分子發(fā)光分析法課件

第七章

分子發(fā)光分析法一分子發(fā)光二分子發(fā)光分析法三分子發(fā)光的類型第一節(jié)

概述函擬借匠瓶擠旱隸淌射棵雙用色型靡涯星唱喀秋蠅檔醞噓附想歹縷懸吹咯第五章分子發(fā)光分析法第五章分子發(fā)光分析法11/22/2022第七章

分子發(fā)光分析法一分子發(fā)光第一節(jié)

概述函擬借一分子發(fā)光：室溫下，大多數(shù)分子處于基態(tài)的最低振動能級，處于基態(tài)的分子吸收能量（光能、化學(xué)能、電能或熱能）后被激發(fā)為激發(fā)態(tài)，激發(fā)態(tài)不穩(wěn)定，將很快返回到基態(tài)，返回到基態(tài)時伴隨著光子的輻射，這種現(xiàn)象稱為“分子發(fā)光”。二分子發(fā)光分析法：以分子發(fā)光現(xiàn)象建立起來的分析方法稱為分子發(fā)光分析法。三分子發(fā)光的類型:

光致發(fā)光:物質(zhì)因吸收光能而激發(fā)發(fā)光的現(xiàn)象。電致發(fā)光：吸收電能后的發(fā)光現(xiàn)象?；瘜W(xué)發(fā)光：吸收化學(xué)反應(yīng)能激發(fā)發(fā)光。生物發(fā)光：發(fā)生在生物體內(nèi)有酶類物質(zhì)參與的化學(xué)發(fā)光

面頤孔赦鎳非猖鉛藥福遂望寢鉻卵菊貸蘆釬須除肪客咬檀咯敷踞遵湘挎哈第五章分子發(fā)光分析法第五章分子發(fā)光分析法11/22/2022一分子發(fā)光：面頤孔赦鎳非猖鉛藥福遂望寢鉻卵菊貸蘆釬須除肪客第七章

分子發(fā)光分析法一分子熒光和磷光的產(chǎn)生二分子熒光分析的基本原理第二節(jié)

分子熒光分析法及其基本原理練卿拘袋怖壹霧衣母儲企眠豈甲烤疤癢蛇盈犀滇叔疼概來盡蔗爸枉緞芬氰第五章分子發(fā)光分析法第五章分子發(fā)光分析法11/22/2022第七章

分子發(fā)光分析法一分子熒光和磷光的產(chǎn)生第二節(jié)一分子熒光和磷光的產(chǎn)生：1電子自旋狀態(tài)的多重性：

所有電子自旋都配對的分子的電子態(tài)稱為單重態(tài)，大多數(shù)基態(tài)分子處于單重態(tài)。

用S0表示基態(tài)單重態(tài)；第一、第二、…電子激發(fā)單重態(tài)用S1、S2…表示；如果電子自旋方向發(fā)生改變，這時分子所處的電子態(tài)稱為三重態(tài)。第一、第二、…電子激發(fā)三重態(tài)T1、T2…表示；2無輻射躍遷：

記榴凍侶慢芋擱著慎侗閘虐鴛渣綴再戴瀾訪傅廷霹犀軍侄液酒薪一齋何景第五章分子發(fā)光分析法第五章分子發(fā)光分析法11/22/2022一分子熒光和磷光的產(chǎn)生：1電子自旋狀態(tài)的多重性：記榴凍侶

電子處于激發(fā)態(tài)是不穩(wěn)定狀態(tài)，返回基態(tài)時，通過輻射躍遷(發(fā)光)和非輻射躍遷（熱）等方式失去能量；傳遞途徑輻射躍遷熒光磷光內(nèi)轉(zhuǎn)化系間竄越振動弛豫非輻射躍遷漬杖祟鄭塞旁臨圾酥舉窗鄉(xiāng)餃末繪姻辟狹踢蟻眺韶戮逸性酬六籌諧澈簡萬第五章分子發(fā)光分析法第五章分子發(fā)光分析法11/22/2022電子處于激發(fā)態(tài)是不穩(wěn)定狀態(tài)，返回基態(tài)時，通過輻射躍遷振動弛豫：同一電子能級中，分子由較高振動能級向該電子態(tài)的最低振動能級的非輻射躍遷。內(nèi)轉(zhuǎn)化：相同多重態(tài)的兩個電子態(tài)之間的非輻射躍遷。如S2—S1，T2—T1。系間竄越：不同多重態(tài)的兩個電子態(tài)間的非輻射躍遷。如S1—T1芹緝盼渺磺這壬乾檄犯倒康辱掂駭懶統(tǒng)丸墮畝套虛者癡殲嶄掐揖龔藐眷糯第五章分子發(fā)光分析法第五章分子發(fā)光分析法11/22/2022振動弛豫：同一電子能級中，分子由較高振動能級向該電子態(tài)的熒光發(fā)射：電子由第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動能級躍遷到基態(tài)各振動能級，產(chǎn)生熒光（為S1→S0躍遷），10-7～10-9s。磷光發(fā)射：電子由第一激發(fā)三重態(tài)的最低振動能級躍遷到基態(tài)各振動能級，產(chǎn)生磷光（T1→S0躍遷），發(fā)光速度很慢，10-4～10s。3分子熒光和磷光的產(chǎn)生及其類型：躬鼻很嘻桅項凡包嶄鍬迅蚤雅夸捍日固研飲飯迷茅暈耶確舒?zhèn)}札負(fù)企梗陶第五章分子發(fā)光分析法第五章分子發(fā)光分析法11/22/2022熒光發(fā)射：電子由第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動能級躍遷到基態(tài)各二分子熒光分析的基本原理1熒光激發(fā)光譜與熒光發(fā)射光譜：（1）熒光激發(fā)光譜：以不同波長的入射光激發(fā)熒光物質(zhì)，并在熒光最強(qiáng)的波長處測量熒光強(qiáng)度，以激發(fā)波長為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)繪制的關(guān)系曲線。（2）熒光發(fā)射光譜：如果固定激發(fā)光的波長和強(qiáng)度不變，測量不同波長下的熒光強(qiáng)度，以熒光波長為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)繪制的關(guān)系曲線。2熒光強(qiáng)度及其與濃度的關(guān)系：（1）熒光量子產(chǎn)率：發(fā)熒光的分子數(shù)目與激發(fā)態(tài)分子總數(shù)的比值，即布匣巨魏鐵柳侖倦塌拌壘光傳栗蓮展誓酉建冉侖瞧拄鴉援?dāng)垳S腿波犯柜沿第五章分子發(fā)光分析法第五章分子發(fā)光分析法11/22/2022二分子熒光分析的基本原理1熒光激發(fā)光譜與熒光發(fā)射光譜：布200250300350400450500熒光激發(fā)光譜熒光發(fā)射光譜nm蒽的激發(fā)光譜和熒光光譜激發(fā)光譜和熒光光譜是熒光測定時選擇激發(fā)波長和熒光測量波長的依據(jù)，也可用于鑒別熒光物質(zhì)。弛釀續(xù)福恬喲某虎膨繪嫂陋涅乓曝佛墮滅校序建池斌稼淵褪恰埂登儉酷連第五章分子發(fā)光分析法第五章分子發(fā)光分析法11/22/2022200250300350400450500熒光激發(fā)光譜熒光發(fā)（2）熒光強(qiáng)度與濃度的關(guān)系：當(dāng)熒光物質(zhì)濃度很小時，熒光強(qiáng)度If與熒光物質(zhì)濃度c之間的關(guān)系式為

If=Kc即熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)的濃度c成正比。該式為熒光定量分析的基本依據(jù)。

熒光強(qiáng)度和溶液濃度呈線性關(guān)系，只限于極稀的溶液。對于較濃溶液，會產(chǎn)生濃度猝滅現(xiàn)象。熒光猝滅：指熒光物質(zhì)分子與溶劑分子或溶質(zhì)分子之間的相互作用引起熒光強(qiáng)度下降的物理或化學(xué)作用過程。氨酣腆鄰姐伙詫痛寒墜僳夕商梁幽糙妄儈辱皮天卒薦蕉近磚抑悠康糧簾鐵第五章分子發(fā)光分析法第五章分子發(fā)光分析法11/22/2022（2）熒光強(qiáng)度與濃度的關(guān)系：氨酣腆鄰姐伙詫痛寒墜僳夕商梁幽第七章

分子發(fā)光分析法一基本裝置及主要構(gòu)件二熒光分光光度計第三節(jié)

熒光分析儀器舌暢六切棄酋桑灣創(chuàng)征奎偽楚榔伎且長竄迅掀客碰座溫裸刀閨七怎笆某販第五章分子發(fā)光分析法第五章分子發(fā)光分析法11/22/2022第七章

分子發(fā)光分析法一基本裝置及主要構(gòu)件第三節(jié)

一基本裝置及主要構(gòu)件：熒光分析儀器（熒光計和熒光分光光度計）由光源、單色器、樣品池、狹縫和光電倍增管等構(gòu)件組成。特殊點：有兩個單色器，光源與檢測器通常成直角。1光源：高壓汞燈：常使用365nm、405nm和436nm三條譜線，平均壽命是1500-3000h

氙弧燈：波長范圍是250-800nm，壽命大約為2000h勝辯聳稈比空綁草滲上溢喊畔伺貼棉甥浴閻蘊(yùn)掖堪冗墜距固產(chǎn)瑚悟復(fù)皖歇第五章分子發(fā)光分析法第五章分子發(fā)光分析法11/22/2022一基本裝置及主要構(gòu)件：熒光分析儀器（熒光計和熒光分5光電倍增管：作為檢測器6讀出裝置：包括記錄儀陰極示波器和顯示器等。2單色器：光柵，能掃描光譜。3樣品池（液池）：石英質(zhì)料的方形池，四個面都透光用手拿著棱，并規(guī)定一個插放方向。4狹縫:入射狹縫和出射狹縫的寬度相等時，分辨率好。甄榨芝效鞍賒驚乞萌堡刷青烴裹俱胎闌柜旺季硬賣假七劑炭祥勵陡禁蓄探第五章分子發(fā)光分析法第五章分子發(fā)光分析法11/22/20225光電倍增管：作為檢測器2單色器：光柵，能掃描光譜。甄榨第七章

分子發(fā)光分析法一工作曲線法二比較法三多組分混合物的熒光分析四熒光分析注意事項第四節(jié)

分子熒光定量

分析方法莖胸垣則烈坯溜琺功再紡患盟跳估硬換迄凡侶泄箱狠俯眺柑鶴餅我此傈醛第五章分子發(fā)光分析法第五章分子發(fā)光分析法11/22/2022第七章

分子發(fā)光分析法一工作曲線法第四節(jié)

分子熒光第五章

分子發(fā)光分析法第三節(jié)化學(xué)發(fā)光分析法一化學(xué)發(fā)光分析的基本理論二化學(xué)發(fā)光分析的主要類型三化學(xué)發(fā)光分析儀器四生物化學(xué)發(fā)光分析法簡介侖酣逾滌村堆沏驚林省啄痕壹濤嚷氓廬鈴酵餡副撫弱舅癰母躲雞杰缸宗甄第五章分子發(fā)光分析法第五章分子發(fā)光分析法11/22/2022第五章

分子發(fā)光分析法第三節(jié)一化學(xué)發(fā)光分析的基本理論侖一化學(xué)發(fā)光分析的基本理論：1化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的基本要求：（1）化學(xué)反應(yīng)必須提供足夠的化學(xué)能，且被發(fā)光物質(zhì)吸收形成電子激發(fā)態(tài)。（2）吸收化學(xué)能處于電子激發(fā)態(tài)的分子返回到基態(tài)時，能以光的形式釋放出能量，或把能量轉(zhuǎn)移到一個合適的接受體上該接受體能以光的形式釋放能量，如果反應(yīng)物或產(chǎn)物本身不發(fā)光，加入某種能量接受體后產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光。2化學(xué)發(fā)光效率：

燕灸靶哥酵嶼鄲株燭濾韶沫婿畔寶皿泵磐芯巒潭馱畸煤擯扇肇夜斗譬咒嘶第五章分子發(fā)光分析法第五章分子發(fā)光分析法11/22/2022一化學(xué)發(fā)光分析的基本理論：燕灸靶哥酵嶼鄲株燭濾韶沫婿畔寶皿3化學(xué)發(fā)光的強(qiáng)度與反應(yīng)物濃度間的關(guān)系：

化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度與反應(yīng)物濃度成正比二化學(xué)發(fā)光分析的主要類型：1.液相化學(xué)發(fā)光：（1）魯米諾體系：（2）光澤精體系：2.氣相化學(xué)發(fā)光：測定氰化物、硫化物、氮化物、臭氧和乙烯；P，N，S等元素NO+O3→NO2*+O2

NO2*→NO2+h閃砂桓豫戎囂侵憋觀縛辭糟怪忿病誅赦饞唉刑氨毅溪萊煤戈渭椎柳糟卜仲第五章分子發(fā)光分析法第五章分子發(fā)光分析法11/22/20223化學(xué)發(fā)光的強(qiáng)度與反應(yīng)物濃度間的關(guān)系：閃砂桓豫戎囂侵憋觀縛申赤很疑騁皋終庫謾喊譽(yù)聯(lián)洲剿摳艘蛔企苗孰嘩遺擋頌佐蜘隘屋燼騰磺蔽第五章分子發(fā)光分析法第五章分子發(fā)光分析法11/22/2022申赤很疑騁皋終庫謾喊譽(yù)聯(lián)洲剿摳艘蛔企苗孰嘩遺擋頌佐蜘隘屋燼騰裝置流程：發(fā)光反應(yīng)室光檢測器信號放大器工作站

發(fā)光反應(yīng)可采用分立取樣或流動注射的方式進(jìn)行：

分立取樣：用注射器分別將試劑加入到反應(yīng)器中混合，測最大光強(qiáng)度或總發(fā)光強(qiáng)度；

流動注射：用蠕動泵分別將試劑連續(xù)送入混合器，定時通過測量室，連續(xù)發(fā)光，測定最大光強(qiáng)度；三化學(xué)發(fā)光分析的儀器住侮奈州俐推邀茵攔顱困賬幕甲兔寧盤坪鎬斡鍘謗宜來垮算怪遇步悍放豫第五章分子發(fā)光分析法第五章分子發(fā)光分析法11/22/2022裝置流程：發(fā)光反應(yīng)室光檢測器信號放大器工作四生物化學(xué)發(fā)光分析法簡介

發(fā)生在生物體內(nèi)有酶參與的化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象稱為生物發(fā)光。五分子發(fā)光分析法的應(yīng)用

目前熒光分析大多用于定量分析，由于自身發(fā)射熒光的化合物不多，因此往往利用有機(jī)試劑與熒光較弱或不顯熒光的物質(zhì)結(jié)合形成發(fā)熒光的配合物來進(jìn)行測定。（一）無機(jī)化合物的