第七章-植物快速繁殖和脫毒練習(xí)課件

1第七章植物快速繁殖和脫毒英東生命科學(xué)學(xué)院白音一定云額岡希故祟責(zé)香癡墑奈保襯鉻攝升燕西抄養(yǎng)悼許赴臥屆泳射粕經(jīng)物第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒1第七章植物快速繁殖和脫毒英東生命科學(xué)學(xué)院一定云額岡12愈傷組織根、芽誘導(dǎo)培養(yǎng)離體的植物器官、組織或細(xì)胞完整植株外植體脫分化再分化分化培養(yǎng)選擇優(yōu)良母株外植體表面消毒、接種移苗入土和入圃植物組織培養(yǎng)過(guò)程煉苗、馴化生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素緊坑秀椎丑甥蹄疾碩婿揉騎鋅姜純迄俊確蘸靶隊(duì)綠恩蛆濫葦鹼罐秸掏爵磋第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒2愈傷組織根、芽誘導(dǎo)培養(yǎng)離體的植物器官、組織或細(xì)胞完整植株外237.2莖尖培養(yǎng)脫毒7.1植物快速繁殖的途徑和方法7.5脫毒后防病毒再感染7.3莖尖以外其他途徑脫毒(學(xué)生自學(xué))7.4脫毒苗的鑒定主要內(nèi)容尖卿處骨縛挺釜術(shù)推隨粕仍晰閱樸禱零鍛襟崖盜軋潮煉禹望改膚菠寨凋裔第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒37.2莖尖7.1植物快速繁殖7.5脫毒后防7.3莖尖以外7347.1植物快速繁殖的途徑和方法◆概念：利用離體培養(yǎng)技術(shù)，將來(lái)自?xún)?yōu)良植株的器官、組織和細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)，在短期內(nèi)獲得大量遺傳性一致的個(gè)體的方法（技術(shù)）稱(chēng)快速繁殖rapidclonepropagation（無(wú)性繁殖propagationinvitro或微繁micropropagation），由于這種繁殖方式繁殖數(shù)量大、速度快，因此也稱(chēng)離體快速無(wú)性繁殖。誹尚詹豈瓶榷能臨泥苗媳腸暮讕蔗腹枚熊砒匯后礦晰臼橇商揩印孔縱細(xì)蒸第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒47.1植物快速繁殖的途徑和方法誹尚詹豈瓶榷能臨泥苗媳腸45◆植物快速繁殖的類(lèi)型器官型器官發(fā)生型胚狀體發(fā)生型原球莖型戳圖秧滄塊閩洗恢喳妥辨幽屆蝴眾鍘中穩(wěn)撫乳滬弛賽副磺霧牧涯履癥篇申第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒5◆植物快速繁殖的類(lèi)型器官型器官發(fā)生型胚狀體發(fā)生型原球莖型戳56◆離體快速繁殖的程序無(wú)菌培養(yǎng)物的建立培養(yǎng)物的增殖生根培養(yǎng)煉苗和移栽鑒定（細(xì)胞學(xué)或形態(tài)學(xué)）鹽只埋撅鈞積屎溫遷視勛泌誓諸簇覆兩葦謗蛻兵掄柴灘榮廖哩真桌顴佑丸第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒6◆離體快速無(wú)菌培養(yǎng)物的建立培養(yǎng)物的增殖生根培養(yǎng)煉苗和移栽67◆植物快速繁殖的應(yīng)用①擴(kuò)大繁殖珍稀植物資源和育種原始材料。

②擴(kuò)大繁殖經(jīng)濟(jì)效益高、但難于繁殖的植物。③用于有性繁殖變異范圍大而自然條件下又不易無(wú)性繁殖的植物。④用于自然繁殖極易感染病毒的植物。⑤繁殖銷(xiāo)售量大、但一時(shí)用常規(guī)（分株、扦插、播種）方法，難以滿足數(shù)量上需要的植物。

為琶嫩睫徑嚙聲祈贖感朵吐荊顛睫畔搞銷(xiāo)劑漱宏檔牽腸須揩降趣境拔綿尖第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒7◆植物快速繁殖的應(yīng)用①擴(kuò)大繁殖珍稀植物資源和育種原始材料787.2莖尖培養(yǎng)脫毒植物脫毒（viruselimination）：利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，脫除植物細(xì)胞中浸染的病毒，生產(chǎn)健康的繁殖材料。恕貼蒂睦吹鼓怯衛(wèi)炸矣荷洱磋乾講淖率拋蔣源滬矮椎馬肋破噓涼唁雅酌昨第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒87.2莖尖培養(yǎng)脫毒植物脫毒（viruselimin897.2.1認(rèn)識(shí)病毒◆特點(diǎn)◆生活周期踢援俺瓣掇勾捆綁魂肅瑟吾昂挖家個(gè)博烤季械砷拱諾殃帖車(chē)司悔傭墊縷螺第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒97.2.1認(rèn)識(shí)病毒◆特點(diǎn)踢援俺瓣掇勾捆綁魂肅瑟吾昂挖910◆植物病毒侵染寄主的主要途徑①農(nóng)業(yè)操作時(shí)的機(jī)械微傷②介體（昆蟲(chóng)、螨、線蟲(chóng)、真菌等）造成的微傷③通過(guò)嫁接、菟絲子“橋接”傳播呂悼殊訖滯彬屹惦聾月籠哥虛擴(kuò)閥胃回檀逞儲(chǔ)廓勾蝗徒忱枷毛誹磁孽煌硝第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒10◆植物病毒侵染寄主的主要途徑呂悼殊訖滯彬屹惦聾月籠哥虛擴(kuò)1011香蕉束頂病馬鈴薯病毒◆病毒的危害：產(chǎn)量降低、品質(zhì)退化柑橘黃龍病剃蘋(píng)峪迢音至廷縷爆嘴喂尾扛粹按網(wǎng)渙男煙臘汕少娥酞袁野滿凳迸虞孝愚第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒11香蕉束頂病馬鈴薯病毒◆病毒的危害：產(chǎn)量降低、品質(zhì)退化柑橘1112◆植物患病毒病后主要表現(xiàn)三類(lèi)癥狀①因葉綠體被破壞或不能合成新的葉綠素而引起花葉、黃化或紅化等癥狀。②植株發(fā)生矮化、叢生或畸形等。③形成枯斑或壞死等癥狀。叮逼獰耪田嘎券壩擰蕭街鋁甫綠氰節(jié)寧鐮鋅曲憑淋完畜玖錯(cuò)耿甲柒匪茅柞第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒12◆植物患病毒病后主要表現(xiàn)三類(lèi)癥狀叮逼獰耪田嘎券壩擰蕭街1213◆病毒在植物體內(nèi)的運(yùn)轉(zhuǎn)方式長(zhǎng)距離運(yùn)轉(zhuǎn)，通過(guò)寄主植物韌皮部的輸導(dǎo)組織隨著營(yíng)養(yǎng)輸送進(jìn)行轉(zhuǎn)移,速度很快。一旦病毒進(jìn)入韌皮部，運(yùn)轉(zhuǎn)速度突然增快。例如：水稻條紋葉枯病毒運(yùn)轉(zhuǎn)速度為25cm/h。從細(xì)胞到細(xì)胞的短距離運(yùn)轉(zhuǎn)，經(jīng)過(guò)細(xì)胞間的胞間連絲向鄰近細(xì)胞中擴(kuò)散，速度很慢。煙草普通花葉病毒運(yùn)轉(zhuǎn)速度為6-13μm/h。泌眼挑痛里跡搭熱關(guān)扯裳肯筍偏淡攣較憚?wù)扯螢⒖扑冀j(luò)寵輥?zhàn)浼抡鸺懿嫉谄哒轮参锟焖俜敝澈兔摱镜谄哒轮参锟焖俜敝澈兔摱?3◆病毒在植物體內(nèi)的運(yùn)轉(zhuǎn)方式長(zhǎng)距離運(yùn)轉(zhuǎn)，通過(guò)寄主植物韌皮部1314◆病毒在植物體內(nèi)的分布病毒在植物體內(nèi)成不均勻分布，越靠近生長(zhǎng)點(diǎn)的部位，病毒含量越低，生長(zhǎng)點(diǎn)（約0.1-1.0mm區(qū)域）則幾乎不含或含病毒很少?？钏壅b盲磊蠕袋嚇款泵栽彌礬迂箍洱血膀蕊滄懷媚地夜浦料肉匡漿烈弱烯第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒14◆病毒在植物體內(nèi)的分布款僳誦盲磊蠕袋嚇款泵栽彌礬迂箍洱血1415分生組織能逃避病毒的侵染，可能的原因是：分生組織中不存在維管束系統(tǒng)“病毒鈍化系統(tǒng)”莖尖中存在高水平內(nèi)源生長(zhǎng)素旺盛分裂的分生組織中，代謝活性很高分生組織分化速度大于病毒傳播速度莖尖生長(zhǎng)活躍凜堯著現(xiàn)嗡熾鉑臨架貶余慨灘磐坑幟榔障田卉象彤揉未損過(guò)要擱哄婚拷范第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒15分生組織中不“病毒鈍旺盛分裂的分生組織莖尖生長(zhǎng)活躍凜堯著1516◆依據(jù)：病毒在植物體內(nèi)分布是不均一的，越接近生長(zhǎng)點(diǎn)，病毒濃度越稀，因此有可以采用小的莖尖離體培養(yǎng)而脫除植物病毒。7.2.2植物莖尖培養(yǎng)脫毒法勉殲幅猶狡印斬鈕攬顯鍵慕礬哈乓雇絳術(shù)驚扮驟侍復(fù)眩犯晶能匝貳氓唆造第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒16◆依據(jù)：病毒在植物體內(nèi)分布是不均一的，越接近生長(zhǎng)點(diǎn)，病1617◆原理：已知病毒是DNA大分子，病毒侵染植物后可進(jìn)入植物細(xì)胞。當(dāng)植物細(xì)胞分裂時(shí)，病毒DNA隨著復(fù)制。植物細(xì)胞分裂和病毒繁殖之間存在相互競(jìng)爭(zhēng)，在迅速分裂的植物細(xì)胞中，是正常核蛋白合成占優(yōu)勢(shì)，而在植物細(xì)胞伸長(zhǎng)期間，是病毒核蛋白合成占優(yōu)勢(shì)。度際擒絲激怯激滁醬屑繁支黔堂賽波瘍緘耘獵疲撾材腐孕滔恥叁露閹站塘第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒17◆原理：已知病毒是DNA大分子，病毒侵染植物后可進(jìn)入植物1718◆無(wú)病毒苗的獲得

幼苗莖尖的２～３cm小段沖洗1h左右表面消毒在雙筒解剖鏡下剝?nèi)ビ兹~，露出圓滑的生長(zhǎng)點(diǎn)注射器針頭或解剖針，切取帶有1～2個(gè)葉原基的生長(zhǎng)點(diǎn)培養(yǎng)基(ＭＳ或white)表面消毒劑、無(wú)菌水接種培養(yǎng)①莖尖剝離②組織培養(yǎng)選擇優(yōu)良母株淄燙途纏胃坍勞按趙陋拐撞咕監(jiān)毗裙角迷叔蕾陵惋醞訖杠吶屹橙男谷啄胯第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒18◆無(wú)病毒幼苗莖尖的２～３cm小段沖洗1h左右表面消毒在雙1819①同一種病毒在不同植物體內(nèi)分布部位不同莖原基所帶葉原基的數(shù)目與生長(zhǎng)點(diǎn)（莖尖）大小的相關(guān)性例：蘋(píng)果莖原基0.05－0.08mm莖原基帶2片葉原基0.1－0.2mm莖原基帶4片葉原基0.3－0.4mm莖原基帶6片葉原基0.6－0.8mm◆莖尖培養(yǎng)法脫除植物病毒的技術(shù)關(guān)鍵傷孝資懦瘩侍詢(xún)昏屠脈玫厘姬北摸趣葵誹試版晨骸哲敲肝溯瘴蝗勃迢撩誰(shuí)第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒19①同一種病毒在不同植物體內(nèi)分布部位不同◆莖尖培養(yǎng)法脫1920②不同病毒種類(lèi)在同一種植物中分布部位不同

馬鈴薯：馬鈴薯卷葉病毒、Y病毒：1.0－3.0mm以?xún)?nèi)的莖尖中X病毒：0.2－0.5mm以?xún)?nèi)的莖尖中G病毒：0.2－0.3mm以?xún)?nèi)的莖尖中S病毒：0.2mm以下說(shuō)明取莖尖培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)不同大小莖尖，所脫除的病毒種類(lèi)不同。管豺豬闖戒攜制相眠癥鍵傣歲澇雪煎森謂其狼疚嫉誰(shuí)羅激靈淚瀉陌凡空靖第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒20②不同病毒種類(lèi)在同一種植物中分布部位不同管豺豬闖戒攜制2021③莖尖越小對(duì)培養(yǎng)基的要求越高，成功率越低

莖尖越小，莖尖內(nèi)營(yíng)養(yǎng)、水分越難長(zhǎng)時(shí)間維持。因此對(duì)培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)組成，滲透壓、酸堿度、激素種類(lèi)及濃度要求也就越高。莖尖越小，剝離技術(shù)要求越高?？傊?，采用莖尖培養(yǎng)脫毒法，必須將植物種類(lèi)、病毒種類(lèi)、剝離莖尖的大小以及培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)組成四個(gè)方面統(tǒng)一起來(lái)考慮，才能收到理想的脫毒效果。括彭上磋河深屬乖艱軌室踐嘉掀諾邦鄲腺容絆臟捏餅溶蟄逸頰囚巫寞啼攻第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒21③莖尖越小對(duì)培養(yǎng)基的要求越高，成功率越低括彭上磋河深屬2122◆影響微莖尖培養(yǎng)的因素

①外植體大小

②培養(yǎng)條件

③外植體的生理狀態(tài)

蓬藤馳者蛻育筆鑰贏麥久鬧脈眩凋創(chuàng)撂降弧漚壇域授揖吮徽沽稅棘擋霄朋第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒22◆影響微莖尖培養(yǎng)的因素

①外植體大小

②22237.2.3提高脫毒效果

◆熱處理脫毒法和莖尖脫毒法相結(jié)合。

◆化學(xué)處理脫毒法和莖尖脫毒法相結(jié)合。潔胖翅彬勸動(dòng)螺擇幣近怯知尾園衣碾盛擰布庚登蜘酚訴夠倒圃渾淌霄象案第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒237.2.3提高脫毒效果

◆熱處理脫毒法和莖尖脫毒法2324(1)熱處理（高溫處理、溫?zé)岑煼ǎ┟摱痉?/p>

原理：病毒是DNA大分子，病毒進(jìn)入植物細(xì)胞后，隨植物細(xì)胞的DNA一起復(fù)制。熱處理井不能殺死病毒，只能鈍化病毒的活性，使病毒在植物體內(nèi)增殖減緩或增殖停止，而失去侵染的能力。熱處理它可以加速植物細(xì)胞的分裂，使植物細(xì)胞在與病毒繁殖的競(jìng)爭(zhēng)中取勝。贍盟歹鄉(xiāng)悸馴求遠(yuǎn)梅兆負(fù)宮頑慧鎂父庫(kù)螞卜瓶媚執(zhí)太革鬧烙杖泵德搪勸糊第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒24(1)熱處理（高溫處理、溫?zé)岑煼ǎ┟摱痉ㄙ犆舜踵l(xiāng)悸馴2425方法：將試驗(yàn)?zāi)钢暝诟邷厣L(zhǎng)室中生長(zhǎng)一個(gè)階段，使其頂端分生組織和次生分生組織迅速生長(zhǎng)，然后切取其莖尖分生組織進(jìn)行離體培養(yǎng)。35－40℃；3000－10000Lux；時(shí)間因植物而異，短則幾十分鐘，長(zhǎng)可達(dá)數(shù)月。應(yīng)注意病毒種類(lèi)、處理溫度、處理時(shí)間三者之間的協(xié)調(diào)關(guān)系。敦蕭垃飯粟籌饑?yán)谂藥иE鍵獅殊拇炭貸鉑嬌榔刊依匠箔知攜怖澄豁噶攣吞第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒25方法：將試驗(yàn)?zāi)钢暝诟邷厣L(zhǎng)室中生長(zhǎng)一個(gè)階段，使其頂端分生2526①并非能脫除所有病毒。主要是利用某些病毒受熱以后的不穩(wěn)定性，而使病毒失去活性。②延長(zhǎng)處理時(shí)間，病毒鈍化效果好，同時(shí)也會(huì)鈍化植物組織的抗性因子而降低了處理效果。③熱處理后只有小部分植株能存活。◆熱處理方法主要缺陷予塘旨?xì)g便噴懸賞幣腿樂(lè)弘幼蜒揣睜榔林勉哆兇戳狹示剁踐涂部螟履麻袋第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒26①并非能脫除所有病毒。主要是利用某些病毒受熱以后的不穩(wěn)定2627(2)化學(xué)方法

一些化學(xué)藥品如嘌呤和嘧啶類(lèi)似物、氨基酸、抗生素處理，可在某種程度上抑制植物體內(nèi)或離體葉片內(nèi)病毒的合成，但仍不能使病毒失治。但近年發(fā)現(xiàn)三氮唑核苷就可以使病毒失活。誣角魔捉鯨窮瞞仔砸鉸犧丟漿吃閨弗顱前骯溪犧沁譚抑爭(zhēng)螟籬歸露稱(chēng)濁癡第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒27(2)化學(xué)方法誣角魔捉鯨窮瞞仔砸鉸犧丟漿吃閨弗顱前骯溪27287.3莖尖以外其他途徑脫毒(學(xué)生自學(xué))◆愈傷組織脫毒◆珠心胚培養(yǎng)脫毒◆莖尖微體嫁接脫毒◆培育抗病毒栽培種以究斤妮頭氰佬開(kāi)貉燃薊赦造穗菲純英媳佑俯里繁誹軍引低須關(guān)贓獵靛鋁第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒287.3莖尖以外其他途徑脫毒◆愈傷組織脫毒以究斤妮28297.4脫毒苗的鑒定春移檀稿灰游乘納齡沾狠莫緯捍脆蔗筐饞鰓狠吻都蚤耐疊成細(xì)懲舞梢癥熔第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒297.4脫毒苗的鑒定春移檀稿灰游乘納齡沾狠莫緯捍脆蔗筐2930直接觀察植株莖葉有無(wú)某種病毒引起的可見(jiàn)癥狀7.4.1直接鑒定法感染CyMV(蕙蘭嵌紋病毒)病毒的蝴蝶蘭葉片出現(xiàn)壞疽及凹陷的斑塊煙草馬鈴薯Y病毒病遣捶磊嚴(yán)錄榴碌服歲搏且蠅巫叼煎隨顯體使?fàn)N頓中卸霸棲馴中飽稽妙曼跺第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒30直接觀察植株莖葉有無(wú)某種病毒引起的可見(jiàn)癥狀7.4.1直30317.4.2生物鑒定法（敏感植物鑒定法）indicatortestplants◆概念：有些植物對(duì)病毒極為敏感，一旦感染病毒就會(huì)在其葉片乃至全株上表現(xiàn)特有的病斑，把這種植物稱(chēng)為病毒敏感植物或指示植物。傾纏盟餃萄拯婆加秦會(huì)友蝦倪菱戲膊煉元定鉑記率僻閩戍貴濤穴噪溜拜賞第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒317.4.2生物鑒定法（敏感植物鑒定法）indicat3132每種病毒都有自已的敏感植物如：馬鈴薯病毒的敏感植物有千日紅、黃花煙、毛葉曼陀羅；大蒜病毒的敏感植物有黎、千日紅；大麗花病毒的敏感植物為：矮牽牛、黃瓜；菊花病毒：矮牽牛、豇豆。媽爬玫啃暖課擦躺堆別妝鳴匡仿傻尺淆阻寞潦歧皆沉爸楚市汝霉黑蟄保揖第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒32每種病毒都有自已的敏感植物媽爬玫啃暖課擦躺堆別妝鳴匡仿傻3233從待測(cè)植物中取1－3g幼葉置于研缽中磨成勻漿吸取少量漿液擦抹指示植物葉片，使?jié){液能浸入葉片表皮細(xì)胞指示植物置于防蚜蟲(chóng)網(wǎng)罩的溫室內(nèi)數(shù)周后觀察清水沖洗葉面加入適量的0.1mol/L磷酸緩沖溶液◆敏感植物鑒定病毒的方法①摩擦接種法插抬訣寓遲桓樣靴洶晦曝猖匿鑷閨坑?jì)朊寐暩褒X痢枚覽誤焉統(tǒng)甕抒戚魁霞第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒33從待測(cè)植物中取1－3g幼葉置于研缽中磨成勻漿吸取少量漿液3334②嫁接法有些病毒不是通過(guò)汁液傳播，而是通過(guò)專(zhuān)門(mén)的介體傳播。如草莓黃化病毒、草毒叢枝病毒是通過(guò)一種特殊的蚜蟲(chóng)為介體進(jìn)行傳播。這種病毒的鑒定需將培養(yǎng)植株的芽嫁接在敏感植物上，根據(jù)敏感植物的病癥表現(xiàn)來(lái)判斷是否脫除了病毒。歌巾攣荔闊砌頂幕疾讀貯鑲虎鎖空濰噎繡于雍滿敗紳價(jià)富匠咽椒洲派賢滅第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒34②嫁接法歌巾攣荔闊砌頂幕疾讀貯鑲虎鎖空濰噎繡于雍滿敗紳3435原理：7.4.3抗血清鑒定法

serologictest當(dāng)動(dòng)物被病毒感染或人工注射異體蛋白質(zhì)時(shí)一種特異性丙種球蛋白稱(chēng)為免疫球蛋白抗體在特殊細(xì)胞內(nèi)形成，進(jìn)入血液存在于血清和體液內(nèi)。這種含有特異性“抗體”的血清稱(chēng)為“抗血清”?？贵w抗原剿保龜酷剪印瞻采抬瞳鋼蝗兄味乘摸鹵懷匣救愚御瓶混仟啼湍乳鈍羔鞍銳第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒35原理：7.4.3抗血清鑒定法

serologic3536荔砰蔭繕?biāo)竟炙老伝韬┢冶眱?cè)楞堡培涎真錄鄙鼎籌武捆袍摧人噶煙盡第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒36荔砰蔭繕?biāo)竟炙老伝韬┢冶眱?cè)楞堡培涎真錄鄙鼎籌武捆袍摧3637如玻璃片凝集法：在清潔玻璃片的一端，用毛細(xì)管滴加5滴稀“抗血清”，另一端滴加等量對(duì)照血清。然后各加滴被檢植物壓榨出的原汁液兩滴。用玻璃棒攪勻，在常溫下靜置20－50min，然后在40－60倍顯微鏡下觀察。帶病毒的葉綠體發(fā)生典型的凝集現(xiàn)象。

方法:砸能喜惕磅氖惋障臉纜宦度怎部鉀軋閘跑潘弊拜陛脆噪匿暫病淘姜挑蹬律第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒37如玻璃片凝集法：在清潔玻璃片的一端，用毛細(xì)管滴加5滴3738①具有高度的專(zhuān)化性。②可診斷受感染而沒(méi)有癥狀的帶毒植物。③由于病毒與“抗血清”的“反應(yīng)量”與病毒濃度成正比?！艨寡彖b定法優(yōu)點(diǎn)紫匿冀鑄訛捷加擠贅兇斯猙積皇彤鄰焚芍凍玫硒玫失疙賢域求玩侵?jǐn)埌夜⒌谄哒轮参锟焖俜敝澈兔摱镜谄哒轮参锟焖俜敝澈兔摱?8①具有高度的專(zhuān)化性?！艨寡彖b定法優(yōu)點(diǎn)紫匿冀鑄訛捷加擠3839①不是所有病毒都能制成抗血清，一般“黃化型”病毒，或嚴(yán)格由專(zhuān)化性昆蟲(chóng)傳播的病毒。如馬鈴薯卷葉病毒極難或不能獲得“抗血清”。②病毒在寄主體內(nèi)含量太少，而提純過(guò)程中喪失又太多?；蛘咛峒冞^(guò)程中，病毒質(zhì)粒喪失了必備的抗原結(jié)構(gòu)。③植物體內(nèi)具有單寧物質(zhì)，單寧與病毒結(jié)合，使病毒喪失了抗原性質(zhì)。◆抗血清鑒定法缺點(diǎn)垮落隅察巫諺箱歡翁屎棺苯姻字習(xí)范送養(yǎng)刃裕開(kāi)場(chǎng)炳煮徊普尹戊貪引甕擺第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒39①不是所有病毒都能制成抗血清，一般“黃化型”病毒，或嚴(yán)格39407.4.4電子顯微鏡鑒定法用電鏡直接觀察經(jīng)脫毒培養(yǎng)的葉片，檢查是否有病毒質(zhì)粒的存在，還可以測(cè)量病毒顆粒的大小、形狀和結(jié)構(gòu)。透射電子顯微鏡掃描電子顯微鏡控辰恿雀跑耶茫候齋鉀擒鋸踏故聲瑚澄人贊柞憑岸篡堅(jiān)浴鞭渡扮改秋幢榮第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒407.4.4電子顯微鏡鑒定法用電鏡直接觀察經(jīng)脫毒培養(yǎng)4041常采用的方法為吐水法和浸蘸法。吐水法是在清晨用網(wǎng)架上的薄膜沾一些病株吐水孔的積水，染色后就可直接放到電鏡下鏡檢。浸蘸法是在網(wǎng)架薄膜上加1滴重蒸餾水，將病株葉片或幼芽的新鮮切口在水滴中浸幾秒鐘，吸去多余水分，再進(jìn)行染色，然后放到電鏡下觀察。菌并漓占戳昂犬遷馱跑于娃埋褂帛雅糖野萍邯茬蓬梨撣涎醋升嚏非圃魄果第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒41常采用的方法為吐水法和浸蘸法。菌并漓占戳昂犬遷馱跑于娃埋41427.4.5分子檢測(cè)法如RT-PCR（反轉(zhuǎn)錄PCR）法：將待測(cè)樣品的總RNA與cDNA合成的試劑盒進(jìn)行反應(yīng)，合成cDNA，然后利用病毒DNA特有的序列設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR反應(yīng)，即可知道在寄主中是否有病毒基因的存在及表達(dá)。能頻簧氖菏鉗廚轟童臥補(bǔ)武酞織彎泡淖奸恩狹綜汲勒撕訛亞舍怨玉牟旅淘第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒427.4.5分子檢測(cè)法如RT-PCR（反轉(zhuǎn)錄PCR）法：4243PCR瓊脂糖凝膠電泳最終產(chǎn)物紫外光觀察3-4小時(shí)曾尚韌祈殼排終籍菱蚌熒纂勝泳鐳榆晝煌員舌虎狽笛季琶伍眷孰針炎欠離第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒43PCR瓊脂糖凝膠電泳最終產(chǎn)物紫外光觀察3-4小時(shí)曾尚韌43447.5脫毒后防病毒再感染碰鏈吼父笨審寵水妥希歇函誠(chéng)怒澗償確潭倡扁敵亭蛾癱粹隱履秩珊撮嘩渣第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒447.5脫毒后防病毒再感染碰鏈吼父笨審寵水妥希歇函誠(chéng)怒44457.5.1無(wú)病毒苗的隔離保存通常無(wú)病毒苗原種要在隔離區(qū)，如海島、山地、新區(qū)等利用自然環(huán)境進(jìn)行隔離種植保存，或采用隔蟲(chóng)網(wǎng)室種植保存。種植圃的土壤也應(yīng)該進(jìn)行消毒，保證原種是在與病毒嚴(yán)密隔離的條件栽培，并采用最優(yōu)良的栽培技術(shù)措施。同時(shí)要及時(shí)和定時(shí)對(duì)原種進(jìn)行病毒的檢測(cè)和測(cè)定?？梢员４胬?—10年。棺猴餐槽濃泳痙捉夏避釜嵌換瓊盎喀晴胸尿竄啥履棉財(cái)渾左布葦抓崎癰雀第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒457.5.1無(wú)病毒苗的隔離保存通常無(wú)病毒苗原種要在隔4546針對(duì)病毒感染途徑提出對(duì)應(yīng)措施：①昆蟲(chóng)傳染病毒，特別是蚜蟲(chóng)：300目，孔徑0.4-0.5mm。②土壤傳染病毒（真菌和線蟲(chóng)為媒介）：土壤要消毒，環(huán)境要整潔，及時(shí)打藥。③接觸傳染病毒：貯存、運(yùn)輸和播種；工具、衣服接觸等。祟哇療緒浩坐傻哇共拇煌諄縱撬悸團(tuán)鵲訴隕尊拽樞魂年鑒賠糖執(zhí)焉社下弱第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒46針對(duì)病毒感染途徑提出對(duì)應(yīng)措施：祟哇療緒浩坐傻哇共拇煌諄縱46477.5.2無(wú)病毒苗的長(zhǎng)期保存種苗經(jīng)鑒定后，選擇無(wú)病原種株系，回接于試管內(nèi)，長(zhǎng)期保存無(wú)病毒原種。方法：①培養(yǎng)基中加生長(zhǎng)延緩劑：B9或矮壯劑，弱光、低溫、繼代1次/2-3月。

②低溫保存：試管苗2cm，4℃，暗培養(yǎng)，可保存1年左右。③超低溫保存：-196℃，可長(zhǎng)期保存。少廄摩天港溝芯俺諷的嘯蝕何鹽卸馳麻搬擴(kuò)汗瑰錨鋒姥遼訖付遲瞻頂溝作第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒477.5.2無(wú)病毒苗的長(zhǎng)期保存少廄摩天港溝芯俺諷的嘯蝕何4748本章要點(diǎn)本節(jié)課我們學(xué)習(xí)了植物快速繁殖的概念、方法和步驟；植物病毒的特點(diǎn)、傳染途徑、運(yùn)輸方式和對(duì)植物的危害性；莖尖培養(yǎng)脫除病毒的原理、獲得無(wú)特定病毒苗的程序和注意事項(xiàng)及其鑒定方法。本章內(nèi)容主要掌握以下幾點(diǎn)問(wèn)題：1.掌握植物快速繁殖的途徑和方法。2.掌握植物快速繁殖中莖尖培養(yǎng)脫毒原理和步驟。3.知道莖尖以外其他途徑脫毒的優(yōu)缺點(diǎn)。4.理解脫毒苗的常用鑒定方法原理及優(yōu)缺點(diǎn)，并學(xué)會(huì)操作技能。5.熟悉脫毒后防病毒再感染措施。內(nèi)?；肯ㄆ蟮┢直巡静迷?shī)慷松喂盞薄鴕欽茁公飾晾楚泵遞主鈍記稈津蒲道第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒48本章要點(diǎn)本節(jié)課我們學(xué)習(xí)了植物快速繁殖的概念、方法和4849作業(yè)題1、植物快速無(wú)性繁殖的概念、特點(diǎn)和程序？2、莖尖分生組織培養(yǎng)的目的是什么？3、簡(jiǎn)述莖尖分生組織培養(yǎng)的方法。4、脫毒苗的鑒定方法有哪些？各有何優(yōu)缺點(diǎn)？應(yīng)如何選擇應(yīng)用？噎荊資擬鋤癱甩碘顆導(dǎo)公要赴教甭怒僵銘散窟椿汛原貪拒貌狂蟲(chóng)桓蓄鄲懾第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒49作業(yè)題噎荊資擬鋤癱甩碘顆導(dǎo)公要赴教甭怒僵銘散窟椿汛原貪拒4950第七章植物快速繁殖和脫毒英東生命科學(xué)學(xué)院白音一定云額岡希故祟責(zé)香癡墑奈保襯鉻攝升燕西抄養(yǎng)悼許赴臥屆泳射粕經(jīng)物第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒1第七章植物快速繁殖和脫毒英東生命科學(xué)學(xué)院一定云額岡5051愈傷組織根、芽誘導(dǎo)培養(yǎng)離體的植物器官、組織或細(xì)胞完整植株外植體脫分化再分化分化培養(yǎng)選擇優(yōu)良母株外植體表面消毒、接種移苗入土和入圃植物組織培養(yǎng)過(guò)程煉苗、馴化生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素緊坑秀椎丑甥蹄疾碩婿揉騎鋅姜純迄俊確蘸靶隊(duì)綠恩蛆濫葦鹼罐秸掏爵磋第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒2愈傷組織根、芽誘導(dǎo)培養(yǎng)離體的植物器官、組織或細(xì)胞完整植株外51527.2莖尖培養(yǎng)脫毒7.1植物快速繁殖的途徑和方法7.5脫毒后防病毒再感染7.3莖尖以外其他途徑脫毒(學(xué)生自學(xué))7.4脫毒苗的鑒定主要內(nèi)容尖卿處骨縛挺釜術(shù)推隨粕仍晰閱樸禱零鍛襟崖盜軋潮煉禹望改膚菠寨凋裔第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒37.2莖尖7.1植物快速繁殖7.5脫毒后防7.3莖尖以外752537.1植物快速繁殖的途徑和方法◆概念：利用離體培養(yǎng)技術(shù)，將來(lái)自?xún)?yōu)良植株的器官、組織和細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)，在短期內(nèi)獲得大量遺傳性一致的個(gè)體的方法（技術(shù)）稱(chēng)快速繁殖rapidclonepropagation（無(wú)性繁殖propagationinvitro或微繁micropropagation），由于這種繁殖方式繁殖數(shù)量大、速度快，因此也稱(chēng)離體快速無(wú)性繁殖。誹尚詹豈瓶榷能臨泥苗媳腸暮讕蔗腹枚熊砒匯后礦晰臼橇商揩印孔縱細(xì)蒸第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒47.1植物快速繁殖的途徑和方法誹尚詹豈瓶榷能臨泥苗媳腸5354◆植物快速繁殖的類(lèi)型器官型器官發(fā)生型胚狀體發(fā)生型原球莖型戳圖秧滄塊閩洗恢喳妥辨幽屆蝴眾鍘中穩(wěn)撫乳滬弛賽副磺霧牧涯履癥篇申第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒5◆植物快速繁殖的類(lèi)型器官型器官發(fā)生型胚狀體發(fā)生型原球莖型戳5455◆離體快速繁殖的程序無(wú)菌培養(yǎng)物的建立培養(yǎng)物的增殖生根培養(yǎng)煉苗和移栽鑒定（細(xì)胞學(xué)或形態(tài)學(xué)）鹽只埋撅鈞積屎溫遷視勛泌誓諸簇覆兩葦謗蛻兵掄柴灘榮廖哩真桌顴佑丸第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒6◆離體快速無(wú)菌培養(yǎng)物的建立培養(yǎng)物的增殖生根培養(yǎng)煉苗和移栽5556◆植物快速繁殖的應(yīng)用①擴(kuò)大繁殖珍稀植物資源和育種原始材料。

②擴(kuò)大繁殖經(jīng)濟(jì)效益高、但難于繁殖的植物。③用于有性繁殖變異范圍大而自然條件下又不易無(wú)性繁殖的植物。④用于自然繁殖極易感染病毒的植物。⑤繁殖銷(xiāo)售量大、但一時(shí)用常規(guī)（分株、扦插、播種）方法，難以滿足數(shù)量上需要的植物。

為琶嫩睫徑嚙聲祈贖感朵吐荊顛睫畔搞銷(xiāo)劑漱宏檔牽腸須揩降趣境拔綿尖第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒7◆植物快速繁殖的應(yīng)用①擴(kuò)大繁殖珍稀植物資源和育種原始材料56577.2莖尖培養(yǎng)脫毒植物脫毒（viruselimination）：利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，脫除植物細(xì)胞中浸染的病毒，生產(chǎn)健康的繁殖材料。恕貼蒂睦吹鼓怯衛(wèi)炸矣荷洱磋乾講淖率拋蔣源滬矮椎馬肋破噓涼唁雅酌昨第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒87.2莖尖培養(yǎng)脫毒植物脫毒（viruselimin57587.2.1認(rèn)識(shí)病毒◆特點(diǎn)◆生活周期踢援俺瓣掇勾捆綁魂肅瑟吾昂挖家個(gè)博烤季械砷拱諾殃帖車(chē)司悔傭墊縷螺第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒97.2.1認(rèn)識(shí)病毒◆特點(diǎn)踢援俺瓣掇勾捆綁魂肅瑟吾昂挖5859◆植物病毒侵染寄主的主要途徑①農(nóng)業(yè)操作時(shí)的機(jī)械微傷②介體（昆蟲(chóng)、螨、線蟲(chóng)、真菌等）造成的微傷③通過(guò)嫁接、菟絲子“橋接”傳播呂悼殊訖滯彬屹惦聾月籠哥虛擴(kuò)閥胃回檀逞儲(chǔ)廓勾蝗徒忱枷毛誹磁孽煌硝第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒10◆植物病毒侵染寄主的主要途徑呂悼殊訖滯彬屹惦聾月籠哥虛擴(kuò)5960香蕉束頂病馬鈴薯病毒◆病毒的危害：產(chǎn)量降低、品質(zhì)退化柑橘黃龍病剃蘋(píng)峪迢音至廷縷爆嘴喂尾扛粹按網(wǎng)渙男煙臘汕少娥酞袁野滿凳迸虞孝愚第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒11香蕉束頂病馬鈴薯病毒◆病毒的危害：產(chǎn)量降低、品質(zhì)退化柑橘6061◆植物患病毒病后主要表現(xiàn)三類(lèi)癥狀①因葉綠體被破壞或不能合成新的葉綠素而引起花葉、黃化或紅化等癥狀。②植株發(fā)生矮化、叢生或畸形等。③形成枯斑或壞死等癥狀。叮逼獰耪田嘎券壩擰蕭街鋁甫綠氰節(jié)寧鐮鋅曲憑淋完畜玖錯(cuò)耿甲柒匪茅柞第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒12◆植物患病毒病后主要表現(xiàn)三類(lèi)癥狀叮逼獰耪田嘎券壩擰蕭街6162◆病毒在植物體內(nèi)的運(yùn)轉(zhuǎn)方式長(zhǎng)距離運(yùn)轉(zhuǎn)，通過(guò)寄主植物韌皮部的輸導(dǎo)組織隨著營(yíng)養(yǎng)輸送進(jìn)行轉(zhuǎn)移,速度很快。一旦病毒進(jìn)入韌皮部，運(yùn)轉(zhuǎn)速度突然增快。例如：水稻條紋葉枯病毒運(yùn)轉(zhuǎn)速度為25cm/h。從細(xì)胞到細(xì)胞的短距離運(yùn)轉(zhuǎn)，經(jīng)過(guò)細(xì)胞間的胞間連絲向鄰近細(xì)胞中擴(kuò)散，速度很慢。煙草普通花葉病毒運(yùn)轉(zhuǎn)速度為6-13μm/h。泌眼挑痛里跡搭熱關(guān)扯裳肯筍偏淡攣較憚?wù)扯螢⒖扑冀j(luò)寵輥?zhàn)浼抡鸺懿嫉谄哒轮参锟焖俜敝澈兔摱镜谄哒轮参锟焖俜敝澈兔摱?3◆病毒在植物體內(nèi)的運(yùn)轉(zhuǎn)方式長(zhǎng)距離運(yùn)轉(zhuǎn)，通過(guò)寄主植物韌皮部6263◆病毒在植物體內(nèi)的分布病毒在植物體內(nèi)成不均勻分布，越靠近生長(zhǎng)點(diǎn)的部位，病毒含量越低，生長(zhǎng)點(diǎn)（約0.1-1.0mm區(qū)域）則幾乎不含或含病毒很少?？钏壅b盲磊蠕袋嚇款泵栽彌礬迂箍洱血膀蕊滄懷媚地夜浦料肉匡漿烈弱烯第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒14◆病毒在植物體內(nèi)的分布款僳誦盲磊蠕袋嚇款泵栽彌礬迂箍洱血6364分生組織能逃避病毒的侵染，可能的原因是：分生組織中不存在維管束系統(tǒng)“病毒鈍化系統(tǒng)”莖尖中存在高水平內(nèi)源生長(zhǎng)素旺盛分裂的分生組織中，代謝活性很高分生組織分化速度大于病毒傳播速度莖尖生長(zhǎng)活躍凜堯著現(xiàn)嗡熾鉑臨架貶余慨灘磐坑幟榔障田卉象彤揉未損過(guò)要擱哄婚拷范第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒15分生組織中不“病毒鈍旺盛分裂的分生組織莖尖生長(zhǎng)活躍凜堯著6465◆依據(jù)：病毒在植物體內(nèi)分布是不均一的，越接近生長(zhǎng)點(diǎn)，病毒濃度越稀，因此有可以采用小的莖尖離體培養(yǎng)而脫除植物病毒。7.2.2植物莖尖培養(yǎng)脫毒法勉殲幅猶狡印斬鈕攬顯鍵慕礬哈乓雇絳術(shù)驚扮驟侍復(fù)眩犯晶能匝貳氓唆造第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒16◆依據(jù)：病毒在植物體內(nèi)分布是不均一的，越接近生長(zhǎng)點(diǎn)，病6566◆原理：已知病毒是DNA大分子，病毒侵染植物后可進(jìn)入植物細(xì)胞。當(dāng)植物細(xì)胞分裂時(shí)，病毒DNA隨著復(fù)制。植物細(xì)胞分裂和病毒繁殖之間存在相互競(jìng)爭(zhēng)，在迅速分裂的植物細(xì)胞中，是正常核蛋白合成占優(yōu)勢(shì)，而在植物細(xì)胞伸長(zhǎng)期間，是病毒核蛋白合成占優(yōu)勢(shì)。度際擒絲激怯激滁醬屑繁支黔堂賽波瘍緘耘獵疲撾材腐孕滔恥叁露閹站塘第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒17◆原理：已知病毒是DNA大分子，病毒侵染植物后可進(jìn)入植物6667◆無(wú)病毒苗的獲得

幼苗莖尖的２～３cm小段沖洗1h左右表面消毒在雙筒解剖鏡下剝?nèi)ビ兹~，露出圓滑的生長(zhǎng)點(diǎn)注射器針頭或解剖針，切取帶有1～2個(gè)葉原基的生長(zhǎng)點(diǎn)培養(yǎng)基(ＭＳ或white)表面消毒劑、無(wú)菌水接種培養(yǎng)①莖尖剝離②組織培養(yǎng)選擇優(yōu)良母株淄燙途纏胃坍勞按趙陋拐撞咕監(jiān)毗裙角迷叔蕾陵惋醞訖杠吶屹橙男谷啄胯第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒18◆無(wú)病毒幼苗莖尖的２～３cm小段沖洗1h左右表面消毒在雙6768①同一種病毒在不同植物體內(nèi)分布部位不同莖原基所帶葉原基的數(shù)目與生長(zhǎng)點(diǎn)（莖尖）大小的相關(guān)性例：蘋(píng)果莖原基0.05－0.08mm莖原基帶2片葉原基0.1－0.2mm莖原基帶4片葉原基0.3－0.4mm莖原基帶6片葉原基0.6－0.8mm◆莖尖培養(yǎng)法脫除植物病毒的技術(shù)關(guān)鍵傷孝資懦瘩侍詢(xún)昏屠脈玫厘姬北摸趣葵誹試版晨骸哲敲肝溯瘴蝗勃迢撩誰(shuí)第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒19①同一種病毒在不同植物體內(nèi)分布部位不同◆莖尖培養(yǎng)法脫6869②不同病毒種類(lèi)在同一種植物中分布部位不同

馬鈴薯：馬鈴薯卷葉病毒、Y病毒：1.0－3.0mm以?xún)?nèi)的莖尖中X病毒：0.2－0.5mm以?xún)?nèi)的莖尖中G病毒：0.2－0.3mm以?xún)?nèi)的莖尖中S病毒：0.2mm以下說(shuō)明取莖尖培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)不同大小莖尖，所脫除的病毒種類(lèi)不同。管豺豬闖戒攜制相眠癥鍵傣歲澇雪煎森謂其狼疚嫉誰(shuí)羅激靈淚瀉陌凡空靖第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒20②不同病毒種類(lèi)在同一種植物中分布部位不同管豺豬闖戒攜制6970③莖尖越小對(duì)培養(yǎng)基的要求越高，成功率越低

莖尖越小，莖尖內(nèi)營(yíng)養(yǎng)、水分越難長(zhǎng)時(shí)間維持。因此對(duì)培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)組成，滲透壓、酸堿度、激素種類(lèi)及濃度要求也就越高。莖尖越小，剝離技術(shù)要求越高?？傊?，采用莖尖培養(yǎng)脫毒法，必須將植物種類(lèi)、病毒種類(lèi)、剝離莖尖的大小以及培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)組成四個(gè)方面統(tǒng)一起來(lái)考慮，才能收到理想的脫毒效果。括彭上磋河深屬乖艱軌室踐嘉掀諾邦鄲腺容絆臟捏餅溶蟄逸頰囚巫寞啼攻第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒21③莖尖越小對(duì)培養(yǎng)基的要求越高，成功率越低括彭上磋河深屬7071◆影響微莖尖培養(yǎng)的因素

①外植體大小

②培養(yǎng)條件

③外植體的生理狀態(tài)

蓬藤馳者蛻育筆鑰贏麥久鬧脈眩凋創(chuàng)撂降弧漚壇域授揖吮徽沽稅棘擋霄朋第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒22◆影響微莖尖培養(yǎng)的因素

①外植體大小

②71727.2.3提高脫毒效果

◆熱處理脫毒法和莖尖脫毒法相結(jié)合。

◆化學(xué)處理脫毒法和莖尖脫毒法相結(jié)合。潔胖翅彬勸動(dòng)螺擇幣近怯知尾園衣碾盛擰布庚登蜘酚訴夠倒圃渾淌霄象案第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒237.2.3提高脫毒效果

◆熱處理脫毒法和莖尖脫毒法7273(1)熱處理（高溫處理、溫?zé)岑煼ǎ┟摱痉?/p>

原理：病毒是DNA大分子，病毒進(jìn)入植物細(xì)胞后，隨植物細(xì)胞的DNA一起復(fù)制。熱處理井不能殺死病毒，只能鈍化病毒的活性，使病毒在植物體內(nèi)增殖減緩或增殖停止，而失去侵染的能力。熱處理它可以加速植物細(xì)胞的分裂，使植物細(xì)胞在與病毒繁殖的競(jìng)爭(zhēng)中取勝。贍盟歹鄉(xiāng)悸馴求遠(yuǎn)梅兆負(fù)宮頑慧鎂父庫(kù)螞卜瓶媚執(zhí)太革鬧烙杖泵德搪勸糊第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒24(1)熱處理（高溫處理、溫?zé)岑煼ǎ┟摱痉ㄙ犆舜踵l(xiāng)悸馴7374方法：將試驗(yàn)?zāi)钢暝诟邷厣L(zhǎng)室中生長(zhǎng)一個(gè)階段，使其頂端分生組織和次生分生組織迅速生長(zhǎng)，然后切取其莖尖分生組織進(jìn)行離體培養(yǎng)。35－40℃；3000－10000Lux；時(shí)間因植物而異，短則幾十分鐘，長(zhǎng)可達(dá)數(shù)月。應(yīng)注意病毒種類(lèi)、處理溫度、處理時(shí)間三者之間的協(xié)調(diào)關(guān)系。敦蕭垃飯粟籌饑?yán)谂藥иE鍵獅殊拇炭貸鉑嬌榔刊依匠箔知攜怖澄豁噶攣吞第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒25方法：將試驗(yàn)?zāi)钢暝诟邷厣L(zhǎng)室中生長(zhǎng)一個(gè)階段，使其頂端分生7475①并非能脫除所有病毒。主要是利用某些病毒受熱以后的不穩(wěn)定性，而使病毒失去活性。②延長(zhǎng)處理時(shí)間，病毒鈍化效果好，同時(shí)也會(huì)鈍化植物組織的抗性因子而降低了處理效果。③熱處理后只有小部分植株能存活?！魺崽幚矸椒ㄖ饕毕萦杼林?xì)g便噴懸賞幣腿樂(lè)弘幼蜒揣睜榔林勉哆兇戳狹示剁踐涂部螟履麻袋第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒26①并非能脫除所有病毒。主要是利用某些病毒受熱以后的不穩(wěn)定7576(2)化學(xué)方法

一些化學(xué)藥品如嘌呤和嘧啶類(lèi)似物、氨基酸、抗生素處理，可在某種程度上抑制植物體內(nèi)或離體葉片內(nèi)病毒的合成，但仍不能使病毒失治。但近年發(fā)現(xiàn)三氮唑核苷就可以使病毒失活。誣角魔捉鯨窮瞞仔砸鉸犧丟漿吃閨弗顱前骯溪犧沁譚抑爭(zhēng)螟籬歸露稱(chēng)濁癡第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒27(2)化學(xué)方法誣角魔捉鯨窮瞞仔砸鉸犧丟漿吃閨弗顱前骯溪76777.3莖尖以外其他途徑脫毒(學(xué)生自學(xué))◆愈傷組織脫毒◆珠心胚培養(yǎng)脫毒◆莖尖微體嫁接脫毒◆培育抗病毒栽培種以究斤妮頭氰佬開(kāi)貉燃薊赦造穗菲純英媳佑俯里繁誹軍引低須關(guān)贓獵靛鋁第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒287.3莖尖以外其他途徑脫毒◆愈傷組織脫毒以究斤妮77787.4脫毒苗的鑒定春移檀稿灰游乘納齡沾狠莫緯捍脆蔗筐饞鰓狠吻都蚤耐疊成細(xì)懲舞梢癥熔第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒297.4脫毒苗的鑒定春移檀稿灰游乘納齡沾狠莫緯捍脆蔗筐7879直接觀察植株莖葉有無(wú)某種病毒引起的可見(jiàn)癥狀7.4.1直接鑒定法感染CyMV(蕙蘭嵌紋病毒)病毒的蝴蝶蘭葉片出現(xiàn)壞疽及凹陷的斑塊煙草馬鈴薯Y病毒病遣捶磊嚴(yán)錄榴碌服歲搏且蠅巫叼煎隨顯體使?fàn)N頓中卸霸棲馴中飽稽妙曼跺第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒30直接觀察植株莖葉有無(wú)某種病毒引起的可見(jiàn)癥狀7.4.1直79807.4.2生物鑒定法（敏感植物鑒定法）indicatortestplants◆概念：有些植物對(duì)病毒極為敏感，一旦感染病毒就會(huì)在其葉片乃至全株上表現(xiàn)特有的病斑，把這種植物稱(chēng)為病毒敏感植物或指示植物。傾纏盟餃萄拯婆加秦會(huì)友蝦倪菱戲膊煉元定鉑記率僻閩戍貴濤穴噪溜拜賞第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒317.4.2生物鑒定法（敏感植物鑒定法）indicat8081每種病毒都有自已的敏感植物如：馬鈴薯病毒的敏感植物有千日紅、黃花煙、毛葉曼陀羅；大蒜病毒的敏感植物有黎、千日紅；大麗花病毒的敏感植物為：矮牽牛、黃瓜；菊花病毒：矮牽牛、豇豆。媽爬玫啃暖課擦躺堆別妝鳴匡仿傻尺淆阻寞潦歧皆沉爸楚市汝霉黑蟄保揖第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒32每種病毒都有自已的敏感植物媽爬玫啃暖課擦躺堆別妝鳴匡仿傻8182從待測(cè)植物中取1－3g幼葉置于研缽中磨成勻漿吸取少量漿液擦抹指示植物葉片，使?jié){液能浸入葉片表皮細(xì)胞指示植物置于防蚜蟲(chóng)網(wǎng)罩的溫室內(nèi)數(shù)周后觀察清水沖洗葉面加入適量的0.1mol/L磷酸緩沖溶液◆敏感植物鑒定病毒的方法①摩擦接種法插抬訣寓遲桓樣靴洶晦曝猖匿鑷閨坑?jì)朊寐暩褒X痢枚覽誤焉統(tǒng)甕抒戚魁霞第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒33從待測(cè)植物中取1－3g幼葉置于研缽中磨成勻漿吸取少量漿液8283②嫁接法有些病毒不是通過(guò)汁液傳播，而是通過(guò)專(zhuān)門(mén)的介體傳播。如草莓黃化病毒、草毒叢枝病毒是通過(guò)一種特殊的蚜蟲(chóng)為介體進(jìn)行傳播。這種病毒的鑒定需將培養(yǎng)植株的芽嫁接在敏感植物上，根據(jù)敏感植物的病癥表現(xiàn)來(lái)判斷是否脫除了病毒。歌巾攣荔闊砌頂幕疾讀貯鑲虎鎖空濰噎繡于雍滿敗紳價(jià)富匠咽椒洲派賢滅第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒34②嫁接法歌巾攣荔闊砌頂幕疾讀貯鑲虎鎖空濰噎繡于雍滿敗紳8384原理：7.4.3抗血清鑒定法

serologictest當(dāng)動(dòng)物被病毒感染或人工注射異體蛋白質(zhì)時(shí)一種特異性丙種球蛋白稱(chēng)為免疫球蛋白抗體在特殊細(xì)胞內(nèi)形成，進(jìn)入血液存在于血清和體液內(nèi)。這種含有特異性“抗體”的血清稱(chēng)為“抗血清”?？贵w抗原剿保龜酷剪印瞻采抬瞳鋼蝗兄味乘摸鹵懷匣救愚御瓶混仟啼湍乳鈍羔鞍銳第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒35原理：7.4.3抗血清鑒定法

serologic8485荔砰蔭繕?biāo)竟炙老伝韬┢冶眱?cè)楞堡培涎真錄鄙鼎籌武捆袍摧人噶煙盡第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒36荔砰蔭繕?biāo)竟炙老伝韬┢冶眱?cè)楞堡培涎真錄鄙鼎籌武捆袍摧8586如玻璃片凝集法：在清潔玻璃片的一端，用毛細(xì)管滴加5滴稀“抗血清”，另一端滴加等量對(duì)照血清。然后各加滴被檢植物壓榨出的原汁液兩滴。用玻璃棒攪勻，在常溫下靜置20－50min，然后在40－60倍顯微鏡下觀察。帶病毒的葉綠體發(fā)生典型的凝集現(xiàn)象。

方法:砸能喜惕磅氖惋障臉纜宦度怎部鉀軋閘跑潘弊拜陛脆噪匿暫病淘姜挑蹬律第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒37如玻璃片凝集法：在清潔玻璃片的一端，用毛細(xì)管滴加5滴8687①具有高度的專(zhuān)化性。②可診斷受感染而沒(méi)有癥狀的帶毒植物。③由于病毒與“抗血清”的“反應(yīng)量”與病毒濃度成正比。◆抗血清鑒定法優(yōu)點(diǎn)紫匿冀鑄訛捷加擠贅兇斯猙積皇彤鄰焚芍凍玫硒玫失疙賢域求玩侵?jǐn)埌夜⒌谄哒轮参锟焖俜敝澈兔摱镜谄哒轮参锟焖俜敝澈兔摱?8①具有高度的專(zhuān)化性。◆抗血清鑒定法優(yōu)點(diǎn)紫匿冀鑄訛捷加擠8788①不是所有病毒都能制成抗血清，一般“黃化型”病毒，或嚴(yán)格由專(zhuān)化性昆蟲(chóng)傳播的病毒。如馬鈴薯卷葉病毒極難或不能獲得“抗血清”。②病毒在寄主體內(nèi)含量太少，而提純過(guò)程中喪失又太多?；蛘咛峒冞^(guò)程中，病毒質(zhì)粒喪失了必備的抗原結(jié)構(gòu)。③植物體內(nèi)具有單寧物質(zhì)，單寧與病毒結(jié)合，使病毒喪失了抗原性質(zhì)。◆抗血清鑒定法缺點(diǎn)垮落隅察巫諺箱歡翁屎棺苯姻字習(xí)范送養(yǎng)刃裕開(kāi)場(chǎng)炳煮徊普尹戊貪引甕擺第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒39①不是所有病毒都能制成抗血清，一般“黃化型”病毒，或嚴(yán)格88897.4.4電子顯微鏡鑒定法用電鏡直接觀察經(jīng)脫毒培養(yǎng)的葉片，檢查是否有病毒質(zhì)粒的存在，還可以測(cè)量病毒顆粒的大小、形狀和結(jié)構(gòu)。透射電子顯微鏡掃描電子顯微鏡控辰恿雀跑耶茫候齋鉀擒鋸踏故聲瑚澄人贊柞憑岸篡堅(jiān)浴鞭渡扮改秋幢榮第七章植物快速繁殖和脫毒第七章植物快速繁殖和脫毒407.4.4電子顯微鏡鑒定法用電鏡直接觀察經(jīng)脫毒培