分子標(biāo)記的抗體與細(xì)胞抗原結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!流式常見圖形(DotPlot)適用于:多參數(shù)分析流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!流式應(yīng)用常見范圍細(xì)胞大小細(xì)胞的顆粒度細(xì)胞表面分子:CD系列細(xì)胞漿內(nèi)分子:胞內(nèi)細(xì)胞因子細(xì)胞核內(nèi)分子:P53細(xì)胞功能檢測(cè):細(xì)胞周期、凋亡流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!抗體的選擇首選直接標(biāo)記抗體熒光分子PE最強(qiáng),適用于弱表達(dá)抗原FITC最便宜,適用于強(qiáng)表達(dá)抗原間接標(biāo)記:適用范圍廣,biotin-avidin不適合弱抗原的檢測(cè)流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁!空白對(duì)照和陰性對(duì)照的比較:流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁!流式檢測(cè)應(yīng)用實(shí)例凋亡細(xì)胞內(nèi)分子檢測(cè)流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁!細(xì)胞周期G1MG2SQuiescentcellsG0流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁!Caspases流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁!AnnexinVAssay能夠區(qū)分死亡與凋亡流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁!流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁!IntracellularCytokine-Protocol流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁!SORTING(細(xì)胞分選)流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁!CBA(CytometricBeadArray)流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁!DeterminationoftheCD4PEABConlymphocytes
110100100010000LinearFluorescenceinFL2102103104cellandbeadneglymphFL2;(49,000ABC)MoleculesPEperBead105流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁!流式細(xì)胞白血病免疫分型流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁!FCM應(yīng)用1、細(xì)胞增殖周期測(cè)定和DNA倍體分析2、凋亡檢測(cè)3、免疫功能的檢測(cè)4、血液學(xué)應(yīng)用5、HLA-B27的檢測(cè):用于診斷強(qiáng)直性脊柱炎。6、其他:溶液中細(xì)胞因子的測(cè)量。7、細(xì)胞分選流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁!2)利用DNA的熒光染料,如PI(Propidiumiodide碘化丙啶),與細(xì)胞內(nèi)的DNA結(jié)合,可反映細(xì)胞內(nèi)DNA含量。采用DNA直方圖顯示。具有2CDNA含量細(xì)胞為G0/G1期細(xì)胞,4CDNA含量細(xì)胞為G2/M期細(xì)胞,DNA含量介于兩者之間的細(xì)胞為S期細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁!流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁!流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁!2)DNA鏈損傷“TUNEL”法3)Annexin-V-FITC/PI雙染法4)線粒體細(xì)胞膜電位的檢測(cè)5)凋亡相關(guān)基因的檢測(cè)——免疫標(biāo)記法檢測(cè)基因流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁!流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁!第六節(jié)FCM在血液學(xué)中的應(yīng)用1)白血病和淋巴瘤的免疫分型,目前對(duì)白血病和淋巴瘤的診斷,國際上提出MIC分型,即通過形態(tài)(M)、免疫分型(I)、細(xì)胞遺傳學(xué)(C)檢測(cè),對(duì)白血病和淋巴瘤進(jìn)行綜合診斷,免疫分型是重要的檢測(cè)項(xiàng)目之一?,F(xiàn)在多應(yīng)用多參數(shù)的流式細(xì)胞術(shù),不同抗體分別被幾種熒光素標(biāo)記:熒光(FL1):FITC(異硫氰酸熒光素,F(xiàn)luoresceinisothiocyanate),F(xiàn)L2:PE(藻紅蛋白,Phycoerythrin)FL3:PerCP(多甲藻黃素葉綠素蛋白,peridininchlorophyllprotein),F(xiàn)L4:APC(別藻蘭蛋白allophycocyanin,)流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁!4)陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(PNH)的發(fā)病機(jī)制為X染色體上的PIG-A基因發(fā)生突變,引起糖化肌醇脂(GPI)錨合成障礙,使GPI錨連蛋白缺乏,已證實(shí)的GPI錨連蛋白有10余種,用于PNH診斷的主要為CD55和CD59兩種,如果在紅細(xì)胞或WBC上出現(xiàn)CD55或/和CD59的減少,可診斷為PNH。流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第29頁!流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第30頁!第七節(jié)其他應(yīng)用溶液中細(xì)胞因子的測(cè)量:利用吸附有特異性抗體的微球,與溶液中的細(xì)胞因子結(jié)合,而檢測(cè)溶液中是否存在該種因子HLA-B27的檢測(cè):用于診斷強(qiáng)直性脊柱炎。流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第31頁!淋巴20-25%:T:70%,B:20%,NK:10%;
單核2-6%+粒細(xì)胞:40-60%有核紅:20-25%
正常BM各系細(xì)胞比率流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第32頁!1.系列交叉(cross-lineage):AML表達(dá)CD2,CD192.表達(dá)不同步(asynchronous):早期與晚期抗原同時(shí)表達(dá)3.表達(dá)量異常(over-orunder-expression):4.與細(xì)胞大小不匹配(abnormallightscatterprofile):如大CD2+細(xì)胞或小CD13+細(xì)胞AL免疫表型特點(diǎn):紊亂表型流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第33頁!Gating流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第34頁!流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第35頁!正常B細(xì)胞標(biāo)志CD19CD22TdTCd34CD10CD20FMC7CD23DRI期++++++II期++--+-/++III期++---++IV期++---++++泛B標(biāo)志:CD19,HLA-DR,cCD79a/CD22幼稚B標(biāo)志:CD34,TdT,CD10成熟B標(biāo)志:CD23,FMC7流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第36頁!正常T細(xì)胞標(biāo)志:根據(jù)在胸腺內(nèi)發(fā)育階段分類CD7CD2CD5CD34CD1aCD3c/mCD4CD8I期+++++/-II期+++-++/-III期+++-++/+++IV期+++--+/++/-+/-泛T:CD2,CD5,CD7,cCD3幼稚T:CD34,TdT,CD1a,CD4/8成熟T:CD3,CD4,CD8流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第37頁!正常單核細(xì)胞標(biāo)志全單核細(xì)胞標(biāo)志:CD33,CD13,HLA-DR幼稚單核細(xì)胞標(biāo)志:CD34,CD117成熟單核細(xì)胞標(biāo)志:CD14,CD64HLA-DRCD33CD13CD34CD117CD14CD64幼稚單+++++--成熟單+++--++流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第38頁!成熟粒、單核細(xì)胞主要區(qū)別成熟粒細(xì)胞:CD33+HLA-DR-CD14-CD64+dim成熟單核細(xì)胞:CD33++HLA-DR+CD14+CD64++流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第39頁!診斷白血病主要標(biāo)志:B-ALL: CD34,HLA-DR,CD19,CD10+/-,cCD79aT-ALL: CD34,CD38,CD7,CD2+/-,CD5+/-,cCD3AML: CD34,CD117,CD33,CD13,cMPO M3:CD34-,HLA-DR- M2:CD19+:t(8,21) M4/M5:CD14+ M6:GlyA+,CD71+ M7:IIb/IIIa(CD41,CD61)+流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第40頁!DiagnosisCD5CD10CD19CD20CD23CD79bFCM-7CD25CD11cCD103SLL/CLL+-+++---/++/--Mantalcelllymphoma+-++-++---Folliclecenterlym-+++-/++/-+/----Marginalzonelym--++-+/-+/--/++-HCL--++-+/-+/-+/-++CommonphenotyesofB-celllymphoproliferativedisorders
流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第41頁!流式免疫分型技術(shù)要點(diǎn)標(biāo)本的獲取和運(yùn)輸標(biāo)本的制備和染色儀器的校準(zhǔn)和質(zhì)控流式細(xì)胞儀數(shù)據(jù)獲取與儲(chǔ)存流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第42頁!FCM標(biāo)記方法單標(biāo):一種單抗/tube:FL1,FSC,SSC(三參數(shù))雙標(biāo):(兩種單抗/tube):FL1,FL1,FSC,SSC(四參數(shù))三/四標(biāo):(三種單抗/tube)(四種單抗/tube): FL1-FL3/4,FSC,SSC流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第43頁!
PE最強(qiáng),適用于弱表達(dá)抗原FITC最便宜,適用于強(qiáng)表達(dá)抗原,適用范圍廣biotin-avidin不適合弱抗原的檢測(cè)抗體的選擇流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第44頁!流式常見圖形(HistogramPlot)流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第45頁!流式常見圖形(HistogramPlot)適用于:單參數(shù)分析流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第46頁!第二節(jié)流式細(xì)胞術(shù)的科研應(yīng)用分析群體細(xì)胞所需時(shí)間短多參數(shù)分析定性或定量流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第47頁!抗體標(biāo)記的方法流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第48頁!實(shí)驗(yàn)對(duì)照的設(shè)計(jì)空白對(duì)照:ALL陰性對(duì)照:常用同型抗體對(duì)照單色分析:設(shè)同型抗體對(duì)照多色分析:同型對(duì)照,單陽性對(duì)照(用于儀器校正)陽性對(duì)照:檢測(cè)陰性時(shí)流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第49頁!實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的處理單細(xì)胞懸液的制備:胰酶消化抗體或標(biāo)記分子的染色:抗原抗體反應(yīng)非特異結(jié)合的去除:洗滌和封閉封閉:血清和同型抗體流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第50頁!凋亡檢測(cè)-每一步都有檢測(cè)試劑盒流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第51頁!細(xì)胞周期不能區(qū)分凋亡與死亡細(xì)胞
Sub-G0/G1peaks---PIstaining流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第52頁!AnnexinVAssay建議用于懸浮細(xì)胞流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第53頁!流式“TUNEL”流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第54頁!流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第55頁!流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第56頁!DIMERXantigenspecificTcellassaymethodformonitoringcellularresponse
流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第57頁!TraditionalAnalysis--Percentpositive流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第58頁!第三節(jié)流式細(xì)胞術(shù)的臨床應(yīng)用白血病免疫分型HLA-B27:強(qiáng)直性脊柱炎淋巴細(xì)胞亞群造血干細(xì)胞計(jì)數(shù):造血干細(xì)胞移植網(wǎng)織紅細(xì)胞PNH診斷(CD55、CD59)血小板活化試驗(yàn)流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第59頁!流式細(xì)胞的免疫分型是白血病分型的重要指標(biāo)FAB標(biāo)準(zhǔn),形態(tài)學(xué)和免疫表型結(jié)合適合于白血病的分型診斷,但不適合用于確診是不是白血病。Minimalresidualdiseases(MRD)流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第60頁!細(xì)胞增殖周期測(cè)定和DNA倍體分析1)細(xì)胞增殖周期:分為G0、G1、S、G2、M期。S期是DNA合成期,在S期內(nèi),DNA進(jìn)行復(fù)制,使細(xì)胞的DNA含量由2倍體(2C46條染色體)變?yōu)?倍體(4C)。G1和G2期為DNA合成前、后間期,此期無DNA的合成,但RNA和蛋白質(zhì)進(jìn)行合成。M期為有絲分裂期,在此期一個(gè)細(xì)胞分裂為2個(gè)細(xì)胞。細(xì)胞內(nèi)的92條染色體分裂成2組46條染色體,使每個(gè)細(xì)胞內(nèi)具有46條染色體。在M期分裂成兩個(gè)子細(xì)胞之前,G2和M期細(xì)胞的DNA含量均為恒定的4C。M期以后部分細(xì)胞進(jìn)入G1期,繼續(xù)進(jìn)行增殖,部分細(xì)胞進(jìn)入G0期,即靜止期,不再繼續(xù)增殖。因此,F(xiàn)CM分析一個(gè)群體細(xì)胞峰DNA倍體與細(xì)胞周期時(shí),將DNA含量直方圖分為三部分,即G0/G1,S,G2/M期三個(gè)細(xì)胞峰。G0/G1和G2/M細(xì)胞峰DNA的含量成正態(tài)分布,S期細(xì)胞峰則是一個(gè)加寬的正態(tài)分布。流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第61頁!3)DNA倍體:主要比較G0/G1期細(xì)胞DNA含量的變化。用DNA指數(shù)(DI)表示。DNA指數(shù)=測(cè)量樣本G0/G1期DNA含量/正常人淋巴細(xì)胞G0/G1期DNA含量以正常人淋巴細(xì)胞作為對(duì)照。正常細(xì)胞DNA指數(shù)為1.00,DNA指數(shù)>1,為超2倍體,<1為亞2倍體,兩者可統(tǒng)稱為非整倍體。非整倍體細(xì)胞中腫瘤的特異性標(biāo)志,實(shí)體腫瘤中出現(xiàn)頻率較高。流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第62頁!流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第63頁!第四節(jié)凋亡檢測(cè)1)FCM-DNA檢測(cè)(DNA亞G1峰的檢測(cè)):利用PI染色,檢測(cè)具有亞G1期DNA含量的細(xì)胞比例,代表凋亡細(xì)胞數(shù)。其原理為在凋亡過程中,細(xì)胞內(nèi)核酸酶的釋放,將DNA降解,分解成小的片段,在標(biāo)本制備中的固定處理時(shí),細(xì)胞膜的完整性被破壞,使細(xì)胞內(nèi)降解的DNA片段從細(xì)胞內(nèi)流出,造成總體DNA含量減少,成為亞2倍體。注:檢測(cè)的凋亡細(xì)胞數(shù)代表晚期的凋亡細(xì)胞比例,且易受標(biāo)本中的死細(xì)胞和碎片的干擾,影響結(jié)果的準(zhǔn)確性??蓞⒖次恼拢?/content/cell/20040914791./content/cell/20040914792.htm流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第64頁!流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第65頁!第五節(jié)免疫功能的檢測(cè)(1)利用多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù),對(duì)PB中淋巴細(xì)胞比例,及淋巴細(xì)胞中T、B、NK細(xì)胞的比例,及T細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測(cè)。如CD3+(總T細(xì)胞);CD19+(總B細(xì)胞),CD3-/(CD16+5(NK細(xì)胞)。3+/CD4+(Th/Ti):輔助/誘導(dǎo);CD3+/CD4+/CD5RA+:na?ve輔助/誘導(dǎo)T細(xì)胞;CD3+/CD4+/CD45R0+:記憶性輔助/誘導(dǎo)T細(xì)胞;D3+/CD8+(Ts/Tc):抑制/殺傷;CD3+/CD8/45RA+:na?ve抑制/殺傷T細(xì)胞;CD3+/CD8+/CD45R0+:記憶性抑制/殺傷T細(xì)胞。胞內(nèi)細(xì)胞因子的檢測(cè):CD4+/IL-4+,Th1細(xì)胞,CD4+/IFN-γ+。(2)臨床應(yīng)用:原發(fā)性或繼發(fā)性免疫缺陷病、自身免疫性疾病、淋巴細(xì)胞增殖病、腫瘤療效觀察與預(yù)后判斷、移植免疫檢測(cè)等。流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第66頁!2)CD34+造血干/祖細(xì)胞的檢測(cè)。主要用于干細(xì)胞移植及基因治療方面的檢測(cè)。3)活化血小板及網(wǎng)織血小板的檢測(cè),在栓塞性疾病,如腦血管和心肌梗塞的患者,可出現(xiàn)活化的血小板增多。而血小板減少的患者,如果出現(xiàn)網(wǎng)織血小板增多,則說明血小板減少的原因?yàn)檠“迤茐倪^多所致。流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第67頁!流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第68頁!5)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)6)白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第69頁!第八節(jié)細(xì)胞分選
FCM可將樣本中所需要的細(xì)胞亞群從群體細(xì)胞中分離出來,即所謂分選(Sorting)。被測(cè)細(xì)胞的任何參數(shù)均可作為分選的依據(jù)。分選的方式一般有靜電分選和捕獲管分選,分選方式不同則決定分選的速度,分選純度一般可達(dá)99%以上。除細(xì)胞分選外還可進(jìn)行染色體分選。分選的細(xì)胞可用于克隆化培養(yǎng)、原位雜交、分子生物學(xué)研究等。從孕婦外周血中分離富集胎兒有核紅細(xì)胞用于產(chǎn)前診斷,染色體分選可用于基因診斷。流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第70頁!是白細(xì)胞(包括血小板、血管內(nèi)皮細(xì)胞等)在正常分化成熟的不同階段以及活化過程中在這些不同譜系(lineage)細(xì)胞胞漿或細(xì)胞膜表面出現(xiàn)或消失的標(biāo)記,參與機(jī)體重要的生理和病理過程。八十年代在WHO和國際免疫學(xué)聯(lián)合會(huì)(IUIS)組織下,將識(shí)別同一分化抗原的來自不同實(shí)驗(yàn)室的單克隆抗體歸為一個(gè)分化群CD:clusterofdifferentiation/clusterdesignation
白細(xì)胞分化抗原流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第71頁!鑒別淋髓系列
區(qū)分亞型
雙表型、雜合型
Mo、M7、AUL
提示細(xì)胞遺傳學(xué)異常
部分與預(yù)后相關(guān)
MDR監(jiān)測(cè)AL免疫表型檢測(cè)意義流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第72頁!FCM設(shè)門法FSC/SSC:不能將淋巴、單核及幼稚細(xì)胞區(qū)分開CD45/SSC:CD45是WBC抗原,RBC.PLT為陰性。CD45在成熟細(xì)胞表達(dá)強(qiáng),幼稚細(xì)胞表達(dá)弱。在淋巴,單核及粒細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度不同。 優(yōu)點(diǎn):能將淋巴單核及幼稚細(xì)胞區(qū)分開,特異分析白血病細(xì)胞免疫表型。流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第73頁!正常血細(xì)胞分化發(fā)育過程中免疫標(biāo)志變化特點(diǎn)以及白血病細(xì)胞免疫標(biāo)志特點(diǎn)常用各系血細(xì)胞CD抗原1、T系:CD1-CD8(CD6不用)2、B系:CD10,CD19-CD24,FMC73、髓系:CD11b,CD13-CD16,CD33,CD644、干祖:CD34,CD117,CD38,HLA-DR流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第74頁!B-ALL的分型亞型CD19CD34TdTCD10CylgSmIg急性早期B前體細(xì)胞白血病EarlyB-precursorALL++++--急性前B細(xì)胞白血病PreB-ALL+-/++++-急性B細(xì)胞白血病B-ALL+----/++流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry-FCM)描述共80頁,您現(xiàn)在瀏覽的是第75頁!T-ALL的分類分型CD7CD2TdTCD3c/m急性早期T前體細(xì)胞白血病EarlyTprecursorALL+-++/-急性T細(xì)胞白血病T-ALL++-+/+T-ALL特點(diǎn):1,幼稚T細(xì)胞數(shù)量增多:CD34+,TdT+↑2,泛T標(biāo)志丟失3,CD
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