至課件講義整理

病例2李某，男，16歲，因發(fā)燒、浮腫、血尿入院。自幼時(shí)常咽喉痛、發(fā)燒，曾因心臟雜音臥床一個(gè)月。入院前3周又因咽痛發(fā)燒而注射青霉素?cái)?shù)日，癥狀消失，入院前兩日高熱，血尿。查體：T39℃，血壓稍高，眼瞼及下肢浮腫。實(shí)驗(yàn)室檢查：尿RBC+++，尿蛋白+++，ASO抗體800單位。

思考題：1．本病懷疑為什么疾病？2．從微生物學(xué)角度應(yīng)進(jìn)行哪些檢查？3.此致病菌致病物質(zhì)有哪些？引起本病的機(jī)制？病例2李某，男，16歲，因發(fā)燒、浮腫、血尿入院。自幼1第二節(jié)鏈球菌屬(Streptococcus）自然界、人及動(dòng)物糞便和健康人鼻咽部，G+，是化膿性細(xì)菌中常見(jiàn)的一大類(lèi)，多數(shù)不致病，※90%感染由A群鏈球菌引起。豬鏈球菌（S.suis）為動(dòng)物源性病原體，世界分布，最常見(jiàn)對(duì)人和動(dòng)物致病的為Ⅱ型，引起腦膜炎、敗血癥、心內(nèi)膜炎及中毒性休克等。第二節(jié)鏈球菌屬(Streptococcus）自然界2一、生物學(xué)性狀

1、形態(tài)與染色:

0.6-1μm，G+，球形，鏈狀排列，液體培養(yǎng)基

中鏈較長(zhǎng)，

※幼齡期菌有莢膜（透明質(zhì)酸），

有菌毛樣結(jié)構(gòu)，含型特異M蛋白α與β溶血2、培養(yǎng)特性：營(yíng)養(yǎng)要求高：血平板或含血清、葡萄糖培養(yǎng)基需氧、兼性厭氧，液體培養(yǎng)為※絮狀沉淀生長(zhǎng)※血平板呈灰白色表面光滑小菌落，

不同菌株溶血不一一、生物學(xué)性狀

α與β溶血2、培養(yǎng)特性：營(yíng)養(yǎng)要求高：血平板或33、生化反應(yīng)分解葡萄糖只產(chǎn)酸※觸酶試驗(yàn)（－）（與葡萄球菌鑒別）※不分解菊糖，不被膽汁溶解（鑒別甲型溶血性鏈球菌與肺炎鏈球菌）3、生化反應(yīng)分解葡萄糖只產(chǎn)酸4

4、根據(jù)抗原構(gòu)造分類(lèi)群特異性抗原（C抗原）：細(xì)胞壁多糖抗原，可將鏈球菌分為20群（A-H、K-T、U、V等），引起人類(lèi)感染的鏈球菌90％為A群。(溶血性鏈球菌或化膿性鏈球菌）群別與溶血性之間無(wú)平行關(guān)系。型特異性抗原（表面抗原）：細(xì)胞壁蛋白抗原，有M、T、R、S四種，根據(jù)M抗原不同，可將A群分為100型。莢膜細(xì)胞壁蛋白質(zhì)多糖肽聚糖細(xì)胞膜細(xì)胞質(zhì)4、根據(jù)抗原構(gòu)造分類(lèi)群特異性抗原（C抗原）：細(xì)胞壁多糖抗原，55、※根據(jù)溶血現(xiàn)象分類(lèi)：溶血現(xiàn)象名稱(chēng)類(lèi)別致病性草綠色溶血溶血甲型溶血性鏈球菌

α-hemolyticstreptococcus多為條件致病菌完全溶血

溶血乙型溶血性鏈球菌

β-hemolyticstreptococcus致病力強(qiáng)不溶血γ溶血丙型鏈球菌

γ-streptococcus一般無(wú)致病性6、抵抗力不強(qiáng)，加熱60℃30min被殺死，對(duì)消毒劑、抗生素敏感，特別是青霉素。5、※根據(jù)溶血現(xiàn)象分類(lèi)：溶血現(xiàn)象名稱(chēng)類(lèi)別致病性草綠色溶血溶6二、致病性與免疫性（一）致病物質(zhì)和發(fā)病機(jī)制

1、菌體胞壁成分

（1）脂磷壁酸（LTA）：細(xì)菌定植于皮膚和呼

吸道粘膜

（2）F蛋白：與上皮細(xì)胞表面纖維粘連蛋白結(jié)

合，利于定植和繁殖

（3）M蛋白：抗吞噬和抵抗吞噬細(xì)胞內(nèi)殺菌，

※與腎小球基底膜、心肌細(xì)胞有

共同抗原成分，與Ⅱ、Ⅲ超敏反應(yīng)性疾病有關(guān)

二、致病性與免疫性72、鏈球菌溶素（streptolysin）：溶解紅細(xì)胞、破壞白細(xì)胞和血小板

（1）SLO：對(duì)O2敏感，為含有-SH的蛋白質(zhì)，被氧化后失去溶血活性，加入還原劑可逆轉(zhuǎn)；抗原性強(qiáng)，刺激機(jī)體產(chǎn)生抗O抗體，※測(cè)定SLO抗體含量，可作為鏈球菌新近感染指標(biāo)之一或風(fēng)濕熱及其活動(dòng)性的輔助診斷；動(dòng)物試驗(yàn)又證實(shí)對(duì)心臟有急性毒害作用（2）SLS：對(duì)O2穩(wěn)定，小分子的糖肽，引起β溶血，無(wú)免疫原性；對(duì)熱、酸敏感，不易保存；動(dòng)物靜注迅速致死，注射小鼠腹腔，引起腎小管壞死。

2、鏈球菌溶素（streptolysin）：溶解紅細(xì)胞、破83、致熱外毒素SPE

（streptococcalpyrogenicexotoxin）：

紅疹毒素或猩紅熱毒素，※A群鏈球菌溶原性菌株產(chǎn)生，耐熱的蛋白質(zhì)，引起猩紅熱（scarletfever），為急性呼吸道傳染病，臨床特征為發(fā)熱、咽峽炎、全身彌漫性皮疹和疹退后的明顯脫屑；該毒素還有內(nèi)毒素樣的致熱作用，對(duì)細(xì)胞或組織有損害作用?？煞譃锳、B、C、F4四種不同抗原性的毒素，無(wú)交叉保護(hù)作用。

3、致熱外毒素SPE

（streptococcal94、侵襲性酶:※利于細(xì)菌在局部化膿性炎中擴(kuò)散

（1）透明質(zhì)酸酶：擴(kuò)散因子，分解細(xì)胞間透明質(zhì)

酸；（2）鏈激酶：使血液中纖維蛋白酶原變成纖維蛋

白酶，溶解血塊或阻止血漿凝固；（3）鏈道酶：降解膿液中高度粘稠的DNA，使膿

液稀??；（4）膠原酶：溶解膠原纖維4、侵襲性酶:※利于細(xì)菌在局部化膿性炎中擴(kuò)散

（1）透明質(zhì)10（二）所致疾?。簭?fù)雜而多樣※A群鏈球菌淋巴結(jié)炎猩紅熱超敏反應(yīng)性疾病化膿性感染中毒性疾病蜂窩組織炎膿皰瘡咽炎扁桃體炎丹毒風(fēng)濕熱急性腎小球腎炎膿皰瘡頸淋巴結(jié)炎扁桃體炎面部丹毒急性期丹毒恢復(fù)期蜂窩組織炎（由皮膚傷口侵入）（二）所致疾病：復(fù)雜而多樣※A群鏈球菌淋巴結(jié)炎猩紅熱超敏11※猩紅熱：急性呼吸道傳染病，臨床特征為發(fā)熱、

咽峽炎、全身彌漫性皮疹和疹退后的

明顯脫屑，口周蒼白、草莓舌、楊梅舌

※猩紅熱：急性呼吸道傳染病，臨床特征為發(fā)熱、

12

風(fēng)濕熱:

咽炎后發(fā)生，以關(guān)節(jié)炎、心肌炎為主。

※發(fā)病機(jī)制:

(1)M蛋白與其抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物,沉積于心瓣膜和

關(guān)節(jié)滑膜引起Ⅲ型超敏反應(yīng)

(2)鏈球菌多糖抗原與心瓣膜有共同抗原，引起Ⅱ型超敏反應(yīng)

急性腎小球腎炎：多見(jiàn)于兒童和少年，扁桃

體炎和咽炎后均可發(fā)生，

蛋白尿、浮腫和高血壓。

※發(fā)病機(jī)制:

(1)M蛋白與其抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物,沉積于

腎小球基底膜引起Ⅲ型超敏反應(yīng)

(2)鏈球菌的某些抗原與腎小球基底膜有共同抗

原，機(jī)體針對(duì)鏈球菌所產(chǎn)生的抗體與腎小球

基底膜發(fā)生反應(yīng)，引發(fā)基底膜損傷，屬Ⅱ型

變態(tài)反應(yīng)。

風(fēng)濕熱:咽炎后發(fā)生，以關(guān)節(jié)炎、心肌炎為主。

※發(fā)病機(jī)13甲型鏈球菌人類(lèi)口腔和上呼吸道的正常菌群，在拔牙或摘除扁桃體時(shí)，寄居在口腔、齦縫中的草綠色鏈球菌可侵入血流引起菌血癥。若心臟瓣膜已有缺陷或損傷，本菌可在損傷部位繁殖，引起亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎。

變異鏈球菌與齲齒有關(guān)D群鏈球菌條件致病菌，正常寄居于皮膚、上呼吸道、消化道、泌尿生殖道?？梢鹉蚵犯腥尽⒏共扛腥?、敗血癥、心內(nèi)膜炎。B群鏈球菌條件致病菌，正常寄居于直腸、陰道、鼻咽部?？梢鹌つw感染、心內(nèi)膜炎、產(chǎn)后感染、新生兒敗血癥和新生兒腦膜炎。甲型鏈球菌人類(lèi)口腔和上呼吸道的正常菌群，在拔牙或摘除扁桃體時(shí)14豬鏈球菌病

急性的常為出血性敗血癥和腦炎，慢性的以關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎為特點(diǎn)，臨床上以淋巴結(jié)膿腫為常見(jiàn)。一年四季均可發(fā)生，以5—11月份較多。常為地方性流行，多呈敗血型，如不進(jìn)行防治，則發(fā)病率、病死率很高，病豬和帶菌豬是主要傳染源，可以通過(guò)傷口、消化道、呼吸道等途徑傳染給人。

豬鏈球菌病屬?lài)?guó)家規(guī)定的二類(lèi)動(dòng)物疫病，是一種人畜共患傳染病。豬鏈球菌病

豬鏈球菌病屬?lài)?guó)家規(guī)定的二類(lèi)動(dòng)物疫病，是一種人15（三）免疫性A群鏈球菌感染后，可產(chǎn)生特異免疫抗M蛋白抗體（IgG）有保護(hù)作用，同時(shí)可能引發(fā)超敏反應(yīng)性疾病型別間無(wú)交叉免疫，故常反復(fù)感染猩紅熱患者可建立牢固的同型抗毒素免疫（三）免疫性A群鏈球菌感染后，可產(chǎn)生特異免疫16三、微生物學(xué)檢查法標(biāo)本直接涂片革蘭染色鏡檢分離培養(yǎng)取可疑菌落鑒定試驗(yàn)和藥敏試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告三、微生物學(xué)檢查法標(biāo)本直接涂片分離培養(yǎng)取可疑菌落鑒定試驗(yàn)和藥17膿、痰、咽拭腦脊液血液增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)直接涂片染色※觀察菌落及溶血現(xiàn)象※觸酶試驗(yàn)（－）※

Optochin敏感試驗(yàn)肺炎鏈球菌B群鏈球菌馬尿酸鈉水解試驗(yàn)?zāi)懼呷~苷A群鏈球菌D群鏈球菌腸球菌6.5％NaCl血清學(xué)分類(lèi)※

ASO

test風(fēng)濕熱膿、痰、咽拭腦脊液血液增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)直接涂片染色※觀察菌落18血清學(xué)檢查抗“O”試驗(yàn)（ASOtest）：鏈球菌侵入體內(nèi)產(chǎn)生SLO，刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體ASO，當(dāng)兩者中和后，在加入SLO乳膠試劑，因病人血清中ASO量很多，未被中和掉的抗體與乳膠試劑反應(yīng)，產(chǎn)生清晰凝集，為陽(yáng)性；無(wú)凝集，為陰性。原理：中和試驗(yàn)方法：間接凝集結(jié)果：※效價(jià)大于400單位意義：※鏈球菌新近感染的指標(biāo)、

風(fēng)濕熱及其活動(dòng)性的輔助診斷血清學(xué)檢查抗“O”試驗(yàn)（ASOtest）：鏈球菌侵入體內(nèi)產(chǎn)19預(yù)防

與葡萄球菌相似，對(duì)病人和帶菌者及時(shí)治療，減少傳染源空氣、器械、敷料等注意消毒。

流行期間每月注射長(zhǎng)效青霉素

※對(duì)急性咽峽炎和扁桃體炎患者，尤其是兒童，須治療徹底，

防止變態(tài)反應(yīng)疾病的發(fā)生治療

※青霉素、紅霉素、磺胺藥、林可霉素，青霉素首選。特殊治療：外科清創(chuàng)，抗休克，抗毒素。四、防治原則預(yù)防與葡萄球菌相似，對(duì)病人和帶菌者及時(shí)治療，減少傳染20總結(jié)1、金黃色葡萄球菌與鏈球菌如何鑒別？2、鏈球菌的致病物質(zhì)有哪些？3、金黃色葡萄球菌與鏈球菌所引起的化膿性

感染有什么區(qū)別？原因是什么？4、什么是ASOtest？有何意義？5、A群鏈球菌可引起哪些疾?。?、鏈球菌如何分類(lèi)？?總結(jié)1、金黃色葡萄球菌與鏈球菌如何鑒別？?21有關(guān)鑒別試驗(yàn)附加內(nèi)容(一)溶血性檢查

溶血性是鑒定球菌最常用的項(xiàng)目，也是鑒定過(guò)程中重要的一步。1919年Brown對(duì)溶血性進(jìn)行了描述。溶血性的識(shí)別可在血平板表面菌落周?chē)痛┐烫幫ㄟ^(guò)肉眼觀察，也可用顯微鏡觀察。除在分離血平板上觀察菌落周?chē)娜苎酝?，還可用以下方法確認(rèn)。

材料：羊血平板。

方法：將標(biāo)本接種于羊血平板上，用接種針在已接種過(guò)的血平板上扎2～3處，使細(xì)菌被接種到瓊脂層深處，35℃孵育過(guò)夜。

觀察結(jié)果：在接種針穿刺過(guò)處，羊紅細(xì)胞完全溶解，形成無(wú)色透明區(qū)，為β溶血。羊紅細(xì)胞部分溶解或不溶解呈草綠色的環(huán)，為α溶血。不溶解無(wú)溶血環(huán)為γ溶血。(二)

Optochin敏感試驗(yàn)

材料：Optochin

(ethylhydrocupreine

HCI。)紙片(直徑6mm)，每片含5μg。血平板。

方法：挑取被檢菌落，涂在血平板上，貼

Optochin紙片于接種處，35℃，燭缸孵育18h。

觀察結(jié)果：抑菌環(huán)直徑≥14mm為敏感，推斷肺炎鏈球菌。

抑菌環(huán)直徑≤14mm時(shí)參照膽汁溶菌，或?yàn)槠渌菥G色鏈球菌。(三)

桿菌肽敏感試驗(yàn)

材料：含0.04U／片的桿菌肽紙片，血平板。

方法：挑取被檢菌落，密涂于血平板上，接種量應(yīng)大，以免出假陽(yáng)性。貼上桿菌肽紙片，35℃過(guò)夜。

觀察結(jié)果：形成抑菌環(huán)為敏感，則被檢菌推斷為A群鏈球菌。有關(guān)鑒別試驗(yàn)附加內(nèi)容(一)溶血性檢查

溶血性是鑒定球菌最常22有關(guān)鑒別試驗(yàn)附加內(nèi)容(四)

CAMP試驗(yàn)

材料：血平板，金黃色葡萄球菌

ATCC25923。

方法：在血平板上，用金黃色葡萄球菌劃種一條直線，再將被檢菌距金黃色葡萄球菌

3mm處垂直接種一短線。用同樣方法接種陰性和陽(yáng)性對(duì)照菌。35℃孵育過(guò)夜。

觀察結(jié)果：在被檢菌接種線與金葡菌接種線之間有一個(gè)矢形(半月形)加強(qiáng)溶血區(qū)，此即CAMP試驗(yàn)陽(yáng)性。陰性無(wú)加強(qiáng)溶血區(qū)。(五)

膽汁-七葉苷試驗(yàn)(平皿法或斜面法)

培養(yǎng)基：牛肉膏3g七葉苷1g蛋白胨5g枸櫞酸鐵0.5g膽鹽40g蒸餾水

1000ml瓊脂

1％

牛肉膏、蛋白胨和瓊脂溶于400ml蒸餾水中，膽鹽溶于400ml蒸餾水中，枸櫞酸鐵溶于l00ml蒸餾水中，三者混合，加熱充分溶解后，高壓滅菌121℃

15min。七葉苷溶于l00ml蒸餾水，過(guò)濾除菌，以無(wú)菌手續(xù)加到培養(yǎng)基中，傾倒平皿或斜面。

方法：接種被檢菌1—3個(gè)菌落，涂劃開(kāi)，置35℃下，孵育24～48h。

觀察結(jié)果：培養(yǎng)基變黑色或棕褐色為陽(yáng)性，不變色為陰性。

注意事項(xiàng)：接種細(xì)菌量不能過(guò)大。本試驗(yàn)是測(cè)定細(xì)菌在膽鹽中生長(zhǎng)情況及同時(shí)分解七葉苷的能力，如接種菌量過(guò)大，細(xì)菌不需要生長(zhǎng)而本身固有的酶足以造成七葉苷分解，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。(六）馬尿酸鈉水解試驗(yàn)

(1)原理：某些細(xì)菌可具有馬尿酸水解酶，可使馬尿酸水解為苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸與三氯化鐵試劑結(jié)合，形成苯甲酸鐵沉淀。

(2)方法：將待檢菌接種于馬尿酸鈉培養(yǎng)基中，置35℃孵育48h，離心沉淀，取上清液0.8ml，加入三氯化鐵試劑0.2ml，立即混勻，經(jīng)10~15min觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：出現(xiàn)恒定之沉淀物為陽(yáng)性。

應(yīng)用：主要用于B群鏈球菌的鑒定。有關(guān)鑒別試驗(yàn)附加內(nèi)容(四)

CAMP試驗(yàn)

材料：血平板，金23有關(guān)鑒別試驗(yàn)附加內(nèi)容(七)七葉苷試驗(yàn)

培養(yǎng)基：蛋白胨

5g七葉苷

3gK2HPO4

1g枸櫞酸鐵

0.5g蒸餾水

1000ml

將上述成分加熱溶解，分裝試管，高壓滅菌12rClomin。

方法：接種被檢菌于培養(yǎng)基中，35℃過(guò)夜。

觀察結(jié)果：培養(yǎng)基變黑為陽(yáng)性，不變?yōu)殛幮浴?八)

6.5％NaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)

培養(yǎng)基

NaCl6.5g牛肉粉0.3g葡萄糖0.1g蛋白胨1g瓊脂粉

1.8g蒸餾水

l00ml溴甲酚紫指示劑適量

調(diào)整pH7.4，121℃

15min滅菌后制成平皿或斜面。

方法：接種被檢菌，35℃孵育過(guò)夜。

觀察結(jié)果：培養(yǎng)基上生長(zhǎng)出菌落并變黃色為陽(yáng)性，不變色為陰性。

注意點(diǎn)：本試驗(yàn)是測(cè)定細(xì)菌在高鹽中的生長(zhǎng)能力，葡萄糖作為是否生長(zhǎng)的指示劑。細(xì)菌接種量不能過(guò)大，否則細(xì)菌并不需要繁殖即可使葡萄糖產(chǎn)酸，培養(yǎng)基變色，導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。(九)

色素試驗(yàn)

色素試驗(yàn)在鑒定B群鏈球菌的幾個(gè)方法中，特異性最好。這是Noble改良的Islam法。

培養(yǎng)基：淀粉10g胨23.0gNaH2PO41.48gNa2HP045.75g瓊脂

l0g水

1000ml

調(diào)pH7.4，121℃15min滅菌后，加入

10ml滅活馬血清，傾制平板或高層瓊脂。接種細(xì)菌，35℃過(guò)夜培養(yǎng)。

觀察結(jié)果：細(xì)菌菌落及周?chē)呐囵B(yǎng)基呈黃色為陽(yáng)性。

有關(guān)鑒別試驗(yàn)附加內(nèi)容24病例3

男，20歲，學(xué)生。酗酒后遭雨淋，于當(dāng)天晚上突然起病，寒顫、高熱、呼吸困難、胸痛，繼而咳嗽，咳鐵銹色痰。聽(tīng)診，左肺下葉有大量濕性啰音；觸診語(yǔ)顫增強(qiáng)；血常規(guī)：WBC：17X109/L（4-10X109/L）；X線檢查，左肺下葉有大片致密陰影。經(jīng)抗生素治療，病情好轉(zhuǎn)，各種癥狀逐漸消失；X線檢查，左肺下葉的大片致密陰影縮小2/3面積。于入院后第7天自感無(wú)癥狀出院。1、患者發(fā)生了什么疾病？

2、從微生物學(xué)角度應(yīng)該進(jìn)行哪些檢驗(yàn)以確定診斷？

病例3

男，20歲，學(xué)生。酗酒后25

第三節(jié)肺炎鏈球菌（S.pneumoniae）寄居于人的鼻咽腔中，一般不致病。

機(jī)體免疫力下降時(shí)可引起※細(xì)菌性肺炎。矛頭狀：平面相對(duì)尖面相背一、生物學(xué)性狀

１、形態(tài)與染色

※有厚莢膜G+雙球菌，病變組織中：?jiǎn)蝹€(gè)或短鏈

無(wú)芽胞無(wú)鞭毛第三節(jié)肺炎鏈球菌（S.pneumoniae）矛26肺炎鏈球菌電鏡圖ScanningElectronMicrograph肺炎鏈球菌電鏡圖ScanningElectronMicr27分解葡萄糖，乳糖※菊糖（+）2、培養(yǎng)特性營(yíng)養(yǎng)要求較高，常用血培養(yǎng)，菌落灰白色細(xì)小半透明，與甲鏈相似，※周?chē)笑寥苎?，培育時(shí)間＞48小時(shí)，※能產(chǎn)生自溶酶，菌落曾臍狀3、生化反應(yīng)

※膽汁溶菌（+）4、抗原結(jié)構(gòu)：莢膜多糖抗原（型特異性，90型）

菌體抗原（M蛋白、C多糖）

5、抵抗力：較弱分解葡萄糖，乳糖2、培養(yǎng)特性營(yíng)養(yǎng)要求較高，常用血培養(yǎng)，菌落灰28二、致病性與免疫性※莢膜→有莢膜菌株才能引起人致病

肺炎鏈球菌溶素O(pneumolysinO):

抑制中性粒細(xì)胞的趨化及吞噬作用

脂磷壁酸：粘附※建立較牢固的同型免疫產(chǎn)生型特異的莢膜多糖抗體※大葉性肺炎

肺炎可累及某一整個(gè)肺葉(大葉性肺炎)；某一肺葉的某一肺段(段性或小葉性肺炎)；鄰近支氣管的肺泡(支氣管肺炎)或間質(zhì)組織(間質(zhì)性肺炎)。這些區(qū)別一般根據(jù)X線表現(xiàn)劃分。中耳炎、乳突炎、副鼻竇炎、

腦膜炎、敗血癥

（二）所致疾病（三）免疫性（一）致病物質(zhì)二、致病性與免疫性※莢膜→有莢膜菌株才能引起人致病

肺炎鏈球29三、微生物學(xué)檢查方法方法:取標(biāo)本直接涂片,革蘭染色后鏡檢初步報(bào)告:“查見(jiàn)革蘭陽(yáng)性矛尖狀雙球菌，有莢膜，疑似肺炎鏈球菌”分離培養(yǎng)與鑒定：血平板→可以菌落→膽汁溶菌試驗(yàn)、菊糖發(fā)酵試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)：

有毒力肺炎球菌

高度易感小鼠，

24h死亡。甲鏈

小鼠不死亡。

三、微生物學(xué)檢查方法方法:取標(biāo)本直接涂片,革蘭染色后鏡30※肺炎鏈球菌與甲型溶血性鏈球菌鑒別菌名形態(tài)菌落膽汁溶菌Optochin菊糖分解小白鼠毒力肺鏈矛尖狀、成雙排列、有莢膜臍窩狀、草綠色溶血環(huán)+++/－+甲鏈圓形、短鏈、無(wú)莢膜針尖狀、草綠色溶血環(huán)－－－－※肺炎鏈球菌與甲型溶血性鏈球菌鑒別菌名形態(tài)菌落膽汁Optoc31四、防治原則：多價(jià)肺炎球菌莢膜多糖疫苗

（含有23個(gè)型別）根據(jù)藥敏試驗(yàn)選擇抗生素四、防治原則：多價(jià)肺炎球菌莢膜多糖疫苗

（含有23個(gè)型別）根32總結(jié)肺炎鏈球菌結(jié)構(gòu)特點(diǎn)？培養(yǎng)特點(diǎn)？如何區(qū)別肺炎鏈球菌與甲型溶血性鏈球菌？肺炎鏈球菌主要的致病物質(zhì)是什么？可引起什么疾病？?總結(jié)肺炎鏈球菌結(jié)構(gòu)特點(diǎn)？培養(yǎng)特點(diǎn)？?33病例4男性，2歲，于2天前發(fā)熱達(dá)39℃，伴哭鬧，易激惹，嘔吐2次，噴射性，以“發(fā)熱嘔吐”待查收入院。近2天來(lái)精神萎靡，二便正常，吃奶稍差。查體:T39.2℃，右眼結(jié)膜及全身皮膚有針頭至綠豆大小不等的紅色出血點(diǎn)，咽微紅，精神差，易激惹，前囟張力稍高，眼神欠靈活，頸硬。腦脊液檢查：外觀混濁，白細(xì)胞總數(shù)22×109/L，中性多核粒細(xì)胞96%，淋巴細(xì)胞4%。將腦脊液離心沉淀后取沉渣涂片，革蘭染色檢查，發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞內(nèi)外均有革蘭陰性雙球菌?？耸险?+)。（屈髓伸膝試驗(yàn)，患者仰臥位使膝關(guān)節(jié)屈曲成直角，然后被動(dòng)使屈曲的小腿伸直，當(dāng)膝關(guān)節(jié)不能伸直，出現(xiàn)阻力及疼痛而膝關(guān)節(jié)形成的角度不到135°時(shí)為克氏征陽(yáng)性）。

1、引起本病最可能的病菌是什么？2、該菌是如何傳播的？所致疾病怎樣進(jìn)行特異性預(yù)防？

病例4男性，2歲，于2天前發(fā)熱達(dá)39℃，伴哭鬧，易激34第四節(jié)腦膜炎奈瑟菌(Neisseriameningitidis)

一、生物學(xué)性狀

1、形態(tài)與染色G-雙球菌，無(wú)鞭毛，無(wú)芽胞，新分離株大多有莢膜和菌毛；※在患者腦脊液中多位于中性粒細(xì)胞內(nèi)。2、培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)專(zhuān)性需氧菌，※巧克力平板，在5%-10%CO2條件下生長(zhǎng)更佳。＜30℃或＞40℃不生長(zhǎng)；菌落無(wú)色、透明、露滴狀、光滑型、不溶血；能產(chǎn)生自溶酶。分解葡萄糖、麥芽糖，氧化酶和觸酶試驗(yàn)（+）第四節(jié)腦膜炎奈瑟菌(Neisseriame353、抗原構(gòu)造與分類(lèi)莢膜多糖抗原群特異性，分為13群，我國(guó)95%由A群引起外膜蛋白抗原型特異性，1-5類(lèi)，2和3類(lèi)用于分型

1和5用于分亞型脂寡糖抗原外膜脂多糖缺乏多糖側(cè)鏈，只有寡糖重復(fù)單位4、抵抗力：

※很弱，對(duì)青霉素敏感，對(duì)磺胺普遍耐藥四怕

熱力寒冷干燥消毒劑3、抗原構(gòu)造與分類(lèi)莢膜多糖抗原群特異性，分為13群，36二、致病性與免疫性（一）致病物質(zhì)主要是內(nèi)毒素莢膜：抗吞噬菌毛：介導(dǎo)粘附（二）所致疾病※流行性腦脊髓膜炎

傳染源：病人和帶菌者

傳播途徑：飛沫

易感人群：5歲以下兒童（三）免疫性體液免疫為主（抗莢膜多糖抗體、抗外膜蛋白抗體）三種臨床類(lèi)型：普通型、暴發(fā)型、慢性敗血癥型

臨床癥狀：※頭疼、噴射狀嘔吐、頸強(qiáng)，紫癜、

循環(huán)衰竭、休克、DIC、死亡率40-60%發(fā)熱、內(nèi)皮細(xì)胞損傷、

血管栓塞和出血、

皮疹、瘀斑、

中毒性休克、DIC二、致病性與免疫性（一）致病物質(zhì)主要是內(nèi)毒素（二）所致疾病※37三、微生物學(xué)檢查標(biāo)本分離培養(yǎng)與鑒定腦脊液、血液、出血點(diǎn)滲出液、鼻咽拭保暖、保濕、立即送檢，培養(yǎng)基預(yù)溫直接涂片鏡檢腦脊液檢查：※中性粒細(xì)胞內(nèi)、

外有革蘭陰性雙球菌，可作出初步診斷。

瘀斑檢查：制成印片，革蘭染色，陽(yáng)性率80%巧克力（色）培養(yǎng)基快速診斷對(duì)流免疫電泳，SPA協(xié)同凝集試驗(yàn)金葡菌三、微生物學(xué)檢查標(biāo)本分離培養(yǎng)與鑒定腦脊液、血液、出血點(diǎn)滲出液38

四、防治原則兒童注射流腦莢膜多糖疫苗進(jìn)行特異性預(yù)防（常用A、C二價(jià)或A、C、Y和W135混合)治療采用青霉素等抗生素四、防治原則兒童注射流腦莢膜多糖疫苗進(jìn)行特異性預(yù)39總結(jié)腦膜炎奈瑟菌形態(tài)、培養(yǎng)特點(diǎn)及抵抗力？腦膜炎奈瑟菌主要的致病物質(zhì)？所致疾??？疾病臨床特點(diǎn)？感染流行性腦脊髓膜炎的微生物學(xué)檢查方法？?總結(jié)腦膜炎奈瑟菌形態(tài)、培養(yǎng)特點(diǎn)及抵抗力？?40病例5某男，43歲，來(lái)院就診，一日前無(wú)明顯原因尿痛、尿頻、尿道分泌物增多，伴腰痛，要求檢查治療。經(jīng)查尿道口紅腫，擠壓尿道可見(jiàn)少量黃色分泌物流出，經(jīng)化驗(yàn)檢查：NG（+），UU（—），CT（—）。診斷為慢性淋病急性發(fā)作。給藥舒美特、頭孢曲松鈉、淋必治。半月后前來(lái)復(fù)查，癥狀消失，化驗(yàn)檢查：NG（—），UU（—），CT（—）。痊愈。注：NG（淋球菌）

UU（解脲脲原體）

CT（沙眼衣原體）病例5某男，43歲，來(lái)院就診，一日前無(wú)明顯原因尿痛、尿頻41第五節(jié)淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）革蘭陰性雙球菌似一對(duì)咖啡豆無(wú)芽胞和鞭毛，※有莢膜和菌毛專(zhuān)性需氧，5-10%CO2，※最適PH7.5，最適溫度35-36℃，巧克力（色）血瓊脂平板上形成灰白光滑小菌落培養(yǎng)特性形態(tài)與染色生化反應(yīng)抵抗力與腦膜炎奈瑟菌類(lèi)似對(duì)熱、冷、干燥和消毒劑極度敏感

※

1%硝酸銀1min內(nèi)死亡只分解葡萄糖，產(chǎn)酸，氧化酶試驗(yàn)（+）抗原結(jié)構(gòu)菌毛蛋白抗原、脂寡糖抗原、外膜蛋白抗原第五節(jié)淋病奈瑟菌（N.gonorrho42菌毛、外膜蛋白IgA1蛋白酶、內(nèi)毒素※淋病※人類(lèi)是淋病奈瑟菌的唯一宿主主要通過(guò)性接觸引起泌尿道和生殖系統(tǒng)炎癥

尿頻尿痛、尿道及生殖道流膿，可導(dǎo)致不育新生兒淋菌性結(jié)膜炎由產(chǎn)道感染、膿漏眼致病物質(zhì)所致疾病菌毛、外膜蛋白※淋病※人類(lèi)是淋病奈瑟菌的唯一宿主主要通過(guò)性接43人類(lèi)對(duì)淋病奈瑟菌的感染無(wú)天然抵抗力感染后出現(xiàn)特異性抗體，但免疫力不持久免疫性微生物學(xué)檢查法標(biāo)本用無(wú)菌棉拭沾取膿性分泌物，注意保暖保濕，立即送檢直接涂片鏡檢中性粒細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)有革蘭陰性雙球菌有診斷價(jià)值分離培養(yǎng)與鑒定巧克力色平板，5-10%二氧化碳人類(lèi)對(duì)淋病奈瑟菌的感染無(wú)天然抵抗力免疫性微生物學(xué)檢查法標(biāo)本用44防開(kāi)展防治性病的知識(shí)教育防止不正當(dāng)?shù)膬尚躁P(guān)系

目前尚無(wú)有效的疫苗供特異性預(yù)防治藥敏指導(dǎo)臨床用藥

對(duì)淋病患者及時(shí)徹底治療，性接觸者也應(yīng)治療新生兒1%硝酸銀滴眼防治原則防開(kāi)展防治性病的知識(shí)教育防止不正當(dāng)?shù)膬尚躁P(guān)系

目前尚無(wú)有效45總結(jié)淋球菌形態(tài)、培養(yǎng)特點(diǎn)及抵抗力？淋球菌主要的致病物質(zhì)？所致疾?。考膊∨R床特點(diǎn)？淋球菌的微生物學(xué)檢查方法？如何防治淋病？?總結(jié)淋球菌形態(tài)、培養(yǎng)特點(diǎn)及抵抗力？?46病例2李某，男，16歲，因發(fā)燒、浮腫、血尿入院。自幼時(shí)常咽喉痛、發(fā)燒，曾因心臟雜音臥床一個(gè)月。入院前3周又因咽痛發(fā)燒而注射青霉素?cái)?shù)日，癥狀消失，入院前兩日高熱，血尿。查體：T39℃，血壓稍高，眼瞼及下肢浮腫。實(shí)驗(yàn)室檢查：尿RBC+++，尿蛋白+++，ASO抗體800單位。

思考題：1．本病懷疑為什么疾??？2．從微生物學(xué)角度應(yīng)進(jìn)行哪些檢查？3.此致病菌致病物質(zhì)有哪些？引起本病的機(jī)制？病例2李某，男，16歲，因發(fā)燒、浮腫、血尿入院。自幼47第二節(jié)鏈球菌屬(Streptococcus）自然界、人及動(dòng)物糞便和健康人鼻咽部，G+，是化膿性細(xì)菌中常見(jiàn)的一大類(lèi)，多數(shù)不致病，※90%感染由A群鏈球菌引起。豬鏈球菌（S.suis）為動(dòng)物源性病原體，世界分布，最常見(jiàn)對(duì)人和動(dòng)物致病的為Ⅱ型，引起腦膜炎、敗血癥、心內(nèi)膜炎及中毒性休克等。第二節(jié)鏈球菌屬(Streptococcus）自然界48一、生物學(xué)性狀

1、形態(tài)與染色:

0.6-1μm，G+，球形，鏈狀排列，液體培養(yǎng)基

中鏈較長(zhǎng)，

※幼齡期菌有莢膜（透明質(zhì)酸），

有菌毛樣結(jié)構(gòu)，含型特異M蛋白α與β溶血2、培養(yǎng)特性：營(yíng)養(yǎng)要求高：血平板或含血清、葡萄糖培養(yǎng)基需氧、兼性厭氧，液體培養(yǎng)為※絮狀沉淀生長(zhǎng)※血平板呈灰白色表面光滑小菌落，

不同菌株溶血不一一、生物學(xué)性狀

α與β溶血2、培養(yǎng)特性：營(yíng)養(yǎng)要求高：血平板或493、生化反應(yīng)分解葡萄糖只產(chǎn)酸※觸酶試驗(yàn)（－）（與葡萄球菌鑒別）※不分解菊糖，不被膽汁溶解（鑒別甲型溶血性鏈球菌與肺炎鏈球菌）3、生化反應(yīng)分解葡萄糖只產(chǎn)酸50

4、根據(jù)抗原構(gòu)造分類(lèi)群特異性抗原（C抗原）：細(xì)胞壁多糖抗原，可將鏈球菌分為20群（A-H、K-T、U、V等），引起人類(lèi)感染的鏈球菌90％為A群。(溶血性鏈球菌或化膿性鏈球菌）群別與溶血性之間無(wú)平行關(guān)系。型特異性抗原（表面抗原）：細(xì)胞壁蛋白抗原，有M、T、R、S四種，根據(jù)M抗原不同，可將A群分為100型。莢膜細(xì)胞壁蛋白質(zhì)多糖肽聚糖細(xì)胞膜細(xì)胞質(zhì)4、根據(jù)抗原構(gòu)造分類(lèi)群特異性抗原（C抗原）：細(xì)胞壁多糖抗原，515、※根據(jù)溶血現(xiàn)象分類(lèi)：溶血現(xiàn)象名稱(chēng)類(lèi)別致病性草綠色溶血溶血甲型溶血性鏈球菌

α-hemolyticstreptococcus多為條件致病菌完全溶血

溶血乙型溶血性鏈球菌

β-hemolyticstreptococcus致病力強(qiáng)不溶血γ溶血丙型鏈球菌

γ-streptococcus一般無(wú)致病性6、抵抗力不強(qiáng)，加熱60℃30min被殺死，對(duì)消毒劑、抗生素敏感，特別是青霉素。5、※根據(jù)溶血現(xiàn)象分類(lèi)：溶血現(xiàn)象名稱(chēng)類(lèi)別致病性草綠色溶血溶52二、致病性與免疫性（一）致病物質(zhì)和發(fā)病機(jī)制

1、菌體胞壁成分

（1）脂磷壁酸（LTA）：細(xì)菌定植于皮膚和呼

吸道粘膜

（2）F蛋白：與上皮細(xì)胞表面纖維粘連蛋白結(jié)

合，利于定植和繁殖

（3）M蛋白：抗吞噬和抵抗吞噬細(xì)胞內(nèi)殺菌，

※與腎小球基底膜、心肌細(xì)胞有

共同抗原成分，與Ⅱ、Ⅲ超敏反應(yīng)性疾病有關(guān)

二、致病性與免疫性532、鏈球菌溶素（streptolysin）：溶解紅細(xì)胞、破壞白細(xì)胞和血小板

（1）SLO：對(duì)O2敏感，為含有-SH的蛋白質(zhì)，被氧化后失去溶血活性，加入還原劑可逆轉(zhuǎn)；抗原性強(qiáng)，刺激機(jī)體產(chǎn)生抗O抗體，※測(cè)定SLO抗體含量，可作為鏈球菌新近感染指標(biāo)之一或風(fēng)濕熱及其活動(dòng)性的輔助診斷；動(dòng)物試驗(yàn)又證實(shí)對(duì)心臟有急性毒害作用（2）SLS：對(duì)O2穩(wěn)定，小分子的糖肽，引起β溶血，無(wú)免疫原性；對(duì)熱、酸敏感，不易保存；動(dòng)物靜注迅速致死，注射小鼠腹腔，引起腎小管壞死。

2、鏈球菌溶素（streptolysin）：溶解紅細(xì)胞、破543、致熱外毒素SPE

（streptococcalpyrogenicexotoxin）：

紅疹毒素或猩紅熱毒素，※A群鏈球菌溶原性菌株產(chǎn)生，耐熱的蛋白質(zhì)，引起猩紅熱（scarletfever），為急性呼吸道傳染病，臨床特征為發(fā)熱、咽峽炎、全身彌漫性皮疹和疹退后的明顯脫屑；該毒素還有內(nèi)毒素樣的致熱作用，對(duì)細(xì)胞或組織有損害作用?？煞譃锳、B、C、F4四種不同抗原性的毒素，無(wú)交叉保護(hù)作用。

3、致熱外毒素SPE

（streptococcal554、侵襲性酶:※利于細(xì)菌在局部化膿性炎中擴(kuò)散

（1）透明質(zhì)酸酶：擴(kuò)散因子，分解細(xì)胞間透明質(zhì)

酸；（2）鏈激酶：使血液中纖維蛋白酶原變成纖維蛋

白酶，溶解血塊或阻止血漿凝固；（3）鏈道酶：降解膿液中高度粘稠的DNA，使膿

液稀??；（4）膠原酶：溶解膠原纖維4、侵襲性酶:※利于細(xì)菌在局部化膿性炎中擴(kuò)散

（1）透明質(zhì)56（二）所致疾?。簭?fù)雜而多樣※A群鏈球菌淋巴結(jié)炎猩紅熱超敏反應(yīng)性疾病化膿性感染中毒性疾病蜂窩組織炎膿皰瘡咽炎扁桃體炎丹毒風(fēng)濕熱急性腎小球腎炎膿皰瘡頸淋巴結(jié)炎扁桃體炎面部丹毒急性期丹毒恢復(fù)期蜂窩組織炎（由皮膚傷口侵入）（二）所致疾病：復(fù)雜而多樣※A群鏈球菌淋巴結(jié)炎猩紅熱超敏57※猩紅熱：急性呼吸道傳染病，臨床特征為發(fā)熱、

咽峽炎、全身彌漫性皮疹和疹退后的

明顯脫屑，口周蒼白、草莓舌、楊梅舌

※猩紅熱：急性呼吸道傳染病，臨床特征為發(fā)熱、

58

風(fēng)濕熱:

咽炎后發(fā)生，以關(guān)節(jié)炎、心肌炎為主。

※發(fā)病機(jī)制:

(1)M蛋白與其抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物,沉積于心瓣膜和

關(guān)節(jié)滑膜引起Ⅲ型超敏反應(yīng)

(2)鏈球菌多糖抗原與心瓣膜有共同抗原，引起Ⅱ型超敏反應(yīng)

急性腎小球腎炎：多見(jiàn)于兒童和少年，扁桃

體炎和咽炎后均可發(fā)生，

蛋白尿、浮腫和高血壓。

※發(fā)病機(jī)制:

(1)M蛋白與其抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物,沉積于

腎小球基底膜引起Ⅲ型超敏反應(yīng)

(2)鏈球菌的某些抗原與腎小球基底膜有共同抗

原，機(jī)體針對(duì)鏈球菌所產(chǎn)生的抗體與腎小球

基底膜發(fā)生反應(yīng)，引發(fā)基底膜損傷，屬Ⅱ型

變態(tài)反應(yīng)。

風(fēng)濕熱:咽炎后發(fā)生，以關(guān)節(jié)炎、心肌炎為主。

※發(fā)病機(jī)59甲型鏈球菌人類(lèi)口腔和上呼吸道的正常菌群，在拔牙或摘除扁桃體時(shí)，寄居在口腔、齦縫中的草綠色鏈球菌可侵入血流引起菌血癥。若心臟瓣膜已有缺陷或損傷，本菌可在損傷部位繁殖，引起亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎。

變異鏈球菌與齲齒有關(guān)D群鏈球菌條件致病菌，正常寄居于皮膚、上呼吸道、消化道、泌尿生殖道?？梢鹉蚵犯腥?、腹部感染、敗血癥、心內(nèi)膜炎。B群鏈球菌條件致病菌，正常寄居于直腸、陰道、鼻咽部?？梢鹌つw感染、心內(nèi)膜炎、產(chǎn)后感染、新生兒敗血癥和新生兒腦膜炎。甲型鏈球菌人類(lèi)口腔和上呼吸道的正常菌群，在拔牙或摘除扁桃體時(shí)60豬鏈球菌病

急性的常為出血性敗血癥和腦炎，慢性的以關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎為特點(diǎn)，臨床上以淋巴結(jié)膿腫為常見(jiàn)。一年四季均可發(fā)生，以5—11月份較多。常為地方性流行，多呈敗血型，如不進(jìn)行防治，則發(fā)病率、病死率很高，病豬和帶菌豬是主要傳染源，可以通過(guò)傷口、消化道、呼吸道等途徑傳染給人。

豬鏈球菌病屬?lài)?guó)家規(guī)定的二類(lèi)動(dòng)物疫病，是一種人畜共患傳染病。豬鏈球菌病

豬鏈球菌病屬?lài)?guó)家規(guī)定的二類(lèi)動(dòng)物疫病，是一種人61（三）免疫性A群鏈球菌感染后，可產(chǎn)生特異免疫抗M蛋白抗體（IgG）有保護(hù)作用，同時(shí)可能引發(fā)超敏反應(yīng)性疾病型別間無(wú)交叉免疫，故常反復(fù)感染猩紅熱患者可建立牢固的同型抗毒素免疫（三）免疫性A群鏈球菌感染后，可產(chǎn)生特異免疫62三、微生物學(xué)檢查法標(biāo)本直接涂片革蘭染色鏡檢分離培養(yǎng)取可疑菌落鑒定試驗(yàn)和藥敏試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告三、微生物學(xué)檢查法標(biāo)本直接涂片分離培養(yǎng)取可疑菌落鑒定試驗(yàn)和藥63膿、痰、咽拭腦脊液血液增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)直接涂片染色※觀察菌落及溶血現(xiàn)象※觸酶試驗(yàn)（－）※

Optochin敏感試驗(yàn)肺炎鏈球菌B群鏈球菌馬尿酸鈉水解試驗(yàn)?zāi)懼呷~苷A群鏈球菌D群鏈球菌腸球菌6.5％NaCl血清學(xué)分類(lèi)※

ASO

test風(fēng)濕熱膿、痰、咽拭腦脊液血液增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)直接涂片染色※觀察菌落64血清學(xué)檢查抗“O”試驗(yàn)（ASOtest）：鏈球菌侵入體內(nèi)產(chǎn)生SLO，刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體ASO，當(dāng)兩者中和后，在加入SLO乳膠試劑，因病人血清中ASO量很多，未被中和掉的抗體與乳膠試劑反應(yīng)，產(chǎn)生清晰凝集，為陽(yáng)性；無(wú)凝集，為陰性。原理：中和試驗(yàn)方法：間接凝集結(jié)果：※效價(jià)大于400單位意義：※鏈球菌新近感染的指標(biāo)、

風(fēng)濕熱及其活動(dòng)性的輔助診斷血清學(xué)檢查抗“O”試驗(yàn)（ASOtest）：鏈球菌侵入體內(nèi)產(chǎn)65預(yù)防

與葡萄球菌相似，對(duì)病人和帶菌者及時(shí)治療，減少傳染源空氣、器械、敷料等注意消毒。

流行期間每月注射長(zhǎng)效青霉素

※對(duì)急性咽峽炎和扁桃體炎患者，尤其是兒童，須治療徹底，

防止變態(tài)反應(yīng)疾病的發(fā)生治療

※青霉素、紅霉素、磺胺藥、林可霉素，青霉素首選。特殊治療：外科清創(chuàng)，抗休克，抗毒素。四、防治原則預(yù)防與葡萄球菌相似，對(duì)病人和帶菌者及時(shí)治療，減少傳染66總結(jié)1、金黃色葡萄球菌與鏈球菌如何鑒別？2、鏈球菌的致病物質(zhì)有哪些？3、金黃色葡萄球菌與鏈球菌所引起的化膿性

感染有什么區(qū)別？原因是什么？4、什么是ASOtest？有何意義？5、A群鏈球菌可引起哪些疾病？6、鏈球菌如何分類(lèi)？?總結(jié)1、金黃色葡萄球菌與鏈球菌如何鑒別？?67有關(guān)鑒別試驗(yàn)附加內(nèi)容(一)溶血性檢查

溶血性是鑒定球菌最常用的項(xiàng)目，也是鑒定過(guò)程中重要的一步。1919年Brown對(duì)溶血性進(jìn)行了描述。溶血性的識(shí)別可在血平板表面菌落周?chē)痛┐烫幫ㄟ^(guò)肉眼觀察，也可用顯微鏡觀察。除在分離血平板上觀察菌落周?chē)娜苎酝?，還可用以下方法確認(rèn)。

材料：羊血平板。

方法：將標(biāo)本接種于羊血平板上，用接種針在已接種過(guò)的血平板上扎2～3處，使細(xì)菌被接種到瓊脂層深處，35℃孵育過(guò)夜。

觀察結(jié)果：在接種針穿刺過(guò)處，羊紅細(xì)胞完全溶解，形成無(wú)色透明區(qū)，為β溶血。羊紅細(xì)胞部分溶解或不溶解呈草綠色的環(huán)，為α溶血。不溶解無(wú)溶血環(huán)為γ溶血。(二)

Optochin敏感試驗(yàn)

材料：Optochin

(ethylhydrocupreine

HCI。)紙片(直徑6mm)，每片含5μg。血平板。

方法：挑取被檢菌落，涂在血平板上，貼

Optochin紙片于接種處，35℃，燭缸孵育18h。

觀察結(jié)果：抑菌環(huán)直徑≥14mm為敏感，推斷肺炎鏈球菌。

抑菌環(huán)直徑≤14mm時(shí)參照膽汁溶菌，或?yàn)槠渌菥G色鏈球菌。(三)

桿菌肽敏感試驗(yàn)

材料：含0.04U／片的桿菌肽紙片，血平板。

方法：挑取被檢菌落，密涂于血平板上，接種量應(yīng)大，以免出假陽(yáng)性。貼上桿菌肽紙片，35℃過(guò)夜。

觀察結(jié)果：形成抑菌環(huán)為敏感，則被檢菌推斷為A群鏈球菌。有關(guān)鑒別試驗(yàn)附加內(nèi)容(一)溶血性檢查

溶血性是鑒定球菌最常68有關(guān)鑒別試驗(yàn)附加內(nèi)容(四)

CAMP試驗(yàn)

材料：血平板，金黃色葡萄球菌

ATCC25923。

方法：在血平板上，用金黃色葡萄球菌劃種一條直線，再將被檢菌距金黃色葡萄球菌

3mm處垂直接種一短線。用同樣方法接種陰性和陽(yáng)性對(duì)照菌。35℃孵育過(guò)夜。

觀察結(jié)果：在被檢菌接種線與金葡菌接種線之間有一個(gè)矢形(半月形)加強(qiáng)溶血區(qū)，此即CAMP試驗(yàn)陽(yáng)性。陰性無(wú)加強(qiáng)溶血區(qū)。(五)

膽汁-七葉苷試驗(yàn)(平皿法或斜面法)

培養(yǎng)基：牛肉膏3g七葉苷1g蛋白胨5g枸櫞酸鐵0.5g膽鹽40g蒸餾水

1000ml瓊脂

1％

牛肉膏、蛋白胨和瓊脂溶于400ml蒸餾水中，膽鹽溶于400ml蒸餾水中，枸櫞酸鐵溶于l00ml蒸餾水中，三者混合，加熱充分溶解后，高壓滅菌121℃

15min。七葉苷溶于l00ml蒸餾水，過(guò)濾除菌，以無(wú)菌手續(xù)加到培養(yǎng)基中，傾倒平皿或斜面。

方法：接種被檢菌1—3個(gè)菌落，涂劃開(kāi)，置35℃下，孵育24～48h。

觀察結(jié)果：培養(yǎng)基變黑色或棕褐色為陽(yáng)性，不變色為陰性。

注意事項(xiàng)：接種細(xì)菌量不能過(guò)大。本試驗(yàn)是測(cè)定細(xì)菌在膽鹽中生長(zhǎng)情況及同時(shí)分解七葉苷的能力，如接種菌量過(guò)大，細(xì)菌不需要生長(zhǎng)而本身固有的酶足以造成七葉苷分解，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。(六）馬尿酸鈉水解試驗(yàn)

(1)原理：某些細(xì)菌可具有馬尿酸水解酶，可使馬尿酸水解為苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸與三氯化鐵試劑結(jié)合，形成苯甲酸鐵沉淀。

(2)方法：將待檢菌接種于馬尿酸鈉培養(yǎng)基中，置35℃孵育48h，離心沉淀，取上清液0.8ml，加入三氯化鐵試劑0.2ml，立即混勻，經(jīng)10~15min觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：出現(xiàn)恒定之沉淀物為陽(yáng)性。

應(yīng)用：主要用于B群鏈球菌的鑒定。有關(guān)鑒別試驗(yàn)附加內(nèi)容(四)

CAMP試驗(yàn)

材料：血平板，金69有關(guān)鑒別試驗(yàn)附加內(nèi)容(七)七葉苷試驗(yàn)

培養(yǎng)基：蛋白胨

5g七葉苷

3gK2HPO4

1g枸櫞酸鐵

0.5g蒸餾水

1000ml

將上述成分加熱溶解，分裝試管，高壓滅菌12rClomin。

方法：接種被檢菌于培養(yǎng)基中，35℃過(guò)夜。

觀察結(jié)果：培養(yǎng)基變黑為陽(yáng)性，不變?yōu)殛幮浴?八)

6.5％NaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)

培養(yǎng)基

NaCl6.5g牛肉粉0.3g葡萄糖0.1g蛋白胨1g瓊脂粉

1.8g蒸餾水

l00ml溴甲酚紫指示劑適量

調(diào)整pH7.4，121℃

15min滅菌后制成平皿或斜面。

方法：接種被檢菌，35℃孵育過(guò)夜。

觀察結(jié)果：培養(yǎng)基上生長(zhǎng)出菌落并變黃色為陽(yáng)性，不變色為陰性。

注意點(diǎn)：本試驗(yàn)是測(cè)定細(xì)菌在高鹽中的生長(zhǎng)能力，葡萄糖作為是否生長(zhǎng)的指示劑。細(xì)菌接種量不能過(guò)大，否則細(xì)菌并不需要繁殖即可使葡萄糖產(chǎn)酸，培養(yǎng)基變色，導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。(九)

色素試驗(yàn)

色素試驗(yàn)在鑒定B群鏈球菌的幾個(gè)方法中，特異性最好。這是Noble改良的Islam法。

培養(yǎng)基：淀粉10g胨23.0gNaH2PO41.48gNa2HP045.75g瓊脂

l0g水

1000ml

調(diào)pH7.4，121℃15min滅菌后，加入

10ml滅活馬血清，傾制平板或高層瓊脂。接種細(xì)菌，35℃過(guò)夜培養(yǎng)。

觀察結(jié)果：細(xì)菌菌落及周?chē)呐囵B(yǎng)基呈黃色為陽(yáng)性。

有關(guān)鑒別試驗(yàn)附加內(nèi)容70病例3

男，20歲，學(xué)生。酗酒后遭雨淋，于當(dāng)天晚上突然起病，寒顫、高熱、呼吸困難、胸痛，繼而咳嗽，咳鐵銹色痰。聽(tīng)診，左肺下葉有大量濕性啰音；觸診語(yǔ)顫增強(qiáng)；血常規(guī)：WBC：17X109/L（4-10X109/L）；X線檢查，左肺下葉有大片致密陰影。經(jīng)抗生素治療，病情好轉(zhuǎn)，各種癥狀逐漸消失；X線檢查，左肺下葉的大片致密陰影縮小2/3面積。于入院后第7天自感無(wú)癥狀出院。1、患者發(fā)生了什么疾??？

2、從微生物學(xué)角度應(yīng)該進(jìn)行哪些檢驗(yàn)以確定診斷？

病例3

男，20歲，學(xué)生。酗酒后71

第三節(jié)肺炎鏈球菌（S.pneumoniae）寄居于人的鼻咽腔中，一般不致病。

機(jī)體免疫力下降時(shí)可引起※細(xì)菌性肺炎。矛頭狀：平面相對(duì)尖面相背一、生物學(xué)性狀

１、形態(tài)與染色

※有厚莢膜G+雙球菌，病變組織中：?jiǎn)蝹€(gè)或短鏈

無(wú)芽胞無(wú)鞭毛第三節(jié)肺炎鏈球菌（S.pneumoniae）矛72肺炎鏈球菌電鏡圖ScanningElectronMicrograph肺炎鏈球菌電鏡圖ScanningElectronMicr73分解葡萄糖，乳糖※菊糖（+）2、培養(yǎng)特性營(yíng)養(yǎng)要求較高，常用血培養(yǎng)，菌落灰白色細(xì)小半透明，與甲鏈相似，※周?chē)笑寥苎嘤龝r(shí)間＞48小時(shí)，※能產(chǎn)生自溶酶，菌落曾臍狀3、生化反應(yīng)

※膽汁溶菌（+）4、抗原結(jié)構(gòu)：莢膜多糖抗原（型特異性，90型）

菌體抗原（M蛋白、C多糖）

5、抵抗力：較弱分解葡萄糖，乳糖2、培養(yǎng)特性營(yíng)養(yǎng)要求較高，常用血培養(yǎng)，菌落灰74二、致病性與免疫性※莢膜→有莢膜菌株才能引起人致病

肺炎鏈球菌溶素O(pneumolysinO):

抑制中性粒細(xì)胞的趨化及吞噬作用

脂磷壁酸：粘附※建立較牢固的同型免疫產(chǎn)生型特異的莢膜多糖抗體※大葉性肺炎

肺炎可累及某一整個(gè)肺葉(大葉性肺炎)；某一肺葉的某一肺段(段性或小葉性肺炎)；鄰近支氣管的肺泡(支氣管肺炎)或間質(zhì)組織(間質(zhì)性肺炎)。這些區(qū)別一般根據(jù)X線表現(xiàn)劃分。中耳炎、乳突炎、副鼻竇炎、

腦膜炎、敗血癥

（二）所致疾?。ㄈ┟庖咝裕ㄒ唬┲虏∥镔|(zhì)二、致病性與免疫性※莢膜→有莢膜菌株才能引起人致病

肺炎鏈球75三、微生物學(xué)檢查方法方法:取標(biāo)本直接涂片,革蘭染色后鏡檢初步報(bào)告:“查見(jiàn)革蘭陽(yáng)性矛尖狀雙球菌，有莢膜，疑似肺炎鏈球菌”分離培養(yǎng)與鑒定：血平板→可以菌落→膽汁溶菌試驗(yàn)、菊糖發(fā)酵試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)：

有毒力肺炎球菌

高度易感小鼠，

24h死亡。甲鏈

小鼠不死亡。

三、微生物學(xué)檢查方法方法:取標(biāo)本直接涂片,革蘭染色后鏡76※肺炎鏈球菌與甲型溶血性鏈球菌鑒別菌名形態(tài)菌落膽汁溶菌Optochin菊糖分解小白鼠毒力肺鏈矛尖狀、成雙排列、有莢膜臍窩狀、草綠色溶血環(huán)+++/－+甲鏈圓形、短鏈、無(wú)莢膜針尖狀、草綠色溶血環(huán)－－－－※肺炎鏈球菌與甲型溶血性鏈球菌鑒別菌名形態(tài)菌落膽汁Optoc77四、防治原則：多價(jià)肺炎球菌莢膜多糖疫苗

（含有23個(gè)型別）根據(jù)藥敏試驗(yàn)選擇抗生素四、防治原則：多價(jià)肺炎球菌莢膜多糖疫苗

（含有23個(gè)型別）根78總結(jié)肺炎鏈球菌結(jié)構(gòu)特點(diǎn)？培養(yǎng)特點(diǎn)？如何區(qū)別肺炎鏈球菌與甲型溶血性鏈球菌？肺炎鏈球菌主要的致病物質(zhì)是什么？可引起什么疾??？?總結(jié)肺炎鏈球菌結(jié)構(gòu)特點(diǎn)？培養(yǎng)特點(diǎn)？?79病例4男性，2歲，于2天前發(fā)熱達(dá)39℃，伴哭鬧，易激惹，嘔吐2次，噴射性，以“發(fā)熱嘔吐”待查收入院。近2天來(lái)精神萎靡，二便正常，吃奶稍差。查體:T39.2℃，右眼結(jié)膜及全身皮膚有針頭至綠豆大小不等的紅色出血點(diǎn)，咽微紅，精神差，易激惹，前囟張力稍高，眼神欠靈活，頸硬。腦脊液檢查：外觀混濁，白細(xì)胞總數(shù)22×109/L，中性多核粒細(xì)胞96%，淋巴細(xì)胞4%。將腦脊液離心沉淀后取沉渣涂片，革蘭染色檢查，發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞內(nèi)外均有革蘭陰性雙球菌?？耸险?+)。（屈髓伸膝試驗(yàn)，患者仰臥位使膝關(guān)節(jié)屈曲成直角，然后被動(dòng)使屈曲的小腿伸直，當(dāng)膝關(guān)節(jié)不能伸直，出現(xiàn)阻力及疼痛而膝關(guān)節(jié)形成的角度不到135°時(shí)為克氏征陽(yáng)性）。

1、引起本病最可能的病菌是什么？2、該菌是如何傳播的？所致疾病怎樣進(jìn)行特異性預(yù)防？

病例4男性，2歲，于2天前發(fā)熱達(dá)39℃，伴哭鬧，易激80第四節(jié)腦膜炎奈瑟菌(Neisseriameningitidis)

一、生物學(xué)性狀

1、形態(tài)與染色G-雙球菌，無(wú)鞭毛，無(wú)芽胞，新分離株大多有莢膜和菌毛；※在患者