化驗(yàn)員基礎(chǔ)培訓(xùn)之儀器分析法課件

化驗(yàn)員基礎(chǔ)培訓(xùn)之—儀器分析方法廣州威斯寶藥業(yè)有限公司質(zhì)量部化驗(yàn)員基礎(chǔ)培訓(xùn)之—儀器分析方法廣州威斯寶藥業(yè)有限公司1紫外-可見分光光度法一、原理可見光、紫外線照射某些物質(zhì)，主要是由于物質(zhì)分子中價(jià)電子能級(jí)躍遷對(duì)輻射的吸收，而產(chǎn)生化合物的可見紫外吸收光譜?；谖镔|(zhì)對(duì)光的選擇性吸收的特性而建立分光光度法或稱吸收光譜法的分析方法。它是以朗伯──比耳定律為基礎(chǔ)。1朗伯—比耳定律A=lg—-=ECLT式中A為吸收度；T為透光率；E為吸收系數(shù)，采用的表示方法是（E１％１ｃｍ），其物理意義為當(dāng)溶液濃度為1%（g/ml），液層厚度為1cm時(shí)的吸收度數(shù)值；C為100ml溶液中所含被測(cè)物質(zhì)的重量（按干燥品或無水物計(jì)算），g；L為液層厚度，cm。紫外-可見分光光度法一、原理2二、使用范圍凡具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物，根據(jù)在特定吸收波長(zhǎng)處所測(cè)得的吸收度，可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測(cè)定。三、儀器可見-紫外分光光度計(jì)。其應(yīng)用波長(zhǎng)范圍為200～400nm的紫外光區(qū)、400～850nm的可見光區(qū)。主要由輻射源（光源）、色散系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、吸收池、數(shù)據(jù)處理機(jī)、自動(dòng)記錄器及顯示器等部件組成。二、使用范圍3四、儀器的校正1.波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度試驗(yàn)以儀器顯示的波長(zhǎng)數(shù)值與單色光的實(shí)際波長(zhǎng)值之間誤差表示，應(yīng)在±1.0nm范圍內(nèi)?？捎脙x器中氘燈的486.02nm與656.10nm譜線進(jìn)行校正。2.吸收度的準(zhǔn)確度試驗(yàn)3.雜散光的試驗(yàn)4.波長(zhǎng)重現(xiàn)性試驗(yàn)5.分辨率試驗(yàn)四、儀器的校正4五、測(cè)定方法1.對(duì)照品比較法（1）按各品種項(xiàng)下的方法，分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液，對(duì)照品溶液中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分標(biāo)示量的100±10%，所用溶劑也應(yīng)完全一致，在規(guī)定的波長(zhǎng)測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸收度后，按下式計(jì)算含量，即得。（2）計(jì)算式A樣×G對(duì)/稀釋倍數(shù)×100×1含量（%）=————————————--×100%A對(duì)×G樣/稀釋倍數(shù)×100×1五、測(cè)定方法52.吸收系數(shù)法（1）按各品種項(xiàng)下的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定其吸收度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計(jì)算含量。用本法測(cè)定時(shí)，應(yīng)注意儀器的校正和檢定。（2）計(jì)算式

A樣含量（%）=——————————————-×100%G樣/稀釋倍數(shù)×(E１％１ｃｍ)對(duì)×100×12.吸收系數(shù)法63.計(jì)算分光光度法采用計(jì)算分光光度法應(yīng)慎重。本法有多種，使用時(shí)均應(yīng)按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行。當(dāng)吸收度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測(cè)定時(shí)，波長(zhǎng)的微小變化可能對(duì)測(cè)定結(jié)果造成顯著影響，故對(duì)照品和供試品測(cè)試條件應(yīng)盡可能一致。若測(cè)定時(shí)不用對(duì)照品，如維生素A測(cè)定法，則應(yīng)在測(cè)定時(shí)對(duì)儀器作仔細(xì)的校正和檢定。3.計(jì)算分光光度法7六、注意事項(xiàng)1.空白溶液與供試品溶液必須澄清，不得有渾濁。如有渾濁，應(yīng)預(yù)先過濾，并棄去初濾液。2.測(cè)定時(shí)，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同瓶溶劑為空白對(duì)照，采用1cm的石英吸收池。3.在規(guī)定的吸收峰波長(zhǎng)±2nm以內(nèi)測(cè)試幾個(gè)點(diǎn)的吸收度，以核對(duì)供試品的吸收峰波長(zhǎng)位置是否正確，除另有規(guī)定外，吸收峰波長(zhǎng)應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長(zhǎng)±2nm以內(nèi)；否則應(yīng)考慮該試樣的真?zhèn)?、純度以及儀器波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度，并以吸收度最大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。六、注意事項(xiàng)84.一般供試品溶液的吸收度讀數(shù)，以在0.3～0.7之間的誤差較小。5.吸收池應(yīng)選擇配對(duì)，否則要引入測(cè)定誤差。在規(guī)定波長(zhǎng)下兩個(gè)吸收池的透光率相差小于0.5％的吸收池作配對(duì)，在必要的情況時(shí)，須在最終測(cè)量扣除吸收池間的誤差修正值。6.由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測(cè)定供試品的吸收度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再計(jì)算含量。7.儀器的接地必須良好，一切裸露的零件對(duì)地電位不得超過24伏（測(cè)電筆的氖管不得發(fā)亮）。8.在使用過程中，如需開啟試樣室蓋時(shí)或暫時(shí)停止測(cè)試時(shí)，必須及時(shí)推入光門鈕桿（使光電管前光門關(guān)閉），保護(hù)光電管，以防止光電管受強(qiáng)光或長(zhǎng)時(shí)間照射而損壞。4.一般供試品溶液的吸收度讀數(shù)，以在0.3～0.7之間的誤99.在測(cè)定時(shí)或改測(cè)其它檢品時(shí)，應(yīng)用待測(cè)溶液沖洗吸收池3～4次，用干凈綢布或擦鏡紙擦凈吸收池的透光面至不留斑痕（切忌把透光面磨損）。10.取吸收池時(shí)，應(yīng)拿毛玻璃兩面，切忌用手拿捏透光面，以免粘上油污。使用完后及時(shí)用測(cè)定溶劑沖凈，再用純化水沖凈，用干凈綢布或擦鏡紙擦干，晾干后，放入吸收池盒中，防塵保存。11.若吸收池內(nèi)外壁沾污，兩池差較大的處理。（1）可用綢布纏在扁竹條外或用脫脂棉纏在細(xì)玻璃棒上蘸上乙醇，輕輕摩擦，再用純化水沖凈。（2）如上述方法處理不好，必要時(shí)可用重鉻酸鉀-硫酸洗液泡洗1～2分鐘，用自來水沖凈，再用純化水沖凈。（3）不得用毛刷刷洗或硬物拭擦，以防止表面光潔度受損影響正常使用。9.在測(cè)定時(shí)或改測(cè)其它檢品時(shí)，應(yīng)用待測(cè)溶液沖洗吸收池3～4次1012.請(qǐng)務(wù)必注意經(jīng)常保持硅膠的干燥，目的是保護(hù)光學(xué)元件和光電放大器系統(tǒng)不致受潮損壞而影響儀器的正常工作，如發(fā)現(xiàn)有的硅膠由藍(lán)色變?yōu)榉奂t色，應(yīng)立即更換。該儀器干燥劑筒有兩個(gè)：一個(gè)是裝在放大器暗盒上，另一個(gè)裝在單色光器暗盒上。13.在更換硅膠干燥劑時(shí)，應(yīng)關(guān)閉切斷電源。14.在停止工作期間，主機(jī)試樣室內(nèi)應(yīng)放入袋裝或筒裝硅膠干燥劑。用防塵罩罩住整個(gè)儀器，并在防塵罩內(nèi)放數(shù)袋防潮硅膠。15.儀器在操作中，狹縫的寬度應(yīng)從小逐漸開大。若狹縫過大，由于進(jìn)入光電管的光能量強(qiáng)度過大，將會(huì)使放大器輸出信號(hào)達(dá)到飽和，以至數(shù)字顯示出溢出（即數(shù)字閃爍或示1不變）。這不是儀器有故障。16.將波長(zhǎng)旋轉(zhuǎn)放在625nm，鋏縫關(guān)閉在0.02nm附近，選擇按鍵恢復(fù)在停止工作部位（即三個(gè)鍵均彈出）。12.請(qǐng)務(wù)必注意經(jīng)常保持硅膠的干燥，目的是保護(hù)光學(xué)元件和光1117.搬動(dòng)儀器時(shí)應(yīng)搬在主體端，不要搬在試樣室和光電管盒端以及光源燈室部位，以防止儀器狹縫或光路部件受力而發(fā)生變形。并在搬動(dòng)或運(yùn)輸時(shí)，應(yīng)將可動(dòng)部分固定，如各旋鈕可用膠布貼住，狹縫位置開大些，然后固定，不要關(guān)小狹縫，以免運(yùn)輸時(shí)振動(dòng)使狹縫刀口受損壞。18.儀器的光柵、反射鏡絕對(duì)不能擦拭，否則將損壞儀器光學(xué)表面，增加雜散光。19.儀器經(jīng)過搬動(dòng)請(qǐng)及時(shí)檢查并糾正波長(zhǎng)精度，為保證測(cè)定的準(zhǔn)確性請(qǐng)經(jīng)常校準(zhǔn)波長(zhǎng)精度。如有異常，應(yīng)立即報(bào)告質(zhì)量保證部，但不得擅自調(diào)整，并及時(shí)做好記錄。17.搬動(dòng)儀器時(shí)應(yīng)搬在主體端，不要搬在試樣室和光電管盒端以及12高效液相色譜法一、原理高效液相色譜法是用高壓輸液泵將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相，壓入裝有固定相的色譜柱，經(jīng)進(jìn)樣閥注入供試品，由流動(dòng)相帶入柱內(nèi)，在柱內(nèi)各成分被分離后，依次進(jìn)入檢測(cè)器，色譜信號(hào)由記錄儀或積分儀記錄。二、適用范圍高效液相色譜法是一種分離分析方法，適用于揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的高分子化合物以及離子型化合物等的定性、定量分析。中國(guó)藥典主要用于藥品的含量測(cè)定、有關(guān)物質(zhì)檢查、雜質(zhì)限度檢查和鑒別等。高效液相色譜法一、原理13三、儀器高效液相色譜儀主要由輸液泵系統(tǒng)、進(jìn)樣器系統(tǒng)、色譜柱、檢測(cè)器、記錄器、顯示器及數(shù)據(jù)處理機(jī)（或兼有組分收集系統(tǒng)）等組成。使用時(shí)應(yīng)按儀器的說明書進(jìn)行操作。四、儀器的校正1.高效液相色譜儀的柱箱控溫精度、基線噪聲、基線漂移、靈敏度或檢測(cè)限、線性范圍的檢定均按儀器說明書的技術(shù)要求進(jìn)行校驗(yàn)，應(yīng)符合規(guī)定。2.以紫外-可見光檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、差示折光檢測(cè)器為檢測(cè)器的實(shí)驗(yàn)室通用液相色譜儀的檢定，所用各種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)使用經(jīng)國(guó)家技術(shù)監(jiān)督部門批準(zhǔn)頒發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。三、儀器143.泵的耐壓試驗(yàn)4.泵流量設(shè)定值誤差、流量穩(wěn)定性誤差的試驗(yàn)5.柱恒溫箱溫度設(shè)定值誤差和控溫穩(wěn)定性誤差的試驗(yàn)6.梯度準(zhǔn)確度的試驗(yàn)7.定性定量重現(xiàn)性的試驗(yàn)3.泵的耐壓試驗(yàn)15五、對(duì)儀器的一般要求1.色譜柱的填充劑和流動(dòng)相的組分應(yīng)按各品種項(xiàng)下的規(guī)定。常用的色譜柱填充劑有硅膠（正相色譜）和化學(xué)鍵合硅膠，后者以十八烷基硅烷鍵合硅膠（反相色譜）最為常用，辛基硅烷鍵合硅膠次之，氰基或氨基鍵合硅膠也有使用。離子交換填充劑用于離子交換色譜；凝膠或玻璃微球等填充劑用于分子排阻色譜等。除另有規(guī)定外，柱溫為室溫，檢測(cè)器為紫外吸收檢測(cè)器。2.藥典正文中各品種項(xiàng)下規(guī)定的條件除固定相種類、流動(dòng)相組分、檢測(cè)器類型不得任意改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度、固定相牌號(hào)、載體粒度、流動(dòng)相流速、混合流動(dòng)相各組分的比例、柱溫、進(jìn)樣量、檢測(cè)器的靈敏度等，均可適當(dāng)改變，以適應(yīng)具體品種并達(dá)到系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。3.一般色譜圖約于20分鐘內(nèi)記錄完畢五、對(duì)儀器的一般要求16六、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)按各品種項(xiàng)下要求對(duì)儀器進(jìn)行適用性試驗(yàn)，即用規(guī)定的對(duì)照品對(duì)儀器進(jìn)行試驗(yàn)和調(diào)整，應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求，或規(guī)定分析狀態(tài)下色譜柱的最小理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性和拖尾因子。1.色譜柱的理論板數(shù)（n）n=5.54(tR/Wh/2)2式中tR為保留時(shí)間（以分鐘或長(zhǎng)度計(jì)，下同，但應(yīng)取相同單位）；Wh/2為半峰高寬六、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)172.分離度（R）除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于1.5。2(tR2－tR1)R=————-W1＋W2式中tR2為相鄰兩峰中后一峰的保留時(shí)間；tR1為相鄰兩峰中前一峰的保留時(shí)間；W1及W2為此相鄰兩峰的峰寬。2.分離度（R）除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于1.5。183.重復(fù)性取各品種項(xiàng)下的對(duì)照溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。也可按各品種校正因子測(cè)定項(xiàng)下，配制相當(dāng)于80%、100%和120%的對(duì)照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成3種不同濃度的溶液，分別進(jìn)樣3次，計(jì)算平均校正因子，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差也應(yīng)不大于2.0%。4.拖尾因子（T）除另有規(guī)定外，T應(yīng)在0.95～1.05之間。W0.05hT=——-2d1式中W0.05h為0.05峰高處的峰寬；d1為峰極大至峰前沿之間的距離。3.重復(fù)性19七、測(cè)定法（一）內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)或主成分含量（二）外標(biāo)法測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)或主成分含量（三）加校正因子的主成分自身對(duì)照法（四）不加校正因子的主成分自身對(duì)照法（五）面積歸一化法七、測(cè)定法20八、注意事項(xiàng)1.雖然泵能耐壓6000PSI的壓力，但不要使泵處于4000PSI以上的壓力為宜。2.安裝及拆卸色譜柱時(shí)應(yīng)注意柱的連接方向，千萬不能接反。否則可能導(dǎo)致柱效降低，甚至損壞色譜柱。3.嚴(yán)禁開空泵。在無流動(dòng)相通過時(shí)不要扳動(dòng)進(jìn)樣閥的操作桿，使用時(shí)要注意盡可能少扳動(dòng)，以免磨損內(nèi)部的密封墊圈。4.為了延長(zhǎng)檢測(cè)器燈源的使用壽命，在色譜泵穩(wěn)定后再打開檢測(cè)器電源開關(guān)，分析結(jié)束后立即關(guān)閉檢測(cè)器。5.應(yīng)使用高純度、高質(zhì)量的溶劑和試劑。6.避免pH值超限，pH值應(yīng)控制在2.2～7.5之間。pH值偏低或偏高都會(huì)腐蝕液相系統(tǒng)的不銹鋼材料；破壞色譜柱填料的結(jié)構(gòu)，使填料失活。八、注意事項(xiàng)217.色譜柱溫不能超過規(guī)定要求，柱溫過高會(huì)加速色譜柱填料老化，破壞其結(jié)構(gòu)。8.使用所有溶劑必須是互溶的。這對(duì)于緩沖流動(dòng)相來說是非常重要的，鹽類的析出會(huì)很快損壞要維護(hù)的部件。9.流動(dòng)相首選甲醇-水系統(tǒng)，如經(jīng)試用不適合時(shí)，再選用其他溶劑。為保護(hù)儀器，應(yīng)盡可能少用含有緩沖液的流動(dòng)相。如果流動(dòng)相中含有緩沖劑，每日使用后應(yīng)用不含緩沖劑的流動(dòng)相或新鮮純化水將儀器管路、泵、進(jìn)樣閥、色譜柱及檢測(cè)池等充分沖洗干凈。10.如果液相系統(tǒng)使用未過濾的洗脫液、注入未過濾的樣品、系統(tǒng)中滯留緩沖洗脫液都能堵塞系統(tǒng)或劃傷泵柱塞。所以流動(dòng)相、樣品使用前必須用0.45μm微孔濾膜過濾；流動(dòng)相并先經(jīng)脫氣處理后使用。停泵后決不允許緩沖洗脫液滯留在系統(tǒng)中，須用經(jīng)過濾后的新鮮純化水進(jìn)行清洗，并保證將緩沖劑沖洗干凈化驗(yàn)員基礎(chǔ)培訓(xùn)之儀器分析法課件2211.如果泵閉置在2天以上，應(yīng)將甲醇注滿液相系統(tǒng)，以避免水溶劑系統(tǒng)中可能存在微生物的繁殖。12.色譜柱保存時(shí)應(yīng)使填充劑處在潤(rùn)濕狀態(tài)，兩端密塞。反相柱（如十八烷基硅烷鍵合硅膠柱）可在甲醇中保存；正相柱（如硅膠柱）可在正己烷中保存等。13.決不能使用鹽酸溶液。一般來說，任何濃度的鹵化物都會(huì)腐蝕未經(jīng)鈍化的不銹鋼材料。14.盡量避免使用在電化學(xué)過程中引起腐蝕的金屬離子。應(yīng)避免的典型金屬離子有錳、鉻、鋅、銅、鎳、鉬、鐵。九、允許差含量測(cè)定的精度，除另有規(guī)定外，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。11.如果泵閉置在2天以上，應(yīng)將甲醇注滿液相系統(tǒng)，以避免水溶23pH值的測(cè)定法一、原理用玻璃電極作為測(cè)量電極，甘汞電極作為參考電極，當(dāng)氫離子濃度發(fā)生變化時(shí)，玻璃電極和甘汞電極之間的電動(dòng)勢(shì)也隨著引起變化，而電勢(shì)變化符合能斯特方程式：RTE=Eo-2.3026×——-×pHF式中E—產(chǎn)生的電極電位T—絕對(duì)溫度Eo—零電位F—法拉第常數(shù)R-氣體常數(shù)pH—表示被測(cè)溶液pH值和內(nèi)溶液pH值的差值

pH值的測(cè)定法一、原理24二、注意事項(xiàng)1.應(yīng)注意玻璃電極裝到電極夾中時(shí)應(yīng)略高于甘汞電極，以免球膜與試杯相碰。2.新使用或久放未用的玻璃電極在使用前應(yīng)放在純化水內(nèi)浸泡活化48小時(shí)，平時(shí)也最好浸泡在水中，以便下次使用時(shí)能迅速地工作。3.將甘汞電極的頸端橡皮塞取下，檢查飽和氯化鉀溶液情況，溶液中應(yīng)有氯化鉀結(jié)晶析出，以確保溶液飽和，太少應(yīng)予以添加。使用前應(yīng)把電極彎管下端橡皮套除去。4.按下電源按鍵，接通電源，按下pH按鍵，指示燈亮后，一般短時(shí)間測(cè)量，只需預(yù)熱數(shù)分鐘即可，但要保持儀表零點(diǎn)穩(wěn)定，必須預(yù)熱半小時(shí)或一小時(shí)以上。二、注意事項(xiàng)255.儀器應(yīng)置于干燥環(huán)境中，無顯著振動(dòng)和強(qiáng)電磁場(chǎng)干擾，并防止灰塵及腐蝕性氣體侵入。6.每次使用，在校正及測(cè)定前后均應(yīng)用純化水將電極充分洗凈。7.測(cè)定前校正儀器時(shí)，應(yīng)選擇與待測(cè)溶液pH值接近的標(biāo)準(zhǔn)pH緩沖液，pH值相差不應(yīng)超過3個(gè)單位。8.為了使測(cè)定結(jié)果可靠，在測(cè)定時(shí)用標(biāo)準(zhǔn)pH緩沖液校正儀器后，應(yīng)再用另一種相差約3個(gè)單位pH的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液復(fù)校之。9.待測(cè)溶液，校正液與電極的溫度應(yīng)相同或相近，差異最好不超過2℃。10.儀器的電表應(yīng)避免震動(dòng)與打擊，不用或移動(dòng)時(shí)，將pH-mV分檔開關(guān)置于“0”處，以減少擺動(dòng)。11.溫度補(bǔ)償器轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)勿用力過大，以防止移動(dòng)緊固螺絲的位置，影響pH準(zhǔn)確度。12.對(duì)于pH大于9的溶液的測(cè)定，應(yīng)使用231型鋰玻璃電極測(cè)定；使用有堿誤的電極測(cè)定時(shí)，應(yīng)校正堿誤。5.儀器應(yīng)置于干燥環(huán)境中，無顯著振動(dòng)和強(qiáng)電磁場(chǎng)干擾，并防止2613.玻璃電極在測(cè)定堿性溶液時(shí)，應(yīng)盡量快速，測(cè)定強(qiáng)堿溶液后，電極性能常不能立即復(fù)原，可在1mol/L鹽酸溶液中浸泡，再使用純化水沖洗，有時(shí)甚至需在酸液內(nèi)浸泡幾小時(shí)，才能復(fù)原。14.玻璃電極球泡很薄，因此在使用時(shí)勿與玻璃杯及硬物相碰，防止球泡破碎。15.玻璃電極球泡勿接觸污物，勿用手去摸電極球泡，以免玻璃膜沾上油脂，影響電極測(cè)量精度。如發(fā)現(xiàn)沾污可用醫(yī)用棉花輕擦球泡部分，或用0.1mol/L稀鹽酸清洗之，再用純化水沖洗干凈。16.玻璃電極插頭必須防止沾上水，保證插頭絕緣阻抗。17.玻璃電極和甘汞電極在使用時(shí)，必須注意內(nèi)電極與球泡之間及內(nèi)電極和陶瓷芯之間是否有氣泡停留，如有則必須排除。13.玻璃電極在測(cè)定堿性溶液時(shí)，應(yīng)盡量快速，測(cè)定強(qiáng)堿溶液后，2718.玻璃電極球泡有裂紋，或老化（使用或久放二年以上），則應(yīng)調(diào)換新的電極，否則測(cè)量時(shí)反應(yīng)遲鈍，甚至造成較大的測(cè)量誤差，新的電極（或干放一段時(shí)間后的電極）在使用之前需在純化水內(nèi)浸一晝夜。19.玻璃電極在常規(guī)情況下只能保存、使用一年。20.配制標(biāo)準(zhǔn)pH緩沖液與溶解供試品的純化水,應(yīng)是新沸過的冷純化水,其pH值應(yīng)為5.5～7.0。21.pH9的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液應(yīng)裝在聚乙烯瓶中密封保存。22.標(biāo)準(zhǔn)緩沖液一般可保存2～3個(gè)月，但發(fā)現(xiàn)有混濁、發(fā)霉或沉淀等現(xiàn)象時(shí)，不能繼續(xù)使用。23.對(duì)弱緩沖液（如純化水或注射用水）的pH值測(cè)定，先用鄰苯二甲酸氫鉀標(biāo)準(zhǔn)緩沖液校正儀器后測(cè)定供試液,并重取供試液再測(cè)，直至pH值的讀數(shù)在1分鐘內(nèi)改變不超過±0.05為止；然后再用硼砂標(biāo)準(zhǔn)液校正儀器，再如上法測(cè)定，二次pH值的讀數(shù)相差應(yīng)不超過0.1，取二次讀數(shù)的平均值為其pH值。24.當(dāng)發(fā)現(xiàn)讀數(shù)有緩慢變化時(shí)，可以拆開底板用電吹風(fēng)等工具加熱讀數(shù)開關(guān)，使讀數(shù)開關(guān)干燥，但溫度不得超過60℃?；?yàn)員基礎(chǔ)培訓(xùn)之儀器分析法課件28化驗(yàn)員基礎(chǔ)培訓(xùn)之—儀器分析方法廣州威斯寶藥業(yè)有限公司質(zhì)量部化驗(yàn)員基礎(chǔ)培訓(xùn)之—儀器分析方法廣州威斯寶藥業(yè)有限公司29紫外-可見分光光度法一、原理可見光、紫外線照射某些物質(zhì)，主要是由于物質(zhì)分子中價(jià)電子能級(jí)躍遷對(duì)輻射的吸收，而產(chǎn)生化合物的可見紫外吸收光譜。基于物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收的特性而建立分光光度法或稱吸收光譜法的分析方法。它是以朗伯──比耳定律為基礎(chǔ)。1朗伯—比耳定律A=lg—-=ECLT式中A為吸收度；T為透光率；E為吸收系數(shù)，采用的表示方法是（E１％１ｃｍ），其物理意義為當(dāng)溶液濃度為1%（g/ml），液層厚度為1cm時(shí)的吸收度數(shù)值；C為100ml溶液中所含被測(cè)物質(zhì)的重量（按干燥品或無水物計(jì)算），g；L為液層厚度，cm。紫外-可見分光光度法一、原理30二、使用范圍凡具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物，根據(jù)在特定吸收波長(zhǎng)處所測(cè)得的吸收度，可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測(cè)定。三、儀器可見-紫外分光光度計(jì)。其應(yīng)用波長(zhǎng)范圍為200～400nm的紫外光區(qū)、400～850nm的可見光區(qū)。主要由輻射源（光源）、色散系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、吸收池、數(shù)據(jù)處理機(jī)、自動(dòng)記錄器及顯示器等部件組成。二、使用范圍31四、儀器的校正1.波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度試驗(yàn)以儀器顯示的波長(zhǎng)數(shù)值與單色光的實(shí)際波長(zhǎng)值之間誤差表示，應(yīng)在±1.0nm范圍內(nèi)?？捎脙x器中氘燈的486.02nm與656.10nm譜線進(jìn)行校正。2.吸收度的準(zhǔn)確度試驗(yàn)3.雜散光的試驗(yàn)4.波長(zhǎng)重現(xiàn)性試驗(yàn)5.分辨率試驗(yàn)四、儀器的校正32五、測(cè)定方法1.對(duì)照品比較法（1）按各品種項(xiàng)下的方法，分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液，對(duì)照品溶液中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分標(biāo)示量的100±10%，所用溶劑也應(yīng)完全一致，在規(guī)定的波長(zhǎng)測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸收度后，按下式計(jì)算含量，即得。（2）計(jì)算式A樣×G對(duì)/稀釋倍數(shù)×100×1含量（%）=————————————--×100%A對(duì)×G樣/稀釋倍數(shù)×100×1五、測(cè)定方法332.吸收系數(shù)法（1）按各品種項(xiàng)下的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定其吸收度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計(jì)算含量。用本法測(cè)定時(shí)，應(yīng)注意儀器的校正和檢定。（2）計(jì)算式

A樣含量（%）=——————————————-×100%G樣/稀釋倍數(shù)×(E１％１ｃｍ)對(duì)×100×12.吸收系數(shù)法343.計(jì)算分光光度法采用計(jì)算分光光度法應(yīng)慎重。本法有多種，使用時(shí)均應(yīng)按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行。當(dāng)吸收度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測(cè)定時(shí)，波長(zhǎng)的微小變化可能對(duì)測(cè)定結(jié)果造成顯著影響，故對(duì)照品和供試品測(cè)試條件應(yīng)盡可能一致。若測(cè)定時(shí)不用對(duì)照品，如維生素A測(cè)定法，則應(yīng)在測(cè)定時(shí)對(duì)儀器作仔細(xì)的校正和檢定。3.計(jì)算分光光度法35六、注意事項(xiàng)1.空白溶液與供試品溶液必須澄清，不得有渾濁。如有渾濁，應(yīng)預(yù)先過濾，并棄去初濾液。2.測(cè)定時(shí)，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同瓶溶劑為空白對(duì)照，采用1cm的石英吸收池。3.在規(guī)定的吸收峰波長(zhǎng)±2nm以內(nèi)測(cè)試幾個(gè)點(diǎn)的吸收度，以核對(duì)供試品的吸收峰波長(zhǎng)位置是否正確，除另有規(guī)定外，吸收峰波長(zhǎng)應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長(zhǎng)±2nm以內(nèi)；否則應(yīng)考慮該試樣的真?zhèn)?、純度以及儀器波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度，并以吸收度最大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。六、注意事項(xiàng)364.一般供試品溶液的吸收度讀數(shù)，以在0.3～0.7之間的誤差較小。5.吸收池應(yīng)選擇配對(duì)，否則要引入測(cè)定誤差。在規(guī)定波長(zhǎng)下兩個(gè)吸收池的透光率相差小于0.5％的吸收池作配對(duì)，在必要的情況時(shí)，須在最終測(cè)量扣除吸收池間的誤差修正值。6.由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測(cè)定供試品的吸收度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再計(jì)算含量。7.儀器的接地必須良好，一切裸露的零件對(duì)地電位不得超過24伏（測(cè)電筆的氖管不得發(fā)亮）。8.在使用過程中，如需開啟試樣室蓋時(shí)或暫時(shí)停止測(cè)試時(shí)，必須及時(shí)推入光門鈕桿（使光電管前光門關(guān)閉），保護(hù)光電管，以防止光電管受強(qiáng)光或長(zhǎng)時(shí)間照射而損壞。4.一般供試品溶液的吸收度讀數(shù)，以在0.3～0.7之間的誤379.在測(cè)定時(shí)或改測(cè)其它檢品時(shí)，應(yīng)用待測(cè)溶液沖洗吸收池3～4次，用干凈綢布或擦鏡紙擦凈吸收池的透光面至不留斑痕（切忌把透光面磨損）。10.取吸收池時(shí)，應(yīng)拿毛玻璃兩面，切忌用手拿捏透光面，以免粘上油污。使用完后及時(shí)用測(cè)定溶劑沖凈，再用純化水沖凈，用干凈綢布或擦鏡紙擦干，晾干后，放入吸收池盒中，防塵保存。11.若吸收池內(nèi)外壁沾污，兩池差較大的處理。（1）可用綢布纏在扁竹條外或用脫脂棉纏在細(xì)玻璃棒上蘸上乙醇，輕輕摩擦，再用純化水沖凈。（2）如上述方法處理不好，必要時(shí)可用重鉻酸鉀-硫酸洗液泡洗1～2分鐘，用自來水沖凈，再用純化水沖凈。（3）不得用毛刷刷洗或硬物拭擦，以防止表面光潔度受損影響正常使用。9.在測(cè)定時(shí)或改測(cè)其它檢品時(shí)，應(yīng)用待測(cè)溶液沖洗吸收池3～4次3812.請(qǐng)務(wù)必注意經(jīng)常保持硅膠的干燥，目的是保護(hù)光學(xué)元件和光電放大器系統(tǒng)不致受潮損壞而影響儀器的正常工作，如發(fā)現(xiàn)有的硅膠由藍(lán)色變?yōu)榉奂t色，應(yīng)立即更換。該儀器干燥劑筒有兩個(gè)：一個(gè)是裝在放大器暗盒上，另一個(gè)裝在單色光器暗盒上。13.在更換硅膠干燥劑時(shí)，應(yīng)關(guān)閉切斷電源。14.在停止工作期間，主機(jī)試樣室內(nèi)應(yīng)放入袋裝或筒裝硅膠干燥劑。用防塵罩罩住整個(gè)儀器，并在防塵罩內(nèi)放數(shù)袋防潮硅膠。15.儀器在操作中，狹縫的寬度應(yīng)從小逐漸開大。若狹縫過大，由于進(jìn)入光電管的光能量強(qiáng)度過大，將會(huì)使放大器輸出信號(hào)達(dá)到飽和，以至數(shù)字顯示出溢出（即數(shù)字閃爍或示1不變）。這不是儀器有故障。16.將波長(zhǎng)旋轉(zhuǎn)放在625nm，鋏縫關(guān)閉在0.02nm附近，選擇按鍵恢復(fù)在停止工作部位（即三個(gè)鍵均彈出）。12.請(qǐng)務(wù)必注意經(jīng)常保持硅膠的干燥，目的是保護(hù)光學(xué)元件和光3917.搬動(dòng)儀器時(shí)應(yīng)搬在主體端，不要搬在試樣室和光電管盒端以及光源燈室部位，以防止儀器狹縫或光路部件受力而發(fā)生變形。并在搬動(dòng)或運(yùn)輸時(shí)，應(yīng)將可動(dòng)部分固定，如各旋鈕可用膠布貼住，狹縫位置開大些，然后固定，不要關(guān)小狹縫，以免運(yùn)輸時(shí)振動(dòng)使狹縫刀口受損壞。18.儀器的光柵、反射鏡絕對(duì)不能擦拭，否則將損壞儀器光學(xué)表面，增加雜散光。19.儀器經(jīng)過搬動(dòng)請(qǐng)及時(shí)檢查并糾正波長(zhǎng)精度，為保證測(cè)定的準(zhǔn)確性請(qǐng)經(jīng)常校準(zhǔn)波長(zhǎng)精度。如有異常，應(yīng)立即報(bào)告質(zhì)量保證部，但不得擅自調(diào)整，并及時(shí)做好記錄。17.搬動(dòng)儀器時(shí)應(yīng)搬在主體端，不要搬在試樣室和光電管盒端以及40高效液相色譜法一、原理高效液相色譜法是用高壓輸液泵將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相，壓入裝有固定相的色譜柱，經(jīng)進(jìn)樣閥注入供試品，由流動(dòng)相帶入柱內(nèi)，在柱內(nèi)各成分被分離后，依次進(jìn)入檢測(cè)器，色譜信號(hào)由記錄儀或積分儀記錄。二、適用范圍高效液相色譜法是一種分離分析方法，適用于揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的高分子化合物以及離子型化合物等的定性、定量分析。中國(guó)藥典主要用于藥品的含量測(cè)定、有關(guān)物質(zhì)檢查、雜質(zhì)限度檢查和鑒別等。高效液相色譜法一、原理41三、儀器高效液相色譜儀主要由輸液泵系統(tǒng)、進(jìn)樣器系統(tǒng)、色譜柱、檢測(cè)器、記錄器、顯示器及數(shù)據(jù)處理機(jī)（或兼有組分收集系統(tǒng)）等組成。使用時(shí)應(yīng)按儀器的說明書進(jìn)行操作。四、儀器的校正1.高效液相色譜儀的柱箱控溫精度、基線噪聲、基線漂移、靈敏度或檢測(cè)限、線性范圍的檢定均按儀器說明書的技術(shù)要求進(jìn)行校驗(yàn)，應(yīng)符合規(guī)定。2.以紫外-可見光檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、差示折光檢測(cè)器為檢測(cè)器的實(shí)驗(yàn)室通用液相色譜儀的檢定，所用各種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)使用經(jīng)國(guó)家技術(shù)監(jiān)督部門批準(zhǔn)頒發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。三、儀器423.泵的耐壓試驗(yàn)4.泵流量設(shè)定值誤差、流量穩(wěn)定性誤差的試驗(yàn)5.柱恒溫箱溫度設(shè)定值誤差和控溫穩(wěn)定性誤差的試驗(yàn)6.梯度準(zhǔn)確度的試驗(yàn)7.定性定量重現(xiàn)性的試驗(yàn)3.泵的耐壓試驗(yàn)43五、對(duì)儀器的一般要求1.色譜柱的填充劑和流動(dòng)相的組分應(yīng)按各品種項(xiàng)下的規(guī)定。常用的色譜柱填充劑有硅膠（正相色譜）和化學(xué)鍵合硅膠，后者以十八烷基硅烷鍵合硅膠（反相色譜）最為常用，辛基硅烷鍵合硅膠次之，氰基或氨基鍵合硅膠也有使用。離子交換填充劑用于離子交換色譜；凝膠或玻璃微球等填充劑用于分子排阻色譜等。除另有規(guī)定外，柱溫為室溫，檢測(cè)器為紫外吸收檢測(cè)器。2.藥典正文中各品種項(xiàng)下規(guī)定的條件除固定相種類、流動(dòng)相組分、檢測(cè)器類型不得任意改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度、固定相牌號(hào)、載體粒度、流動(dòng)相流速、混合流動(dòng)相各組分的比例、柱溫、進(jìn)樣量、檢測(cè)器的靈敏度等，均可適當(dāng)改變，以適應(yīng)具體品種并達(dá)到系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。3.一般色譜圖約于20分鐘內(nèi)記錄完畢五、對(duì)儀器的一般要求44六、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)按各品種項(xiàng)下要求對(duì)儀器進(jìn)行適用性試驗(yàn)，即用規(guī)定的對(duì)照品對(duì)儀器進(jìn)行試驗(yàn)和調(diào)整，應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求，或規(guī)定分析狀態(tài)下色譜柱的最小理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性和拖尾因子。1.色譜柱的理論板數(shù)（n）n=5.54(tR/Wh/2)2式中tR為保留時(shí)間（以分鐘或長(zhǎng)度計(jì)，下同，但應(yīng)取相同單位）；Wh/2為半峰高寬六、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)452.分離度（R）除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于1.5。2(tR2－tR1)R=————-W1＋W2式中tR2為相鄰兩峰中后一峰的保留時(shí)間；tR1為相鄰兩峰中前一峰的保留時(shí)間；W1及W2為此相鄰兩峰的峰寬。2.分離度（R）除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于1.5。463.重復(fù)性取各品種項(xiàng)下的對(duì)照溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。也可按各品種校正因子測(cè)定項(xiàng)下，配制相當(dāng)于80%、100%和120%的對(duì)照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成3種不同濃度的溶液，分別進(jìn)樣3次，計(jì)算平均校正因子，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差也應(yīng)不大于2.0%。4.拖尾因子（T）除另有規(guī)定外，T應(yīng)在0.95～1.05之間。W0.05hT=——-2d1式中W0.05h為0.05峰高處的峰寬；d1為峰極大至峰前沿之間的距離。3.重復(fù)性47七、測(cè)定法（一）內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)或主成分含量（二）外標(biāo)法測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)或主成分含量（三）加校正因子的主成分自身對(duì)照法（四）不加校正因子的主成分自身對(duì)照法（五）面積歸一化法七、測(cè)定法48八、注意事項(xiàng)1.雖然泵能耐壓6000PSI的壓力，但不要使泵處于4000PSI以上的壓力為宜。2.安裝及拆卸色譜柱時(shí)應(yīng)注意柱的連接方向，千萬不能接反。否則可能導(dǎo)致柱效降低，甚至損壞色譜柱。3.嚴(yán)禁開空泵。在無流動(dòng)相通過時(shí)不要扳動(dòng)進(jìn)樣閥的操作桿，使用時(shí)要注意盡可能少扳動(dòng)，以免磨損內(nèi)部的密封墊圈。4.為了延長(zhǎng)檢測(cè)器燈源的使用壽命，在色譜泵穩(wěn)定后再打開檢測(cè)器電源開關(guān)，分析結(jié)束后立即關(guān)閉檢測(cè)器。5.應(yīng)使用高純度、高質(zhì)量的溶劑和試劑。6.避免pH值超限，pH值應(yīng)控制在2.2～7.5之間。pH值偏低或偏高都會(huì)腐蝕液相系統(tǒng)的不銹鋼材料；破壞色譜柱填料的結(jié)構(gòu)，使填料失活。八、注意事項(xiàng)497.色譜柱溫不能超過規(guī)定要求，柱溫過高會(huì)加速色譜柱填料老化，破壞其結(jié)構(gòu)。8.使用所有溶劑必須是互溶的。這對(duì)于緩沖流動(dòng)相來說是非常重要的，鹽類的析出會(huì)很快損壞要維護(hù)的部件。9.流動(dòng)相首選甲醇-水系統(tǒng)，如經(jīng)試用不適合時(shí)，再選用其他溶劑。為保護(hù)儀器，應(yīng)盡可能少用含有緩沖液的流動(dòng)相。如果流動(dòng)相中含有緩沖劑，每日使用后應(yīng)用不含緩沖劑的流動(dòng)相或新鮮純化水將儀器管路、泵、進(jìn)樣閥、色譜柱及檢測(cè)池等充分沖洗干凈。10.如果液相系統(tǒng)使用未過濾的洗脫液、注入未過濾的樣品、系統(tǒng)中滯留緩沖洗脫液都能堵塞系統(tǒng)或劃傷泵柱塞。所以流動(dòng)相、樣品使用前必須用0.45μm微孔濾膜過濾；流動(dòng)相并先經(jīng)脫氣處理后使用。停泵后決不允許緩沖洗脫液滯留在系統(tǒng)中，須用經(jīng)過濾后的新鮮純化水進(jìn)行清洗，并保證將緩沖劑沖洗干凈化驗(yàn)員基礎(chǔ)培訓(xùn)之儀器分析法課件5011.如果泵閉置在2天以上，應(yīng)將甲醇注滿液相系統(tǒng)，以避免水溶劑系統(tǒng)中可能存在微生物的繁殖。12.色譜柱保存時(shí)應(yīng)使填充劑處在潤(rùn)濕狀態(tài)，兩端密塞。反相柱（如十八烷基硅烷鍵合硅膠柱）可在甲醇中保存；正相柱（如硅膠柱）可在正己烷中保存等。13.決不能使用鹽酸溶液。一般來說，任何濃度的鹵化物都會(huì)腐蝕未經(jīng)鈍化的不銹鋼材料。14.盡量避免使用在電化學(xué)過程中引起腐蝕的金屬離子。應(yīng)避免的典型金屬離子有錳、鉻、鋅、銅、鎳、鉬、鐵。九、允許差含量測(cè)定的精度，除另有規(guī)定外，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。11.如果泵閉置在2天以上，應(yīng)將甲醇注滿液相系統(tǒng)，以避免水溶51pH值的測(cè)定法一、原理用玻璃電極作為測(cè)量電極，甘汞電極作為參考電極，當(dāng)氫離子濃度發(fā)生變化時(shí)，玻璃電極和甘汞電極之間的電動(dòng)勢(shì)也隨著引起變化，而電勢(shì)變化符合能斯特方程式：RTE=Eo-2.3026×——-×pHF式中E—產(chǎn)生的電極電位T—絕對(duì)溫度Eo—零電位F—法拉第常數(shù)R-氣體常數(shù)pH—表示被測(cè)溶液pH值和內(nèi)溶液pH值的差值

pH值的測(cè)定法