肝炎(研究生)課件

肝炎病毒HepatitisVirus

肝炎病毒為主要感染肝細胞并引起病毒性肝炎的一組病毒，目前公認的人類肝炎病毒至少有5種型別，包括HAV、HBV、HCV、HDV、HEV。它們分屬于不同的病毒科別。近年來還發(fā)現(xiàn)一些與人類肝炎相關的病毒如己型肝炎病毒(HFV)、庚型肝炎病毒(HGV)和TT型肝炎病毒(TTV)等。但其作為人類肝炎病原體的致病性仍有較大爭議。此外，還有一些病毒如：CMV、EB病毒、黃熱病病毒等也可引起肝炎，但不列入肝炎病毒范疇。2022/11/252微生物學教研室

不同型別的肝炎病毒，其生物學性狀各不相同，但從感染者臨床表現(xiàn)和流行病學特征上，大致可分為兩類：

一類由消化道傳播，引起急性感染的甲型肝炎病毒和戊型肝炎病毒，不轉為慢性肝炎或慢性攜帶者。

另一類為經腸道外傳播，能引起急性肝炎、慢性肝炎及慢性攜帶者，并與肝硬化及肝癌相關的乙型、丙型和丁型肝炎病毒。2022/11/253微生物學教研室3、基因組:ss(+)RNA,長7470-7478bp。核酸有感染性5’端非編碼區(qū)，可用于制作探針，進行診斷編碼區(qū)，合成2235個氨基酸的多聚蛋白，切割成衣殼蛋白VP1、VP2、VP3、VP4及病毒復制所需的酶。3’端非編碼區(qū)和polyA尾4、病毒的衣殼蛋白有抗原性(HAVAg)，可誘生抗體。迄今，在世界各地分離的HAV均只有一個血清型。2022/11/255微生物學教研室2022/11/256微生物學教研室5、感染模型與細胞培養(yǎng)

黑猩猩和狨猴對HAV易感，經口或靜脈注射可使動物發(fā)生肝炎，并能在肝細胞漿中檢出HAV。

動物模型的主要用途在于研究發(fā)病、免疫機制及對減毒活疫苗的毒力和免疫效果考核。

HAV也可用細胞培養(yǎng)，然而本病毒增殖非常緩慢，自細胞釋放亦十分緩慢，一般不引起細胞病變和裂解。因此，自標本中分離HAV常需數(shù)周甚至數(shù)月，并很難獲得大量病毒。2022/11/257微生物學教研室二、致病性與免疫性傳染源與傳播途徑

HAV主要通過糞-口途徑傳播，傳染源多為患者。甲型肝炎的潛伏期為15~50d，HAV隨患者糞便排出體外，通過污染水源、食物、海產品(毛蚶等)、食具等傳播而造成散發(fā)性流行或大流行。從糞便排出病毒始于發(fā)病前2周，止于發(fā)病后2~3周。

2022/11/258微生物學教研室2022/11/2510微生物學教研室三、微生物學檢查法

甲型肝炎患者一般不進行病原學分離檢查。1、檢測病毒顆粒：免疫電鏡檢測病毒顆粒，敏感性為105~106個病毒/ml;2、直接檢測抗原：ELISA等，3、檢測核酸：分子雜交，RT-PCR。2022/11/2512微生物學教研室四.防治原則一般預防主動免疫國產:減毒活疫苗（H2株）滅活疫苗已研制成功美國:滅活疫苗被動免疫胎盤球蛋白/丙種球蛋白2022/11/2514微生物學教研室第二節(jié)乙型肝炎病毒

HepatitisBVirus

嗜肝DNA病毒包括HBV、土撥鼠肝炎病毒（WHV）、地松鼠肝炎病毒(GSHV)與鴨乙型肝炎病毒（DHBV）。本科病毒具有類似的毒粒結構、均有嗜肝特性，有明顯的種屬特異性，均為雙鏈環(huán)形DNA，但其雙鏈環(huán)形并不完整，其中有長鏈與短鏈之分。病毒復制需經過一個逆轉錄過程。病毒易引起持續(xù)性病毒感染。

HBV在世界范圍內傳播，估計在全世界有乙型肝炎患者及攜帶者達7億人之多，我國是HBV感染的高發(fā)區(qū)，乙型肝炎患者及攜帶者有1.2億，其中慢性乙型肝炎患者約三千萬。2022/11/2516微生物學教研室一、HBV的形態(tài)和結構

電鏡下可見HBV有三種不同形態(tài)的顆粒，小球形顆粒、管形顆粒、大球形顆粒，后者即是Dane顆粒為完整的HBV顆粒。管形顆粒小球形顆粒Dane顆粒2022/11/2517微生物學教研室Virion/DaneParticleDane顆粒：又稱大球型顆粒，是HBV具有感染性的完整顆粒，呈球形，直徑為42nm。由雙層衣殼和核心構成，外衣殼鑲嵌了HBsAg，內衣殼為HBcAg，核心含有病毒的DNA和DNA聚合酶。2022/11/2518微生物學教研室脂質雙層HBsAg+PreSAg核心結構20面立體對稱27nm內衣殼：HBcAg（HBeAg）核心：雙股環(huán)形DNA，DNA多聚酶外衣殼Dane顆粒42nm7nm2022/11/2520微生物學教研室粘性末端Dane顆粒:管形顆粒:小球形顆粒比例1:120:17302022/11/2521微生物學教研室1．雙鏈環(huán)形DNA，分子量為1.6×106-2.0×106，相當于3200bp。2022/11/2523微生物學教研室2．兩鏈核酸的長度并不相同，長鏈即負鏈（L－），具有固定的長度為3200bp;

短鏈即正鏈（S+），則有可變的長度；約為50%-100%長鏈的長度。雙股中有一段為單股，單股區(qū)的長短在各病毒體不等。長鏈和短鏈DNA的5’端位置是恒定的，而短鏈的3’端可長可短。2022/11/2524微生物學教研室3、粘性末端：兩鏈DNA的5’末端有長達250~300個核苷酸可互相配對故DNA可保持環(huán)形。短鏈5’端起始位點為第1601核苷酸長鏈5’端起始核苷酸為第1826核苷酸兩鏈的5’端互相配對的部分被稱為粘性末端。2022/11/2526微生物學教研室2022/11/2527微生物學教研室4、病毒的粘性末端兩側分別有11個核苷酸組成的順向重復序列（directrepeat，DR），稱為DR1和DR2。

DR1起始于nt1824，序列為5’-TTCACCTCTGC；隔開223個核苷酸后為DR2，起始于nt1590，

5’-TTCACCTCTGC。負鏈的3’

端存在DR1部分,而正鏈的5’

端恰好在正鏈的DR2部分。這一區(qū)域是DNA成環(huán)及病毒復制的關鍵區(qū)，也是易整合的序列。

2022/11/2528微生物學教研室HBVDNA的基因結構

通過分子克隆及序列分析，HBV的DNA基因組較小，僅含約3200個核苷酸，負鏈DNA核苷酸序列含有4個開放讀碼框架（openreadlingframe，ORF）分別稱為S,C,P和X區(qū)。嗜肝DNA病毒基因組在哺乳動物DNA病毒中是最小的一種，其編碼區(qū)有廣泛的重疊，隨讀碼框架起始點的改變同一段病毒核酸可翻譯出幾種多肽，充分擴大其編碼容量，L鏈可以閱讀其長度的1.5倍。

2022/11/2530微生物學教研室2022/11/2531微生物學教研室S區(qū)

S基因前S2基因前S1基因

HBsAg、PreS2、PreS1AgC區(qū)

C基因、前C基因

HBcAg、HBeAg（由兩個基因共同編碼）

P區(qū)（與S區(qū)全部重疊，與X、C區(qū)部分重疊）DNA多聚酶

X區(qū)

HBxAg，可能作為一個轉錄轉化因子，可反式激活細胞內的某些癌基因及病毒基因，與肝癌的發(fā)生有關。具抗原性。

2022/11/2532微生物學教研室SORF：

SORF長度為1185bp，S區(qū)基因包括有3個不同起始密碼的S、preS1、PreS2區(qū)，但共用5’端的終止密碼，分別編碼長短不等的病毒表面抗原多肽。目前認為共有6種多肽—P24、GP27、GP33、GP36、P39與GP42，分別存在于病毒或非完整病毒的顆粒表面。2022/11/2533微生物學教研室C

ORF：

C

ORF長度為639bp，C區(qū)基因有兩個AUG，分別在1814和1901核苷酸，1901位置的AUG是起始密碼，而在1814和1901核苷酸間區(qū)為PreC區(qū)。PreC區(qū)無轉錄終止密碼子，因此自PreC起始密碼子開始轉錄翻譯到C區(qū)基因3’端，獲得的產物為HBeAg的前體，經過修飾加工成為HBeAg。2022/11/2534微生物學教研室PORF：長度為2532bp，是HBV基因組中最長的ORF，約占基因組75%以上，與SORF全部重疊，與CORF和XORF部分重疊。編碼P蛋白。2022/11/2535微生物學教研室XORF：

XORF最小，長度為435-462bp。1、X基因包含重要的調控序列，核心啟動子的調控序列區(qū)位于X基因的末端，它控制著C基因、前C基因及HBV全基因的復制圈。2、X基因在哺乳類嗜肝病毒中高度保守。3、所編碼的HBxAg有反式激活作用。2022/11/2536微生物學教研室HBV基因組特點：1、DNA負鏈中各個ORF均為病毒抗原蛋白編碼序列，基因組中一些順式調控元件均處于各編碼區(qū)內。2、HBV基因組結構緊密，編碼區(qū)間相互重疊，成為編碼效率最高的病毒之一。3、不同毒株間的HBV基因組存在著基因組的多態(tài)性，也是變異率發(fā)生較高的DNA病毒。2022/11/2537微生物學教研室

三病毒的酶HBV核心與其DNA同時存在的有DNA多聚酶1、P區(qū)基因產物，為一堿性蛋白，含有較多組氨酸。分子量約為9×104，需在雙價鎂離子存在條件下起作用，最適pH為7.5，并可在33~41℃起催化作用。2、病毒的DNA多聚酶為內源性的，故可以修補病毒基因組中的短鏈和缺口。2022/11/2538微生物學教研室

3、具有3種酶活性

DNA合成的引物酶活性

有能以RNA為模板合成DNA的逆轉錄酶活性

RNA酶H活性。故成為目前研究抑制病毒復制藥物的靶。4、P區(qū)氨基酸序列有些區(qū)是高度保守的，并與逆轉錄病毒的依賴RNA的DNA多聚酶(RT)、依賴DNA的DNA多聚酶及RNaseH相似。與逆轉錄病毒RT不同之處為逆轉錄病毒需要tRNA作為RT的引物。而嗜肝DNA病毒的逆轉錄酶本身可有一部分作為引物。2022/11/2539微生物學教研室

四病毒的復制①HBV感染肝細胞，通過PreS1、PreS2和HBsAg與肝細胞受體特異吸附、結合并穿人肝細胞內，在胞質中脫去衣殼；②HBVDNA進入核內，在HBVDNA多聚酶作用下補全雙鏈缺口，形成超螺旋的共價閉合環(huán)狀DNA(covalentlyclosedcircularDNA，cccDNA)；2022/11/2540微生物學教研室③在胞核中細胞RNA多聚酶Ⅱ作用下，以負鏈DNA為模板轉錄形成0.8kb、2.1kb、2.4kb和3.5kb的4種mRNA；④在胞質中，

0.8kbmRNA編碼HBxAg，

2.1kbmRNA編碼PreS2和HBsAg，

2.4kbmRNA編碼PreSl、PreS2和HBsAg。

3.5kbmRNA既是HBV前基因組RNA(pregenomicRNA，PgRNA)，又可編碼P蛋白、HBcAg以及HBeAg前體蛋白；2022/11/2541微生物學教研室

⑤病毒的前基因組、蛋白引物及DNA多聚酶一起進入組裝好的病毒內衣殼中。在病毒DNA多聚酶的逆轉錄酶等活性作用下，自DR區(qū)開始，以3.5kb前基因組RNA為模板，逆轉錄全長的HBVDNA負股。在負股DNA合成過程中，前基因組在RNA酶H作用下RNA鏈被水解而消失，由DNA多聚酶再合成互補的正鏈DNA；2022/11/2542微生物學教研室

⑥新轉錄的正負鏈HBVDNA成為新的雙股部分環(huán)狀DNA，與胞質中的HBcAg形成核衣殼，進入內質網中的高爾基體，獲得糖蛋白包膜后裝配成完整病毒顆粒，釋放于肝細胞外，重新感染其他肝細胞。

2022/11/2543微生物學教研室2022/11/2544微生物學教研室

HBV復制過程有逆轉錄過程，與逆轉錄病毒相似。病毒的DNA可整合于靶細胞的染色體中。已知整合區(qū)約有50%以上為負股的5’

末端區(qū)。

S基因可通過2.1kbRNA為信使RNA而轉譯HBsAg，有的HBV感染者中無病毒復制，但都長期產生HBsAg，HBsAg產生的量可遠遠超過病毒體數(shù)。

2022/11/2545微生物學教研室2022/11/2546微生物學教研室病毒的轉錄與編碼的蛋白（一）病毒轉錄的mRNA2022/11/2547微生物學教研室2022/11/2548微生物學教研室

在HBV感染過程中至少有4種未拼接過的mRNA轉錄產物。

0.8kbmRNA，

2.1kbmRNA2.4kbmRNA3.5kbmRNA

每個mRNA均含有起始密碼ATG2022/11/2549微生物學教研室2.1kbmRNA：長鏈DNA轉錄，2.1kbmRNA的5’端起自PreS2編碼區(qū)上游約20個bp，3’端終止于C區(qū)的起始點。以1：4的比率合成外膜中、主蛋白。2.4kbmRNA：

3’端與2.1kbmRNA相同，含編碼大、中和主蛋白的序列，但其主要的編碼產物為外膜大蛋白。2022/11/2550微生物學教研室3.5kbRNA：前基因組RNA（PgRNA)

5’端起始點為PreC區(qū)，覆蓋了整個病毒基因組，還另加約100個核苷酸長。3’端終止于C區(qū)的起始點。5’端不是均一的。起始于PreCATG上游的翻譯產生前核心蛋白，經過修飾加工后成為e蛋白。起始于PreCATG與coreATG之間的mRNA是逆轉錄的模板，也是合成核心抗原及多聚酶產物的模板。2022/11/2551微生物學教研室0.8kbmRNA

有不同的5’端，但3’端與2.1kbmRNA、3.5kbmRNA相同。編碼HBxAg。在病毒復制活躍的條件下，0.8kb轉錄物基本上不會出現(xiàn)。2022/11/2552微生物學教研室（二）編碼的蛋白病毒包膜蛋白（HBsAg）由3種蛋白組成：

①主要蛋白由S基因編碼，由226個氨基酸組成分子量為24×103及27×103（后者為糖基化蛋白）；②中等分子S蛋白由S及PreS2基因區(qū)編碼，由281個氨基酸組成，分子量為33×103及36×103（前者帶一個糖基，后者帶兩個糖基）；③大分子S蛋白由S、PreS2、PreS1基因區(qū)編碼，由389或400個氨基酸組成，不同亞型大分子S蛋白的分子量不同。2022/11/2553微生物學教研室3種蛋白在不同顆粒表面存在的情況不同

●

Dane顆粒與管形顆粒的包膜蛋白組成相同。每一個病毒體含300-400個的主要蛋白與40-80個分子的中等分子S蛋白和大分子S蛋白；●小球形顆粒：在病毒復制者其包膜上大分子S蛋白顯著低于Dane顆粒上的大分子S蛋白；無病毒復制者中全是主要蛋白，僅有1%的中等分子S蛋白2022/11/2554微生物學教研室粘性末端據(jù)Bend與Hall報告，小球形顆粒、管形顆粒、Dane顆粒三者數(shù)量比例大約為1730：120：l。2022/11/2555微生物學教研室2022/11/2556微生物學教研室

S區(qū)及其編碼產物S區(qū)基因編碼3種分子量不同的產物

SmallproteinHBsAgMiddleproteinHBsAg+PreS2LargeproteinHBsAg+PreS2+PreS1

2022/11/2557微生物學教研室1、表面抗原（HBsAg）

1）HBsAg(相當于HBV病毒的包膜)，是由糖基化的gp27和非糖基化的gp24亞單位，通過二硫鍵連接形成二聚體蛋白。是決定病毒吸附至易感細胞的成分。2）HBsAg具有抗原性，為中和抗原，但抗原性較弱?？梢饳C體產生特異性有保護性的抗-HBs抗體，也是制備疫苗的最主要成分。2022/11/2558微生物學教研室3）HBsAg有不同的亞型，各亞型均有共同抗原表位（稱為a抗原），此外還有二組互相排斥的亞型抗原表位（d/y和w/r），按不同的組合，構成亞型。HBsAg亞型的分布有明顯地區(qū)差異，并與種族有關。我國漢族以adr多見，少數(shù)民族多為ayw。因有共同的a抗原，故制備疫苗時各亞型間有交叉保護作用。4）HBsAg大量存在于感染者血中，因此是檢查受HBV感染的主要標志。2022/11/2559微生物學教研室2022/11/2560微生物學教研室前S抗原：

1）PreS1及PreS2抗原具有吸附于肝細胞受體的表位，可促進病毒吸附至肝細胞表面。前S區(qū)可能與嗜肝DNA病毒嚴格的種屬特異性有關。2）前S抗原是病毒復制的指標，preS1的存在與病毒復制的關系甚為密切，比preS2與病毒復制的正相關性更為明顯。3）前S抗原的免疫原性比HBsAg強，刺激機體產生的抗體在清除循環(huán)中的病毒、阻止吸附、抑制病毒感染肝細胞等免疫防御中有重要意義。

2022/11/2561微生物學教研室2、核心抗原（HBcAg）

1）HBcAg中主要多肽的分子量為19×103—22×103

這一多肽的C端有近40個氨基酸中重復出現(xiàn)精氨酸，其間由脯氨酸間隔。當HBcAg在細胞內達到一定量后，這一結構可取代細胞中組蛋白，而使宿主細胞的正常基因表達發(fā)生紊亂。2）HBcAg存在于Dane顆粒核心結構的表面，為內衣殼成分。因其外表為HBsAg所覆蓋，不易在血循環(huán)中檢出。2022/11/2562微生物學教研室3）HBcAg抗原性強，能刺激機體產生抗HBc抗體?？笻BcIgG在血中持續(xù)時間較長，為非保護性抗體；而抗HBcIgM的存在則常提示HBV處于復制狀態(tài)。4）HBcAg定位于感染細胞核內，也可在細胞漿與膜上表達。HBcAg在感染的肝細胞表面表達，是CTL識別并清除HBV感染細胞的靶抗原之一。2022/11/2563微生物學教研室3、e抗原（HBeAg）1）是由PreC及C基因編碼，整體轉錄及轉譯后成為

HBeAg，HBeAg與HBcAg雖有部分相同的核苷酸序列，但各自還有特異的抗原性。2）HBeAg為可溶性蛋白質，可自感染肝細胞分泌入血循環(huán)中。

●HBeAg與Dane顆粒出現(xiàn)的時間平行；

●與DNA多聚酶的消長基本一致，故HBeAg已作為體內有HBV復制及血清具有強感染性的一個指標。

同時也是母嬰傳播的免疫學指標。2022/11/2564微生物學教研室HBeAg2022/11/2565微生物學教研室3）HBeAg可刺激機體產生抗體，此抗體對HBV感染有一定的保護作用。

◆但變異的毒株C區(qū)基因可發(fā)生點突變，在PreC區(qū)出現(xiàn)終止密碼子，因不產生HBeAg。

對病毒而言：HBV可以逃逸機體針對HBeAg的免疫殺傷作用，不能被抗-HBe及相應的細胞免疫所識別。

對抗HBV治療而言：血清中HBeAg由陽性轉為陰性并不意味著HBV復制的停止及致病作用減弱。變異株可在抗-HBe陽性的情況下仍大量增殖。2022/11/2566微生物學教研室HBxAgX蛋白由X基因區(qū)編碼，由145-154個氨基酸組成，分子量為24×103-28×103，其抗原性很弱。具反式激活作用?？煞词郊せ頗BV增強子和多個啟動子，促進S、C蛋白的表達及核心顆粒的形成。

HBxAg反式激活的核苷酸序列很廣泛，涉及多種病毒，如在Hela細胞中的HIVLTR等；有數(shù)種細胞的調控因子也可被HBxAg反式激活，如MHCⅠ類抗原基因等。2022/11/2567微生物學教研室六病毒分型與變異（一）病毒分型血清型：根據(jù)HBsAg抗原性的差異，各亞型均有共同抗原表位（稱為a抗原）及二組互相排斥的亞型抗原表位（d/y和w/r），按不同的組合，構成HBsAg9個亞型，即adrq+，adrq-adw

2、adw

4、ayr，ayw1、ayw2、

ayw3、

ayw4

。

HBsAg亞型的分布有明顯地區(qū)差異，并與種族有關。我國漢族以adr多見，少數(shù)民族多為ayw。2022/11/2568微生物學教研室基因型是指按照HBV核酸序列的差異程度進行分型。HBV基因型可分為A～H共8個基因型。不同地區(qū)流行的基因型不同，美國和西歐主要是A型，我國及亞洲地區(qū)主要流行的是B型和C型。

HBV基因型與血清型的對應關系大致為A型與adw，B型與adw，C型與adr、adw和ayr，D型與ayw,adr。HBV基因型比血清型能更精確地提供HBV基因變異的信息。2022/11/2569微生物學教研室

(二)病毒變異

HBV有逆轉錄的復制過程，其基因變異較一般DNA病毒為高。HBV在宿主體內時，在各種因素的選擇壓力下可發(fā)生突變。在宿主體內，突變是HBV適應宿主細胞環(huán)境和抵抗宿主免疫保護的一種自然選擇，可發(fā)生于自然感染過程中，也可在乙肝免疫接種、特異性免疫治療或干擾素治療的刺激下發(fā)生。2022/11/2570微生物學教研室

在HBV的4個ORF區(qū)(S區(qū)、P區(qū)、C區(qū)和X區(qū))中均可發(fā)生變異，變異呈多樣性，其后果是：①突變株可逃避免疫，使自然感染或疫苗誘導產生的抗-HBs不能中和突變株而使感染繼續(xù)存在；②突變株在體內復制，但常規(guī)檢測方法不能檢出，可逃避診斷；③突變株對藥物產生抵抗性，可逃避治療。HBV基因突變無疑增加了乙肝預防、診斷和治療的復雜性。

HBV突變可能是病毒傳播、致病和導致嚴重轉歸的重要因素。目前HBV基因組變異的研究主要集中在以下幾個方面：2022/11/2571微生物學教研室1．前C／C區(qū)變異如前C區(qū)1896位核苷酸發(fā)生

GA的點突變，使原來編碼色氨酸(TGG)變成終止密碼，提前終止HBeAg的表達，故此時HBeAg陰性并不意味HBV的清除或復制水平的減低。臨床上表現(xiàn)為HBeAg陰性，而病情處于活動狀態(tài)的慢性乙型肝炎。又如前C區(qū)1862位核苷酸由GT，使17位氨基酸由纈氨酸變?yōu)楸奖彼?，其結果是HBeAg前體被信號酶裂解。HBeAg前體在肝細胞內過量積聚，成為細胞毒性T細胞(CTL)的靶抗原而受過度的免疫攻擊，使肝細胞大量壞死而致重癥肝炎。2022/11/2572微生物學教研室2、前S／S區(qū)變異S區(qū)第145位氨基酸由甘氨酸變?yōu)榫彼?，可以引起HBsAg“a”決定族的抗原性發(fā)生改變，明顯低于野毒株。從而導致免疫逃逸及疫苗接種失敗等現(xiàn)象，或者引起血清中同時出現(xiàn)HBsAg和抗-HBs。此外，在編碼“a”決定簇的基因區(qū)前，在S基因編碼的第122～124位之間出現(xiàn)插入變異，則可發(fā)生HBsAg陰性的HBV變異株感染。2022/11/2573微生物學教研室

3．X區(qū)與P區(qū)變異自然存在的P基因單位點錯義突變致使前基因組RNA無法包裝到核心顆粒，從而造成HBV復制缺陷。2022/11/2574微生物學教研室動物模型與細胞培養(yǎng)

黑猩猩是對HBV最敏感的動物，常應用來進行HBV的致病機制研究和疫苗效價及安全性檢測。南非學者（1976）報道了從一個HBsAg陽性原發(fā)性肝癌組織建立的細胞系（PLC/PRF/5）中找到HBsAg的復制。但未見到Dane顆粒。至今HBV尚不能在常規(guī)細胞系中分離及培養(yǎng)，目前采用的細胞培養(yǎng)是病毒DNA轉染細胞。將HBVDNA導入人肝癌細胞中，病毒的基因可整合復制，在細胞中表達HBsAg、HBcAg并分泌HBeAg。有些細胞株還可持續(xù)地產生Dane顆粒。這些細胞培養(yǎng)系統(tǒng)可用于抗HBV藥物的篩選、疫苗制備及HBV致病機制的研究等。2022/11/2575微生物學教研室加熱60℃10小時；煮沸100℃，10min高壓滅菌121℃，20min干烤160℃，2h0.5%過氧乙酸、3%漂白粉浸泡30min-20℃20年、37℃7天仍有傳染性。強!抵抗力2022/11/2576微生物學教研室2022/11/2577微生物學教研室八、致病性與免疫性（一）傳染源

HBV主要的傳染源是患者

無癥狀HBsAg攜帶者。

0.00004ml含病毒血液足以使人感染。HBsAg陽性患者血液中HBsAg濃度可達1012~1014/ml。2022/11/2578微生物學教研室（二）傳播途徑

1、血液、血制品傳播主要通過醫(yī)源性方式，如輸血、注射、外科或牙科手術、針刺等。2、母嬰傳播人群中HBsAg攜帶者中約有1/3來自母嬰傳播（我國至少有3千萬HBsAg攜帶者源于此）。主要是圍產期感染及分娩過程感染，宮內傳播（即通過胎盤感染）和產后感染新生兒。3、性接觸傳播

HBsAg陽性男性精液肯定有傳染性，動物實驗已證實。4、其它傳播方式如當口腔粘膜（包括牙齦）破損時，有可能經口感染，通過昆蟲也可能傳播。2022/11/2579微生物學教研室（三）致病機理L.CV.Ag1.肝細胞膜表達新抗原引起免疫攻擊自身AgLSPAg-Ab-CADCCMTcNK2022/11/2580微生物學教研室2.ICsediment→typeⅢallergy肝外沉積:腎小球腎炎/關節(jié)炎肝內沉積:急性肝壞死(暴發(fā)型肝炎)2022/11/2581微生物學教研室3.HBVDNA–LiverCellDNA↓integrationLiverCelltransform2022/11/2582微生物學教研室4.HBVvariation5.HBVproteinsHBcAgaccumulateinnucleus:cytoclasis/fusionpreSpro.accumulateinplasm:injureL.C.2022/11/2583微生物學教研室6.HBV(-)immunocompetence(-)IL-2(-)IFN(-)HLA-Iexpress→CTLeffect↓infantinfection2022/11/2584微生物學教研室感染HBV的臨床類型Tc免疫正?！齥illHBV-cell↓Ab清除游離HBV↓acuteinfection

(90%)Tc免疫↓V.變異↓killfaulty↓Ablack↓chronicinfection

(10%)Tc免疫↑V-Cell↑↓livercellsnecrosis↓暴發(fā)性肝炎無免疫HBV耐受↓不殺傷靶細胞↓Agcarrier(12%)2022/11/2585微生物學教研室HBV感染機體，可刺激機體產生一系列的抗體與細胞免疫。1、抗HBs是肯定有中和病毒作用的抗體。2、對HBcAg的CTL。在清除HBV感染中有一定作用。3、抗PreS2及抗PreS1可能通過阻斷HBV吸附于肝細胞的表面受體而起作用。4、抗-HBe可能通過與肝細胞表面表達的HBeAg結合后，通過補體介導而參與破壞病毒感染的肝細胞。5、抗HBc無直接保護作用，因乙型肝炎患者多數(shù)均有高效價的抗-HBc。2022/11/2586微生物學教研室HBV與原發(fā)性肝癌

雖然目前尚無HBV致肝癌的直接證據(jù)．但在土撥鼠中發(fā)現(xiàn)，當初生時即感染上撥鼠肝炎病毒(WHV)，經3年飼養(yǎng)后100％發(fā)生肝癌，而未感染WHV的動物無一只發(fā)生肝癌。在人群中的流行病學研究顯示，HBsAg攜帶者較無HBV感染者，發(fā)生肝癌的危險性高217倍。因X蛋白(HBxAg)可反式激活癌基因，可能是HBV致癌的起動因子，需經一系列過程導致肝癌的發(fā)生。

2022/11/2587微生物學教研室Maupas等就HBV與原發(fā)性肝癌的密切關系作了以下論證：①乙型肝炎傳染形成高度地方性的區(qū)域與原發(fā)性肝癌流行率高的地區(qū)，在地理上有相關性；②在地方性與非地方性區(qū)域，男性HBsAg慢性攜帶者中發(fā)生原發(fā)性肝癌的危險是相對恒定的。在此種人群中，原發(fā)性肝癌的年死亡率在250-500/10萬人。粗略估計全世界HBsAg慢性攜帶者約1.75億，原發(fā)性肝癌的年發(fā)生率為35萬例。這就指出與HBV相關的原發(fā)性肝癌是在全世界人口中較為流行的癌癥之一；③HBV感染可先于并經常伴隨原發(fā)性肝癌的發(fā)生；2022/11/2588微生物學教研室④原發(fā)性肝癌常發(fā)生于與乙型肝炎病毒有關的慢性肝炎或肝硬化人群；⑤在原發(fā)性肝癌患者取出的組織中存在HBV的特異性DNA及抗原；⑥有些原發(fā)性肝癌細胞系已能在培養(yǎng)中產生HBsAg，并已證明HBV的DNA已能整合到這些細胞的基因組中。此外，含有HBV相似的生物化學、生物物理特性，它在其宿主可誘發(fā)肝硬化及原發(fā)性肝癌。在中國和美國的北京鴨（Anasdomesticus）中已分離出一種相似的病毒。2022/11/2589微生物學教研室但對上述資料解釋仍有不同觀點：①HBV能引起致癌或促癌作用，須配合其它如遺傳、內分泌、免疫與環(huán)境因素而導致肝癌；②肝癌是與HBV無關的因素引起，但這些癌細胞可能對HBV特別易感，以致持續(xù)攜帶病毒。2022/11/2590微生物學教研室

九、微生物學檢查法

●樣品的采集

1、血液：用于抗原抗體及核酸檢測，病毒分離

2、組織：病毒分離、核酸或抗原檢測

3、唾液：病毒分離、核酸或抗原檢測

4、乳汁：病毒分離、核酸或抗原檢測

5、陰道分泌物、精液：病毒分離、核酸或抗原檢測所有標本均-20℃保存。2022/11/2591微生物學教研室●病毒的分離培養(yǎng)（1）動物實驗：家鴨，土撥鼠等（2）細胞實驗：人肝細胞系、原代肝細胞培養(yǎng)●實驗室診斷方法（一）HBV抗原抗體的檢測

HBV的血清標志物（HBV–M）即三大抗原抗體系統(tǒng)，是判斷HBV感染狀態(tài)主要的、常用的指標。常用ELISA和化學發(fā)光法。各項HBV–M的意義是：2022/11/2592微生物學教研室◆HBsAg陽性：1、表示感染過HBV2、急性乙型肝炎或慢性肝炎，無癥狀攜帶者。

3、與HBV相關的肝硬化和原發(fā)性肝癌◆抗-HBs陽性：1、已恢復或痊愈

2、注射后疫苗有免疫力，

3、隱性感染的健康人，產生了免疫力。2022/11/2593微生物學教研室另外，PreS抗原與病毒復制有關，其含量變化與外周血中HBVDNA的含量成正比，出現(xiàn)早，消失快，因此PreS抗原的檢出可作為HBV復制的指標。若抗-PreS出現(xiàn)于急性乙肝恢復期的早期，表示病毒正在或已被清除，預后好?？?PreS存在時間短暫，時間為6-12個月，若抗-PreS遲遲不出現(xiàn)，則預后較差。2022/11/2594微生物學教研室◆抗-HBcIgM陽性：

1、提示仍有病毒復制，

2、是HBV急性感染和慢性活動性肝炎的重要指標。◆抗-HBcIgG陽性：主要見于恢復期或慢性感染，可伴隨感染者終生存在。2022/11/2595微生物學教研室◆HBeAg陽性：

1、表示病毒復制，患者血液有傳染性，同時也是母嬰傳播的免疫學指標。

2、急性乙肝的輔助診斷

3、判斷預后的指標◆抗-HBe陽性：表示機體已獲得一定的免疫力，病毒復制減少或停止，傳染性減弱或消失。（出現(xiàn)變異株者例外）。2022/11/2596微生物學教研室（二）、血清HBVDNA檢測

DNA陽性（大于103

拷貝/ml）表示病毒處于復制狀態(tài)，患者血液有傳染性，母嬰傳播的免疫學指標。方法：

1、PCR檢測HBVDNA2、核酸雜交檢測HBVDNA

兩對半檢測的結果分析（表）兩對半檢測的應用乙型肝炎的特異性診斷、篩選輸血員、流行病學調查、預后參考。

2022/11/2597微生物學教研室HBsAgHBeAg抗HBs抗HBe抗HBc

結果分析

+————HBV感染或無癥狀攜帶者

++———急性或慢性乙肝，或無癥狀攜帶者++——+急性或慢性乙肝（傳染性強，“大三陽”）

+—-++急性感染趨向恢復（“小三陽”）——+++/—既往感染恢復期————+既往感染或“窗口期”——+——既往感染或接種過疫苗2022/11/2598微生物學教研室十、防治原則應針對傳播途徑采取綜合性預防措施：

1、嚴格篩選輸血員，對血液制品嚴格檢查。2、防止醫(yī)源傳播，病人血液、血清分泌物以及可能有

HBV污染的器具、物品應進行嚴格消毒，醫(yī)用器械均須嚴格滅菌。3、對具有傳染性的患者進行隔離治療，對無癥狀HBV

攜帶者應隨訪觀察。4、乙肝疫苗優(yōu)選接種對象：2022/11/2599微生物學教研室新生兒、醫(yī)務人員。密切接觸HBsAg陽性者，而本身又無免疫力者。高危人群：如血液透析、腎移植者。

第一代為血源疫苗第二代為基因工程疫苗第三代為多肽疫苗或DNA疫苗。5、應急預防措施，注射高效價抗-HBs（HBIg）。

2022/11/25100微生物學教研室第三節(jié)丙型肝炎病毒

丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus，HCV)于1989年方被命名，1991年被歸屬于黃病毒科，過去被稱為腸道外傳播的非甲非乙型肝炎病毒。雖然丙型肝炎作為疾病早就被發(fā)現(xiàn)，但因本病毒不能在體外培養(yǎng)，在血流中的含量又很少，約100個病毒體／ml。故對HCV的認識主要根據(jù)黑猩猩動物實驗及分子生物學技術研究所得的結果。2022/11/25101微生物學教研室1、HCV是一類有包膜結構的單正鏈RNA病毒。病毒體呈球形，大小為40-60nm，包膜蛋白厚7nm，有刺突結構。2、HCV對氯仿、甲醛、乙醚等有機溶劑敏感。

可感染黑猩猩并在體內連續(xù)傳代，引起慢性肝炎。一、生物學特性2022/11/25102微生物學教研室二、病毒的基因結構

HCV基因組長度約9.5kb，由9個基因區(qū)組成自5，端開始，依次為5，端非編碼區(qū)、核心蛋白區(qū)(core，C區(qū))、包膜蛋白-1區(qū)(El區(qū))、包膜蛋白-2/非結構蛋白-1區(qū)（E2/NS1區(qū)）、非結構蛋白-2區(qū)(NS2區(qū))、非結構蛋白-3區(qū)(NS3區(qū))、非結構蛋白-4區(qū)（NS4區(qū)）、非結構蛋白-5區(qū)(NS5區(qū))和3’端非編碼區(qū)。其中C區(qū)和El區(qū)為病毒結構蛋白編碼區(qū)，即編碼病毒的衣殼及包膜蛋白。2022/11/25103微生物學教研室

5，端非編碼區(qū)的核苷酸序列保守性強，可用于基因檢測診斷。El、E2/NS1區(qū)基因易發(fā)生變異，使包膜蛋白的抗原性改變而不被原有的抗包膜抗體識別，使病毒得以持續(xù)存在，這可能是HCV易引起慢性丙型肝炎的原因之一。C、NS3及NS4、NS5區(qū)基因的表達產物，可用于檢測患者血清中的抗-HCV。2022/11/25104微生物學教研室HCV基因排列順序依次為：5’UTR-C-El—E2-p7-NS2-NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B-UTR3’。由5’端非翻譯區(qū)(untranslatedregion，UTR)、一個單一開放讀碼框(ORF)和3’端非翻譯區(qū)組成。(3010~3030aa)2022/11/25105微生物學教研室

5’NCR由319~341個核苷酸組成，含有多個6~7個核苷酸組成的重復序列，其5’端前22個核苷酸形成一發(fā)夾結構，是病毒復制酶的識別部位；5’端非翻譯區(qū)極少變異，為保守的基因序列，參與蛋白翻譯的啟動。目前作為基因診斷的靶區(qū)域。

3’端還有兩處回文結構。3’非翻譯區(qū)有一個高度保守的98個氨基酸保守區(qū)。2022/11/25106微生物學教研室HCV基因組僅有一個開放讀碼框，ORF編碼一條約3008～3037個氨基酸的多蛋白前體，該前體蛋白在宿主細胞內分別經宿主細胞基因及病毒基因編碼的蛋白酶切割后，至少加工成10種蛋白。如病毒結構蛋白：核心蛋白(C)、包膜蛋白(El、E2)、P7蛋白及病毒的非結構蛋白：NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B。2022/11/25107微生物學教研室三、病毒結構蛋白與非結構蛋白

(一)病毒的結構蛋白2022/11/25108微生物學教研室1．核心蛋白C

病毒的核心蛋白，分子量23000Da。編碼C蛋白的基因區(qū)位于N端，由573個核苷酸組成，編碼191個氨基酸。加工成熟的C蛋白約有172～182個殘基，在病毒株間相對保守。

◆

C蛋白構成病毒核衣殼蛋白，◆具有很強的抗原性，可誘發(fā)多數(shù)感染者在感染早期產生抗核心抗體，且持續(xù)時間長。◆另外，C蛋白還參與調控病毒基因轉錄、細胞增殖與死亡、脂類代謝等，并在病毒感染的免疫耐受和免疫抑制中起重要作用。2022/11/25109微生物學教研室2．包膜蛋白El和E2El和E2是位于病毒包膜上由病毒編碼的糖蛋白。分子量分別為33000Da(gp33)

和70000Da(gp70)。E蛋白變異性大，疏水性強，抗原性弱。El和E2可相互作用形成非共價的異源二聚體。E蛋白與病毒的侵襲力有關，病毒感染時借助El和E2與宿主細胞表面的受體相結合，侵染細胞。3．p7p7是從E2蛋白上切割下來的一段含有63個氨基酸的多肽，是一種小的跨膜蛋白?？赡軈⑴c病毒的組裝和膜運輸。2022/11/25110微生物學教研室(二)病毒的非結構蛋白

1．NS2

由NS2C末端的1/2、NS3N末端的1/3共同組成一種依賴Zn2+的蛋白酶，在宿主細胞蛋白的調控下先將NS2-NS3復合物從聚蛋白前體上切割下來，再將NS2與NS3分割開。NS2-NS3蛋白酶在HCV基因組的復制過程中起重要作用。2022/11/25111微生物學教研室

2．NS3

基因位于丙型肝炎病毒全基因組序列約3300～5200nt位點，編碼600多個氨基酸，分子量略大于60kD，NS3N末端與NS4A特定部位形成NS3-NS4A復合體，具有絲氨酸蛋白酶活性。

◆絲氨酸蛋白酶主要負責切割HCV聚蛋白上的NS3／NS4A、NS4A／NS4B、NS4B／NSSA和NS5A／NS5B連接位點。

◆

NS3蛋白具有很強的抗原性，在大多數(shù)HCV感染者體內都會產生較高滴度的特異性抗體。NS3基因在HCV不同型和亞型中的變異性較大。2022/11/25112微生物學教研室

3．NS4A

由54個氨基酸組成的小蛋白質?？梢孕纬搔?螺旋。◆參與NS3-NS4A蛋白酶在細胞膜上的錨定過程。

◆NS4A蛋白的中間結構域還參與調節(jié)NS3的絲氨酸蛋白酶和解旋酶活性，主要為負調節(jié)作用。2022/11/25113微生物學教研室4.NS4B

為分子量27kD的疏水蛋白。目前推測其作為NS3-NS4A蛋白酶的一種輔助因子參與HCV基因組的復制和翻譯過程。

5．NS5A

為高度磷酸化的非結構蛋白，分子量為58kD。目前證實有很多激酶參與了NS5A的磷酸化過程，而且NS5A的磷酸化水平在HCV基因組的復制和翻譯過程中起調節(jié)作用。NS5A存在干擾素敏感性決定位點，與干擾素治療效果有關。

6．NS5B

是HCV復制所必需的RNA依賴的RNA聚合酶。由591個氨基酸組成，在HCV復制過程起著至關重要的作用。2022/11/25114微生物學教研室抗體臨床意義C（c22）HCV感染后出現(xiàn)很早，陽性率也很高，在HCV的檢測中發(fā)揮重要作用NS3（c33c）抗原的免疫原性很強，相應的抗體滴度也高，

HCV感染后出現(xiàn)很早，同C區(qū)抗體一樣在HCV的檢測中發(fā)揮重要作用NS4（c100）HCV感染后出現(xiàn)延遲，持續(xù)陽性可能與疾病的慢性化有關NS5HCV感染后出現(xiàn)較早，可用于急性感染診斷2022/11/25115微生物學教研室四、病毒的基因分型

HCV基因組具高度的遺傳變異性，根據(jù)編碼病毒RNA聚合酶的NS5B基因區(qū)核酸序列同源性分析，將HCV分為6個主要基因型。且HCV基因型分布存在明顯的地理差異，在亞洲，HCV主要有l(wèi)、2、6型，中國以1b型為主，也存在2a、2b、3b型感染及混合感染。由于病毒易發(fā)生變異，HCV在體內呈準種分布（5%），基因組由優(yōu)勢株及一群密切相關但又不同的變異株構成，這一病毒群稱為準種。HCV準種可能是影響感染轉歸的重要因素。

2022/11/25116微生物學教研室

目前對HCV的基因分型可通過核苷酸測序分析、PCR-限制性片段長度多態(tài)性分析(RFLP)和型特異探針雜交等方法對HCV5’端非編碼區(qū)和其相鄰的核心區(qū)進行分析，5’非編碼區(qū)的分析主要用于型的鑒別，核心區(qū)的分析主要用于亞型的鑒別。HCV核心區(qū)同源率若大于94％，為同一亞型；介于89％和94％之間為同一型的不同亞型；同源率小于89％為不同型。2022/11/25117微生物學教研室HCV3/4無癥狀為亞臨床型感染1/4有癥狀為臨床型感染1/3為黃疸型2/3為無黃疸型50%轉為慢性10%-20%可發(fā)展為肝硬化或肝癌。慢性丙肝六、致病性與免疫性

世界約有1.7億感染者，我國人群抗體陽性率約為1%-3%，母嬰傳播率為3%-6%。傳播途徑

HCV主要通過輸血傳播(43%)臨床表現(xiàn)2022/11/25118微生物學教研室致病機制

1、HCV長期在肝細胞內復制，引起肝內淋巴細胞浸潤及肝細胞壞死。

2、免疫復合物沉積。

3、CTL免疫病理反應

：殺傷肝細胞、誘導肝細胞凋亡。免疫性

丙型肝炎患者恢復后，僅有低度免疫力。迄今未檢出HCV有中和抗體。2022/11/25119微生物學教研室HCV感染慢性化機制基因易發(fā)生突變感染多為低水平感染在肝細胞和肝外組織均有病毒復制病毒持續(xù)與機體免疫功能紊亂相關自身免疫反應的誘生參與肝細胞的損傷2022/11/25120微生物學教研室HCV與HBV不同點:感染類型:隱性感染者更多臨床類型:更易轉為慢性/肝硬化/肝癌致病機制:HCV-肝內復制-直接損害肝細胞免疫特點:抗原性弱/變異多→免疫耐受/持續(xù)感染/無中和抗體/無疫苗2022/11/25121微生物學教研室七、微生物學檢查法(一)HCVRNA檢測

急性感染期：患者感染HCV后1-3周，外周血清中即可檢測出HCVRNA，HCVRNA出現(xiàn)早于HCV抗體，在急性期只有50％~70％的患者抗-HCV陽性，3個月后90％患者抗-HCV陽性。

慢性感染期：HCVRNA持續(xù)陽性6個月以上為慢性感染。目前HCVRNA的檢測主要有熒光PCR和PCR-ELISA方法。大于103拷貝/ml為陽性。2022/11/25122微生物學教研室

(二)HCV抗體的檢測

HCV抗體檢測分為篩選試驗和確認試驗。篩選試驗主要采用ELISA方法，確認試驗采用重組免疫印跡試驗(recombinantimmunoblotassay，RIBA)。2022/11/25123微生物學教研室1．ELISA由于HCV感染人體后機體所處的免疫狀態(tài)和感染階段不同，機體針對病毒特定蛋白產生的特異性抗體出現(xiàn)的時間也不同，HCV結構區(qū)和非結構區(qū)的每一片段抗原都有不同的血清學診斷意義。目前廣泛使用的抗HCV-IgGELISA第三代試劑，是將HCV的C、NS3、NS4和NS5作為抗原，檢測患者血清或血漿中的抗HCV-IgG。這種方法有較好的敏感性，但可能會出現(xiàn)假陽性。對測定比值不高的陽性結果應做確認實驗加以證實。2022/11/25124微生物學教研室2．重組免疫印跡試驗(RIBA)選用重組抗原c100p，c33c，c22p，NS5，以及兩個質控對照超氧化物歧化酶(SOC)和IgG。包被在硝酸纖維素膜上，加入待檢血清和酶標記的第二反應系統(tǒng)，根據(jù)底物顯色來判斷結果。2022/11/25125微生物學教研室

(三)臨床HCV感染的診斷

▲HCVIgG抗體仍是篩選慢性丙型肝炎主要指標；

▲HCVIgM抗體存在與否不能提示病毒復制狀態(tài)。由于HCVIgM抗體檢出率較低，如只檢測此項容易造成漏檢；

▲HCVRNA是反映病毒復制的可靠指標。2022/11/25126微生物學教研室1．急性丙型肝炎感染的診斷

(1)HCVRNA陽性，抗-HCV陰性，提示患有急性丙型肝炎；

(2)HCVRNA和抗-HCV均陰性，可排除急性丙型肝炎；

(3)HCVRNA陰性，抗-HCV陽性，可排除急性丙型肝炎；

(4)HCVRNA和抗-HCV均陽性，應注意鑒別急性丙型肝炎與慢性丙型肝炎的急性發(fā)作；2022/11/25127微生物學教研室2．慢性丙型肝炎感染的診斷(1)HCVRNA和抗-HCV均陽性，可確診為丙型肝炎；(2)HCVRNA陽性，抗-HCV陰性，可見免疫抑制治療患者、嚴重免疫缺陷患者；(3)健康普查中抗-HCV陽性者，可檢測HCVRNA來確定是否為慢性丙型肝炎感染2022/11/25128微生物學教研室3．嬰兒丙型肝炎垂直感染的診斷(1)嬰兒出生后18個月仍能檢測到HCV抗體；(2)嬰兒出生后3-6個月可檢測到HCVRNA，并且需兩次陽性；(3)嬰兒血清ALT升高；(4)母親和嬰兒病毒基因型一致。2022/11/25129微生物學教研室(四)HCV感染患者漏診和誤診可能的原因1．病程處于窗口期；2．患者免疫系統(tǒng)受到抑制、免疫功能低下；3．病毒株的變異；4．受檢測的血清中病毒拷貝數(shù)過低；5．血清的交叉反應。2022/11/25130微生物學教研室九、防治原則

1、嚴格篩選輸血員，血制品要嚴格檢查。

2、IFN為首選藥物。聚乙二醇干擾素λ聯(lián)合利巴韋林治療12周可獲得比聚乙二醇干擾素α聯(lián)合利巴韋林治療方案更高的完全早期病毒學應答率、、、、3、百時美施貴寶研發(fā)的小分子抗病毒藥物——NS5A復制復合體抑制劑BMS-790052的臨床試驗中發(fā)現(xiàn)，其聯(lián)合聚乙二醇干擾素和利巴韋林治療基因1型初治慢性丙肝患者結束后，停藥后24周持續(xù)病毒學應答率可達83%。

2022/11/25131微生物學教研室第四節(jié)

丁型肝炎病毒1977年，意大利學者Rizzetto在用免疫熒光法檢測乙型肝炎患者的肝組織切片時，發(fā)現(xiàn)肝細胞內除HBcAg外，還有一種新的抗原，當時稱其為δ抗原。通過黑猩猩實驗發(fā)現(xiàn)，自肝提取的這種因子可引起實驗動物感染。以后證實這是一種缺陷病毒，必須在HBV或其它嗜肝DNA病毒輔助下才能復制，現(xiàn)已正式命名為丁型肝炎病毒(hepatitisDvirus，HDV)。2022/11/25132微生物學教研室一、生物學特性1、HDV為球形，直徑35--37nm，基因組為一單負鏈環(huán)狀RNA，長度為1.7kb，是已知動物病毒中最小的基因組。HDVRNA可編碼一種HDV抗原(HDAg)。2、HDV顆粒由HBsAg構成其外殼，內含HDVRNA及與之結合的HDAg。HBsAg可防止HDVRNA水解，在HDV致病中起重要作用，它是由同時感染宿主細胞的HBV提供的。

HDAg的分子量約68000，有24000和27000(P24和P27)兩種多肽形式，主要存在于肝細胞內，在血清中出現(xiàn)早，但僅維持2周左右，故不易檢測到。2022/11/25133微生物學教研室3、黑猩猩及土撥鼠可作為HDV臨床研究的動物模型。2022/11/25134微生物學教研室二、致病性與免疫性

1、傳播途徑

HDV傳播途徑與HBV相似。