hiv檢測實驗室生物安全及質(zhì)量控制課件

HIV檢測實驗室生物安全及質(zhì)量控制

咸寧市中心血站佘朝暉

HIV檢測實驗室生物安全及質(zhì)量控制

12實驗室生物安全及評估國際實驗室生物安全發(fā)展概況LaboratoryBiosafetyManual1stedition19831993200320042實驗室生物安全及評估國際實驗室生物安全發(fā)展概況Labora2實驗室生物安全及評估國際實驗室生物安全發(fā)展概況在20世紀50一60年代首先出現(xiàn)在美國；1983年WHO出版了《實驗室生物安全手冊》(第一版)(LaboratoryBiosafetyManual)，1993年出現(xiàn)第二版，直到2004年出第三版。實驗室生物安全及評估國際實驗室生物安全發(fā)展概況3實驗室生物安全及評估國內(nèi)實驗室生物安全發(fā)展概況

(一)起步

1987年，為了研究流行性出血熱的傳播途徑，軍事醫(yī)學科學院和天津一家生物凈化公司合作修建了我國第一個國產(chǎn)三級生物安全防護水平(biosafetylevel3，BSL-3)實驗室；2002年12月，經(jīng)衛(wèi)生部批準并頒布了行業(yè)標準《微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全通用準則》(WS233-2002)；實驗室生物安全及評估國內(nèi)實驗室生物安全發(fā)展概況4實驗室生物安全及評估國內(nèi)實驗室生物安全發(fā)展概況

(二)SARS期間

2003年5月6日，科技部、衛(wèi)生部、國家食品藥品監(jiān)督管理局和國家環(huán)境保護總局聯(lián)合發(fā)布了關(guān)于印發(fā)《傳染性非典型肺炎病毒研究實驗室暫行管理辦法》的通知。其內(nèi)容包括《傳染性非典型肺炎病毒研究實驗暫行管理辦法》和《傳染性非典型肺炎病毒的毒種保存、使用和感染動物模型的暫行管理辦法》。實驗室生物安全及評估國內(nèi)實驗室生物安全發(fā)展概況5實驗室生物安全及評估國內(nèi)實驗室生物安全發(fā)展概況

(三)第一個實驗室生物安全國家標準

2003年8月開始，在國家科技部、衛(wèi)生部、農(nóng)業(yè)部等的支持下，由國家實驗室認證認可委(ChinaNationalAccreditationBoardforLaboratories，CNAL)牽頭，組織生物安全專家開始起草國家標準《實驗室生物安全通用要求》。2004年9月1日建設部與國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局又聯(lián)合發(fā)布了《生物安全實驗室建設技術(shù)規(guī)范》(GB50346-2004)，提出了生物安全實驗室建設的技術(shù)標準。實驗室生物安全及評估國內(nèi)實驗室生物安全發(fā)展概況6實驗室生物安全及評估國內(nèi)實驗室生物安全發(fā)展概況(四)《病原微生物實驗室生物安全管理條例》

2004年11月12日，由溫家寶總理簽發(fā)的中華人民共和國國務院令(第424號)公布施行了《病原微生物實驗室生物安全管理條例》(簡稱《條例》)。2004年5月，國家認證認可監(jiān)督管理委員會和科技部聯(lián)合提出并委托中國實驗室國家認可委員會（CNAL）制訂了國家強制性標準《GB19489-2004--實驗室生物安全通用要求》，為規(guī)范我國的實驗室生物安全管理提供了科學的技術(shù)規(guī)范；2008年進行了修訂再版。

2005年7月26日，武漢大學生物安全三級動物實驗室首家獲國家認可。實驗室生物安全及評估國內(nèi)實驗室生物安全發(fā)展概況7實驗室生物安全及評估國內(nèi)實驗室生物安全發(fā)展概況(五)現(xiàn)狀和展望

當前，國際上，特別是WHO對生物醫(yī)學實驗室的生物安全比較重視。我們各種等級實驗室的建設應該有一個適當比例，應該普及推廣BSL-2實驗室，根據(jù)需要適當建設BSL-3實驗室，特殊需要的建設BSL-4實驗室，要有一個合理的宏觀布局。實驗室生物安全及評估國內(nèi)實驗室生物安全發(fā)展概況8實驗室生物安全及評估病原微生物分類

第一類病原微生物，是指能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。第二類病原微生物，是指能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。第三類病原微生物，是指能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預防措施的微生物。第四類病原微生物，是指在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。

第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物實驗室生物安全及評估病原微生物分類9實驗室生物安全及評估各國病原微生物危險分級組織 對象 低←病原微生物→高 WHO 病原微生物 1 2 3 4 美國 病原微生物 1 2 3 4 日本 微生物病毒 1 2a 2b 3a 3b 4a 4b英國 病原微生物 C B A 中國 病原微生物 4 3 2

1 實驗室生物安全及評估各國病原微生物危險分級10實驗室生物安全及評估生物安全實驗室

㈠生物安全實驗室慨念

1、通過規(guī)范的實驗室設計建造、實驗設備的配置、個人防護裝備的使用（硬件）。2、嚴格遵從標準化的操作程序和管理規(guī)程等（軟件）3、確保操作生物危險因子的工作人員不受實驗對象的傷害，確保周圍環(huán)境不受其污染,確保實驗因子保持原有本性所采取綜合措施的實驗室。（目的）

實驗室生物安全及評估生物安全實驗室11實驗室生物安全及評估生物安全實驗室

㈡分級

根據(jù)實驗室所處理對象的生物危害程度和采取的防護措施，把生物安全實驗室分為四級，其中一級對生物安全隔離的要求最低，四級最高。一般以BSL－1、BSL－2、BSL－3、BSL－4表示實驗室相應的生物安全防護水平。實驗室生物安全及評估生物安全實驗室12實驗室生物安全及評估生物安全實驗室

㈢目的

1、確保操作生物危險因子的工作人員不受實驗對象的傷害---人2、確保周圍環(huán)境不受其污染---環(huán)境3、確保實驗因子保持原有本性（不受污染）---物實驗室生物安全及評估生物安全實驗室13實驗室生物安全及評估生物安全實驗室

㈣三道屏障：

1、生物安全設備和個體防護裝置；2、實驗室設施，實驗室特殊設計和建設要求；3、實驗室管理制度（軟件部分）。包括標準化操作程序和嚴格實驗室管理。實驗室生物安全及評估生物安全實驗室14實驗室生物安全及評估生物安全實驗室組織管理要求㈠實驗室所在機構(gòu)應設立生物安全委員會，實驗室安全負責人是安全委員會委員，該實驗室管理層有責任確保安全檢查的執(zhí)行。每年應對工作場所進行不定期抽查，例行檢查每年至少一次。檢查內(nèi)容包括：

1、應急裝備、警報體系和撤離程序功能及狀態(tài)正常。2、用于危險物質(zhì)漏出控制的程序和物品狀態(tài)正常。3、對可燃易燃性、可傳染性、放射性和有毒物質(zhì)的存放進行適當防護和控制；污染和廢棄物處理程序的狀態(tài)。4、實驗室設施、設備、人員的狀態(tài)正常5、實驗室各項操作規(guī)程與管理制度正確實施。實驗室生物安全及評估生物安全實驗室組織管理要求15實驗室生物安全及評估生物安全實驗室組織管理要求㈡實驗室負責人為實驗室安全第一責任人，可任命一名有適當資質(zhì)和經(jīng)驗的實驗室安全負責人來協(xié)助管理安全事宜。實驗室負責人對所有實驗室員工和實驗室來訪者的安全負責。㈢實驗室安全負責人應對實驗室以及實驗人員進行日常管理監(jiān)督。㈣信息安全及保密制度：與HIV/AIDS檢測相關(guān)的所有資料均應嚴格保密，包括送檢單、檢測記錄、樣品登記、報告單及工作人員年度檢測結(jié)果等，不得對無關(guān)人員透露檢測結(jié)果。實驗室生物安全及評估生物安全實驗室組織管理要求16實驗室生物安全及評估生物安全實驗室組織管理要求（五）制定、維護和監(jiān)督有效的實驗室安全計劃。該安全計劃應包括教育及培訓、審核及評估、促進實驗室安全行為的程序。（六）有權(quán)阻止不安全的活動。實驗室負責人應制定規(guī)定和程序確保實驗室設施、設備、個人防護設備、材料等符合國家有關(guān)安全要求，定期檢查、維護、更新，確保不降低其設計性能。（七）確保提供實驗室人員適當?shù)膶嶒炇野踩矫妫ㄈ鐫撛谖：π裕Ｗo暴露者必要的注意事項以及暴露評估程序）的培訓。實驗室人員必須接受年度最新的補充培訓以了解操作規(guī)程和政策的變化。（八）定期或不定期組織進行實驗室安全自查，對于自查情況應有記錄，對重大生物安全隱患或發(fā)現(xiàn)問題應立即向上級生物安全委員會匯報，對發(fā)現(xiàn)問題應有整改與復查措施。實驗室生物安全及評估生物安全實驗室組織管理要求17實驗室生物安全及評估實驗室人員管理要求㈠實驗室所在單位人事部門、生物安全委員會負責：實驗室人員的組織管理、上崗資格認定、培訓、崗位制定和準入標準。㈡負責成立實驗室人員考核工作組，制定分類的考核標準，定期對實驗室人員基本知識、操作技能、生物安全進行考核與評價。實驗室生物安全及評估實驗室人員管理要求18實驗室生物安全及評估生物安全實驗室化學品安全管理要求化學品安全應符合以下要求：

①在實驗室中，對化學品的存放、處理、使用及處置的規(guī)定和程序均應符合良好化學實驗室行為標準。應按照相關(guān)標準在每個儲存容器上標明每個產(chǎn)品的危害性和風險性，還應在“使用中”材料的器上清楚標明。②對化學、物理及火災危害應有足夠可行的控制措施。應定期對這些措施進行監(jiān)督以確保其有效可用。應保存監(jiān)督結(jié)果記錄。實驗室生物安全及評估生物安全實驗室化學品安全管理要求19實驗室生物安全及評估生物安全實驗室緊急事故處理㈠實驗室負責人負責制定應對涉及本科室及工作的意外事故應急處理程序和預案，報生物安全委員會備案；并制定專人負責應對意外事故應急處理所需的設備材料的保管和維護。實驗室人員應熟記緊急情況下的正確應對措施。㈡實驗中發(fā)現(xiàn)異常情況應及時向?qū)嶒炇邑撠熑藞蟾?，并立即采取控制措施；同時做好詳細的記錄。實驗室發(fā)生安全事故時，應視事故類型等不同情況，進行緊急處理，并詳細記錄事故經(jīng)過，按規(guī)定報告生物安全委員會。實驗室生物安全及評估生物安全實驗室緊急事故處理20實驗室生物安全及評估生物安全實驗室緊急事故處理㈢應制定緊急撤離的行動方案。該方案應考慮到生物性、化學性、失火和其他緊急情況。應包括所采取的使留下的建筑物處于盡可能安全狀態(tài)的措施。所有實驗室人員都應了解緊急撤離的行動方案、撤離路線和緊急撤離的集合地點。每年至少一次演習。㈣實驗室負責人應備有用于急救的物品儲備（如急救藥箱，包括普通和特殊的解毒劑等。實驗室生物安全及評估生物安全實驗室緊急事故處理21實驗室生物安全及評估生物安全柜（BiosafetyCabinet,BSC)

負壓過濾排風柜：在生物因子操作過程中用來保護操作人員、環(huán)境和（或）實驗物品，防止其暴露于實驗中（可能）產(chǎn)生的危險性或潛在危險性生物氣溶膠或濺出物。是病原微生物實驗室的重要設備，是“病原體操作的一級安全隔離屏障”，關(guān)系生命安全和環(huán)境安全，要求非常嚴格。實驗室生物安全及評估生物安全柜（BiosafetyCabi22實驗室生物安全及評估生物安全柜（BiosafetyCabinet,BSC)實驗室生物安全及評估生物安全柜（BiosafetyCabi2324保護類型及生物安全柜的選擇24保護類型及生物安全柜的選擇24實驗室生物安全及評估生物安全柜（BiosafetyCabinet,BSC)

㈠生物安全柜擺放位置1、與其它操作區(qū)域相分離；2、遠離主要通道；3、與氣道有一定距離；4、與實驗室入口保持一定距離。實驗室生物安全及評估生物安全柜（BiosafetyCabi25實驗室生物安全及評估安全柜的檢驗

㈠安裝檢驗

1、下降氣流流速、流入氣流流速、氣流模式過濾器泄漏警報和聯(lián)鎖功能2、排氣系統(tǒng)性能（負壓排氣壓力和排氣罩性能）3、照度、噪聲、振動、漏電流、接地電阻實驗室生物安全及評估安全柜的檢驗26實驗室生物安全及評估安全柜的檢驗

㈡維護檢驗1、更換過濾器和安全柜內(nèi)部維修2、使用的安全柜每年進行驗證3、檢驗項目與安裝檢驗相同實驗室生物安全及評估安全柜的檢驗27實驗室生物安全及評估安全柜的檢驗

㈢檢測周期1、實驗室施工時，Ⅱ級生物安全柜搬放到指定位置后。

2、Ⅱ級生物安全柜被移動位置后。3、對Ⅱ級生物安全柜進行檢修后。

4、Ⅱ級生物安全柜更換高效過濾器后。

5、Ⅱ級生物安全柜一年一度的常規(guī)現(xiàn)場檢測。實驗室生物安全及評估安全柜的檢驗28實驗室生物安全及評估生物安全柜操作注意事項

1、工作臺內(nèi)不應存放過多器具，當使用旋轉(zhuǎn)、震蕩或加熱器具時，應盡可能把這些器具置于操作區(qū)的后端，這樣就可以減少通道口的湍流現(xiàn)象；2、不可隨便改變鼓風機的風速，除非通過檢測空氣速度確實降低了方可進行；3、切勿用操作臺來儲藏設備或?qū)嶒炇移骶撸?、不要阻塞空氣入口格網(wǎng)；5、不要在操作臺內(nèi)使用有毒、易燃或易爆等高度危物；6、操作前后應對臺面進行消毒；7、應對安全柜定期進行檢查、維修。實驗室生物安全及評估生物安全柜操作注意事項29實驗室生物安全及評估生物安全柜內(nèi)感染性材料溢灑的處理

1、當發(fā)生少量溢灑時，應用吸收紙巾立即處理，并立即用浸滿消毒液的毛巾或紗布對生物安全柜及其內(nèi)部的所有物品進行擦洗。工作面消毒后應更換手套，不論是摘下手套還是更換手套都要洗手。2、若發(fā)生大量溢灑，液體會通過生物安全柜前面或后面的格柵流到下面去，生物安全柜內(nèi)所有的物品都應該進行表面消毒并拿出生物安全柜，在確保生物安全柜的排水閥被關(guān)閉后，可將消毒液倒在工作臺面上，使液體通過格柵流到排水盤上。所有接觸溢出物品的材料都要進行消毒和/或高壓滅菌處理。實驗室生物安全及評估生物安全柜內(nèi)感染性材料溢灑的處理30實驗室生物安全及評估生物安全柜消毒

㈠表面消毒1、工作完成時，所有的容器和設備應該進行表面消毒并拿出安全柜。在每天工作結(jié)束時，應該對安全柜進行最后的表面消毒，包括工作臺面、安全柜的邊壁、后壁和觀察窗玻璃內(nèi)部的擦拭。如果必要，安全柜也應該進行放射性檢測并進行必要的消毒。2、作為安全的微生物學操作的最后步驟，操作者應該摘下手套、脫下工作服并且洗手。㈡氣體消毒在更換HEPA過濾器或進行內(nèi)部維修之前要對生物安全柜必須進行消毒。實驗室生物安全及評估生物安全柜消毒31實驗室生物安全及評估生物安全柜的日常維護

1.定期清潔操作臺面和前窗玻璃2.保持實驗室內(nèi)空氣質(zhì)量,延長高效過濾器的使用壽命3.定期檢測紫外燈的照射強度,及時更換燈管4.長期不用應定期進行維護性運行高效過濾器應定期檢測,及時更換.5.做好使用和維護記錄.實驗室生物安全及評估生物安全柜的日常維護32實驗室生物安全及評估生物危害評估1、生物安全危害評估是指實驗室工作人員處理致病微生物及其毒素時，對可能給人或環(huán)境帶來的危害所進行的評估，包括對微生物危險性和防護屏障的評估。2、生物危害評估原則和依據(jù)是根據(jù)生物因子的種類、來源、傳染性、致病性、傳播途徑、在環(huán)境中的穩(wěn)定性、感染劑量、濃度、動物實驗數(shù)據(jù)有效的預防和治療方法等諸因素進行生物危害評估。3、危害評估是為了確定某種微生物實驗過程中的危險所在，危險性大小，以及如何避免和防護危險的發(fā)生，達到保護人、物和環(huán)境的目的。4、根據(jù)衛(wèi)生部病原微生物危害等級分類，艾滋病毒屬第二類高致病性病原微生物（國際危險程度為Ⅲ級）5、根據(jù)危害評估結(jié)果，制定相應的操作規(guī)程、實驗室管理制度和緊急事故處理辦法，必須形成書面文件并嚴格遵守執(zhí)行。在新增加實驗內(nèi)容時應對該實驗進行危險度評估；及時收集與危險程度相關(guān)的新資料以及來自科學文獻的其他相關(guān)的新信息，以便必要時對危險度評估結(jié)果進行定期檢查和修訂。實驗室生物安全及評估生物危害評估33實驗室生物安全及評估

艾滋病毒在衛(wèi)生部《名錄》中的分類

（“衛(wèi)生部關(guān)于印發(fā)《人間傳染的病原微生物名錄》的通知”衛(wèi)科教發(fā)[2006]15號）實驗室生物安全及評估艾滋病毒在衛(wèi)生部《名錄》中的34實驗室生物安全及評估HIV相關(guān)檢測的生物安全級別

(一)HIV抗體檢測（包括篩查和確證實驗）、抗原檢測和相關(guān)的免疫學檢測應在符合Ⅱ級生物安全實驗室（BSL-2）要求的艾滋病檢測實驗室中進行。（二）HIV分離培養(yǎng)、濃縮、中和試驗、細胞培養(yǎng)及研究工作及其它需要應用活病毒的研究工作，應在Ⅲ級生物安全實驗室（BSL-3）中進行。實驗室生物安全及評估HIV相關(guān)檢測的生物安全級別(一)HI35實驗室生物安全及評估HIV相關(guān)檢測的生物安全級別（三）HIV核酸提取和檢測均應在符合Ⅱ級生物安全實驗室（BSL-2）要求的艾滋病檢測實驗室中進行。（四）HIV病毒株應保存在符合Ⅲ級生物安全實驗室（BSL-3）要求的艾滋病實驗室；HIV陽性樣品，包括全血、血清、血漿和其他組織（液）、核酸提取物應保存在符合BSL-2要求的艾滋病實驗室。實驗室生物安全及評估HIV相關(guān)檢測的生物安全級別（三）HIV36HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測實驗室的類型

（一）艾滋病檢測確證實驗室1、艾滋病確證中心實驗室2、艾滋病確證實驗室（二）艾滋病檢測篩查實驗室1、艾滋病篩查中心實驗室2、艾滋病篩查實驗室3、艾滋病檢測點HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測實驗室的類型37HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV篩查實驗室檢測方法

1、酶聯(lián)免疫試驗（ELISA）2、快速檢測（RT）及其它檢測：包括明膠顆粒凝集試驗（PA）、斑點EIA或稱斑點ELISA、斑點免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗、艾滋病唾液檢測卡、家庭HIV檢測。3、尿液HIV抗體檢測HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV篩查實驗室檢測方法38HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV確證實驗室檢測方法

包括免疫印跡試驗（WB）、條帶免疫試驗（LIATEKHIVⅢ）、放射免疫沉淀試驗（RIPA）及免疫熒光試驗（IFA）。

國內(nèi)常用的確認試驗方法是WB。HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV確證實驗室檢測方法39HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測其他輔助方法

1、HIV核酸定性檢測2、HIVRNA定量檢測3、CD4+和CD8+T淋巴細胞檢測4、HIVP24抗原檢測5、HIVRNA定量測定：包括逆轉(zhuǎn)錄PCR試驗（RT-PCR）、核酸序列擴增試驗（NASBA）、分支DNA雜交試驗（bDNA）HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測其他輔助方法40HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV實驗室質(zhì)量體系概述

ISO9001定義為：在質(zhì)量方面指揮和控制組織的管理體系，它具備了保證產(chǎn)品質(zhì)量的人力、物力，還要明確有關(guān)部門和人員的職責和權(quán)力，以及規(guī)定完成任務所必須的各項程序和活動。HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV實驗室質(zhì)量體系概述41HIV檢測質(zhì)量控制及報告

行業(yè)標準:《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標準》WS298-2008技術(shù)規(guī)范:《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》

（2009年修訂版）HIV檢測質(zhì)量控制及報告行業(yè)標準:42HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控

1、人員：是指實驗室負責人和血液檢測技術(shù)人員。

①實驗室負責人對實驗室運行和行政管理全面負責，確保血液檢測量

②血液檢測人員需經(jīng)過職業(yè)道德培訓保證血液檢測結(jié)果的真實性、可靠性和保密性

③檢測人員需接受血液檢測崗位職責相關(guān)文件的培訓和實踐技能的培訓，并有相應的培訓記錄；還必須經(jīng)過簽名和相關(guān)法律的培訓；檢測人員必須登記和保存簽名并定期更新和存檔；制定實驗室全員會議制定④有專人負責職業(yè)健康和安全衛(wèi)生；

⑤實驗室負責人和血液檢測技術(shù)人員都應具有相應的學歷要求；新增的技術(shù)人員要經(jīng)過滿足崗位需求的培訓和考核，合格后方能上崗。

HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控43HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控

2、設備：①設備的配置應能滿足血液檢測業(yè)務工作的需要并與其功能相適應②設備在投入使用前或維修后均應確認③設備在使用時應有使用和維護記錄④大型關(guān)鍵設備應具有唯一性標識并明確維護校準周期，檔案應由人管理有使用維護和校準記錄，停用或維修的設備也應有明顯的標志⑤關(guān)鍵設備在檢測過程中有不間斷電力供應和應急預案。⑥使用的儀器應符合國家相關(guān)標準⑦建立和實施儀器設備的評估、確認、維護、校準、和持續(xù)監(jiān)控等管理制度，以保證儀器設備符合預期使用要求。HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控44HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控

3、物料：①建立和實施血液檢測試劑與材料管理程序，包括試劑與材料的生產(chǎn)商和供應商的資質(zhì)評估

②建立試劑與材料的評估、選購、確認、保存、使用、監(jiān)控以及庫存管理程序

③物料須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準、在有效期內(nèi)的試劑，其中酶聯(lián)免疫試劑應批批檢合格。推薦使用臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的試劑

④建立和實施試劑的確認和庫存管理程序

HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控45HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控

4、方法：是指實驗室的檢查項目均應有相適應的檢測方法，這些檢測方法必須符合相關(guān)法律、法規(guī)和文件規(guī)定并在體系內(nèi)受控。HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控46HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控

5、環(huán)境：①分區(qū)：清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū)分開；實驗區(qū)和工作區(qū)分開，實驗室內(nèi)禁止進食、飲水、化妝等②實驗室溫濕度要符合要求③具有BSL-2級實驗室應有的相應配備和要求。如防蚊蠅、防水、具有密閉性、配備滅火器報警器、有沖淋設施和洗眼器和職業(yè)暴露相關(guān)的藥品等。④具有國際通用的生物危害標識、危險級別標識、授權(quán)人員方可進入標識等。⑤HIV實驗室應有HIV檢測相應資質(zhì)標志。HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控47HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控6、信息管理系統(tǒng)：①建立和使用血液檢測計算機信息管理系統(tǒng)，對從標本接收到檢測報告發(fā)出整個血液檢測過程實行計算機管理程序②嚴格控制非授權(quán)人員進入計算機系統(tǒng)，非法查詢、錄入和更改數(shù)據(jù)或檢測程序③血液檢測計算機管理軟件供應商應具備國家規(guī)定資質(zhì)④應建立和實施計算機管理系統(tǒng)使用的風險分析、培訓、確認和使用及使用后的評估程序⑤建立和實施發(fā)生意外事件的應急預案和恢復程序，確保血液檢測正常進行。

HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控48HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控7、受控：指從標本接收開始到報告的發(fā)放整個過程受控，每一份標本都具有可溯源性，確保所有血液檢測可以追溯到相應標本采集、運送、接收、檢測方法和過程、檢測結(jié)果、檢測報告與追蹤的整個過程。HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控49HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測過程管理

（一）標本的采集、保存和運送

1、采集：可采用血清、血漿、濾紙干血斑、唾液和尿液樣品。2、保存：⑴用于抗體檢測的血清或血漿樣品，應存放于-20℃以下，短期（1周）內(nèi)進行檢測的樣品可存放于2-8℃。⑵用于抗原和核酸檢測的血漿和血細胞樣品應凍存于-20℃以下，進行病毒RNA檢測的樣品如需保存3個月以上應置于-80℃⑶用于CD4+/CD8+T淋巴細胞測定的樣品不能長期保存，樣品采集時間超過48h則不可檢測。

HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測過程管理50HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測過程管理

3、運送：⑴實驗室間傳遞的樣品應為血清或血漿，除特殊情況外一般不運送全血。⑵應采用WHO提出的三級包裝系統(tǒng)：第一層容器：裝樣品，要求防滲漏。樣品應置于帶蓋的試管內(nèi)；試管上應有明顯的標記，標明樣品的編號或受檢者姓名、種類和采集時間。在試管的周圍應墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。隨樣品應附有送檢單，送檢單應與樣品分開放置。第二層容器：要求耐受性好、防滲漏、容納并保護第一層容器，可以裝若干個第一層容器。將試管裝入專用帶蓋的容器內(nèi)，容器的材料要易于消毒處理。第三層容器：放在一個運輸用外層包裝內(nèi)，應易于消毒。在第三層容器外面要貼標簽（數(shù)量，收、發(fā)件人）。⑶血清和血漿樣品應在2-8℃條件下由專人運送。用于CD4+/CD8+T淋巴細胞測定的樣品應在室溫下運送。每一包裝的體積以不超過50ml為宜。

⑷運送感染性材料必須有記錄。如分離血漿仍有困難，可直接將抗凝血-20℃以下凍存，采用冰壺冷藏運輸，避免凍融。HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測過程管理51HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測過程管理

（二）室內(nèi)質(zhì)控

1、實施室內(nèi)質(zhì)控應遵循的原則：①選擇S/CO值為1.5-4的弱陽性質(zhì)控品②常規(guī)精密性控制在CV<20%③質(zhì)控品與被檢標本在相同條件和相同時段檢測HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測過程管理52HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測過程管理

（二）室內(nèi)質(zhì)控

2、

Levey-Jennings質(zhì)控圖

①建立質(zhì)控圖：外部對照質(zhì)控物的平均值和標準差應建立在實驗室常規(guī)使用方法對質(zhì)控物重復測定的基礎上。一般采用在不同批次檢測取得至少20個數(shù)據(jù)；當20次數(shù)據(jù)滿后，用前20次的平均值、標準差和變異系數(shù)建立新框架統(tǒng)計。如試劑或質(zhì)控物批號改變，則需重新進行統(tǒng)計。HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測過程管理53HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測過程管理

（二）室內(nèi)質(zhì)控

2、

Levey-Jennings質(zhì)控圖②質(zhì)控規(guī)則：告警（12S）；失控（13S）；位移：連續(xù)幾次（35次）外部對照S/CO值都落在均值的一側(cè)則稱為位移，提示實驗條件發(fā)生了較大的變化；趨勢：連續(xù)幾次（57次）外部對照S/CO值幾乎按一個方向分布時稱為趨勢，通常由參數(shù)的緩慢改變引起。HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測過程管理54HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測過程管理

（二）室內(nèi)質(zhì)控

2、

Levey-Jennings質(zhì)控圖③注意：1、出現(xiàn)一次>2s范圍的變化時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。2、出現(xiàn)下列情況時，應暫停檢測查找原因：出現(xiàn)一次>3s范圍的變化、連續(xù)兩次出現(xiàn)同一方向2s范圍的變化、連續(xù)四次出現(xiàn)同一方向的1s范圍的變化、連續(xù)10次結(jié)果都在1s范圍內(nèi)，但落在均值線的同一側(cè)。HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測過程管理55HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測過程管理

（二）室內(nèi)質(zhì)控

3、“即刻法”質(zhì)控“即刻法”質(zhì)控方法的實質(zhì)是一種統(tǒng)計學方法，只要有3個以上的數(shù)據(jù)即可決定是否有異常值得存在。HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測過程管理56HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測過程管理(三)檢測前的管理1、試劑的確認和平衡2、設備運行狀態(tài)的確認3、實驗環(huán)境的確認4、標本的采集、運輸、交接、標識、處理是否符合檢測要求HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測過程管理57HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測過程管理(四)檢測中的管理1、實驗過程關(guān)鍵控制點的記錄2、嚴格按照標準操作規(guī)程進行操作HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測過程管理58HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測過程管理

（五）檢測報告的發(fā)布和HIV初篩陽性結(jié)果的上報報告發(fā)布前要對標本的檢驗過程和關(guān)鍵控制點進行檢查以及實驗的陰陽性對照結(jié)果和室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果是否在控，在控雙人復核無誤后簽署姓

名和時間才能發(fā)放；檢測報告應完整清晰。初篩

實驗呈陽性反應樣品的轉(zhuǎn)送如需送上級實驗室進

行復核，需要核對身份，補充個人信息（如姓名

和身份證號碼），必要時采集第二份血樣，持HIV

抗體篩查報告，送當?shù)匕滩『Y查中心實驗室或

直接送確證實驗室復檢。HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測過程管理59HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理

㈠概述質(zhì)量體系文件是描述質(zhì)量體系的一整套文件，是建立并保持質(zhì)量管理和質(zhì)量保證的重要基礎。建立并完善質(zhì)量體系文件是為了進一步明確職責與權(quán)限，協(xié)調(diào)各部門之間的關(guān)系時各項質(zhì)量活動能夠順利有效的實施。它在很大程度上時通過文件化的形式表現(xiàn)出來的，是規(guī)范實驗室檢驗達到質(zhì)量目標的質(zhì)量依據(jù)。HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理60HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理

㈡特點1、法規(guī)性：一旦批準實施，就必須認真執(zhí)行；文件如需修改，需按規(guī)定的程序執(zhí)行。2、唯一性：一個實驗室只能有唯一的質(zhì)量體系文件系統(tǒng)。3、適用性：實驗室根據(jù)各自的性質(zhì)任務和特點制定適合自身質(zhì)量方針和檢測工作特點需要的可操作性體系文件。4、見證性：體系文件的數(shù)據(jù)必須有法律辯護依據(jù)，因此，各項質(zhì)量活動應具有可溯源性。HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理61HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理

㈢編寫原則1、質(zhì)量體系文件需要有系統(tǒng)性和協(xié)調(diào)性。2、質(zhì)量體系文件的編寫要符合法律、法規(guī)的要求。3、質(zhì)量手冊由質(zhì)量管理部門編制，由最高管理者發(fā)布；程序文件由質(zhì)量體系成員進行編寫；作業(yè)指導書可以分配到各部門編寫，每個實驗的操作者都應該參與到作業(yè)指導書的編制中去。HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理62HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理

㈣質(zhì)量體系文件的分層

①、質(zhì)量體系文件是一個金字塔的形式，作為塔尖第一層文件是質(zhì)量手冊，質(zhì)量手冊是大綱，是闡明一個實驗室的質(zhì)量方針并描述其質(zhì)量體系文件。包括質(zhì)量體系范圍、各過程之間相互接口關(guān)系及各過程所要求形成的文件控制過程。對實驗室組織結(jié)構(gòu)、程序、活動能力作出規(guī)定。HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理63HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理

②、第二層是程序文件，是對質(zhì)量手冊的一種繼續(xù)、一種詳細化，是對各職能部門質(zhì)量活動和具體工作程序中的細則作出規(guī)定。主要回答如何做的問題。主要包括有：1、培訓管理程序2、文件控制程序3、工作環(huán)境控制程序4、設備管理程序5、采購控制程序HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理64HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理

6、安全衛(wèi)生管理控制程序7、職業(yè)暴露預防與控制程序8、實驗室感染控制程序9、傳染病疫情報告控制程序10、消毒劑使用控制程序11、醫(yī)療廢棄物處理控制程序12、計算機網(wǎng)絡管理程序13、產(chǎn)品標識和可追溯性控制程序HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理65HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理

14、記錄控制程序15、內(nèi)部質(zhì)量審核控制程序16、糾正和預防措施實施程序17、管理評審控制程序18、確認程序19、數(shù)據(jù)分析程序20、保密制度控制程序21、不合格產(chǎn)品控制程序HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理66HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理

③、第三層是作業(yè)指導書，是指導操作人員進行具體操作的指南，作業(yè)指導書也是一種程序，只不過針對的對象是具體的作業(yè)活動，而程序文件描述的對象是某項系統(tǒng)的質(zhì)量活動。主要回答依據(jù)什么執(zhí)行的問題，為執(zhí)行性文件。依據(jù)5W1H（what做什么、why為什么做、who誰來做、when什么時候做、where在什么地方做、how如何做）原則。主要包括有：HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理67HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理

1、血液檢測崗位說明書2、實驗室人力資源管理3、實驗室員工培訓標準操作規(guī)程4、實驗室安全與衛(wèi)生、職業(yè)暴露操作規(guī)程5、標識管理操作規(guī)程6、儀器設備管理操作規(guī)程7、試劑使用與管理標準操作規(guī)程

HIV檢測質(zhì)量控制及報告68HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理

8、記錄的保存和保密標準操作規(guī)程9、差錯的識別、報告、調(diào)查及處理標準操作規(guī)程10、抗HIV初篩陽性報告及處理標準操作規(guī)程11、實驗室計算機信息系統(tǒng)管理操作規(guī)程12、實驗室確認管理操作規(guī)程13、異常情況應急預案HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理69HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理

14、血液檢測技術(shù)與方法15、血液檢測室內(nèi)質(zhì)量控制操作規(guī)程16、室間質(zhì)評標準操作規(guī)程17、檢測報告簽發(fā)管理標準操作規(guī)程18、檢測報告收回更改和重新簽發(fā)管理操作規(guī)程

HIV檢測質(zhì)量控制及報告70HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理

19、標本采集、交接、保存和處理標準操作規(guī)程20、各檢測項目標準操作規(guī)程21、各儀器設備標準操作規(guī)程HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理71HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理

④第四層是質(zhì)量記錄，實際是一些表格，是一些實證性文件記錄。主要回答執(zhí)行結(jié)果如何，為證實監(jiān)督性文件。主要包括產(chǎn)品、項目或合同質(zhì)量形成過程和最終狀態(tài)的證實記載；質(zhì)量體系運行記載以及驗證其有效性是否達到規(guī)定要求的記載。質(zhì)量記錄具有規(guī)范性、系統(tǒng)性、可操作性、可追溯性和可舉例性等的特點。記錄的種類至少應包括：HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理72HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理

標本登記、處理、保存、銷毀記錄，試劑管理及使用記錄，檢測過程和結(jié)果的原始記錄與分析記錄，質(zhì)量控制記錄，設備運行、維護和校驗記錄，實驗室安全記錄，實驗室溫濕度記錄，醫(yī)療廢棄物處理記錄等。HIV檢測質(zhì)量控制及報告體系文件的編寫和管理73謝謝大家！謝謝大家！74

HIV檢測實驗室生物安全及質(zhì)量控制

咸寧市中心血站佘朝暉

HIV檢測實驗室生物安全及質(zhì)量控制

7576實驗室生物安全及評估國際實驗室生物安全發(fā)展概況LaboratoryBiosafetyManual1stedition19831993200320042實驗室生物安全及評估國際實驗室生物安全發(fā)展概況Labora76實驗室生物安全及評估國際實驗室生物安全發(fā)展概況在20世紀50一60年代首先出現(xiàn)在美國；1983年WHO出版了《實驗室生物安全手冊》(第一版)(LaboratoryBiosafetyManual)，1993年出現(xiàn)第二版，直到2004年出第三版。實驗室生物安全及評估國際實驗室生物安全發(fā)展概況77實驗室生物安全及評估國內(nèi)實驗室生物安全發(fā)展概況

(一)起步

1987年，為了研究流行性出血熱的傳播途徑，軍事醫(yī)學科學院和天津一家生物凈化公司合作修建了我國第一個國產(chǎn)三級生物安全防護水平(biosafetylevel3，BSL-3)實驗室；2002年12月，經(jīng)衛(wèi)生部批準并頒布了行業(yè)標準《微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全通用準則》(WS233-2002)；實驗室生物安全及評估國內(nèi)實驗室生物安全發(fā)展概況78實驗室生物安全及評估國內(nèi)實驗室生物安全發(fā)展概況

(二)SARS期間

2003年5月6日，科技部、衛(wèi)生部、國家食品藥品監(jiān)督管理局和國家環(huán)境保護總局聯(lián)合發(fā)布了關(guān)于印發(fā)《傳染性非典型肺炎病毒研究實驗室暫行管理辦法》的通知。其內(nèi)容包括《傳染性非典型肺炎病毒研究實驗暫行管理辦法》和《傳染性非典型肺炎病毒的毒種保存、使用和感染動物模型的暫行管理辦法》。實驗室生物安全及評估國內(nèi)實驗室生物安全發(fā)展概況79實驗室生物安全及評估國內(nèi)實驗室生物安全發(fā)展概況

(三)第一個實驗室生物安全國家標準

2003年8月開始，在國家科技部、衛(wèi)生部、農(nóng)業(yè)部等的支持下，由國家實驗室認證認可委(ChinaNationalAccreditationBoardforLaboratories，CNAL)牽頭，組織生物安全專家開始起草國家標準《實驗室生物安全通用要求》。2004年9月1日建設部與國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局又聯(lián)合發(fā)布了《生物安全實驗室建設技術(shù)規(guī)范》(GB50346-2004)，提出了生物安全實驗室建設的技術(shù)標準。實驗室生物安全及評估國內(nèi)實驗室生物安全發(fā)展概況80實驗室生物安全及評估國內(nèi)實驗室生物安全發(fā)展概況(四)《病原微生物實驗室生物安全管理條例》

2004年11月12日，由溫家寶總理簽發(fā)的中華人民共和國國務院令(第424號)公布施行了《病原微生物實驗室生物安全管理條例》(簡稱《條例》)。2004年5月，國家認證認可監(jiān)督管理委員會和科技部聯(lián)合提出并委托中國實驗室國家認可委員會（CNAL）制訂了國家強制性標準《GB19489-2004--實驗室生物安全通用要求》，為規(guī)范我國的實驗室生物安全管理提供了科學的技術(shù)規(guī)范；2008年進行了修訂再版。

2005年7月26日，武漢大學生物安全三級動物實驗室首家獲國家認可。實驗室生物安全及評估國內(nèi)實驗室生物安全發(fā)展概況81實驗室生物安全及評估國內(nèi)實驗室生物安全發(fā)展概況(五)現(xiàn)狀和展望

當前，國際上，特別是WHO對生物醫(yī)學實驗室的生物安全比較重視。我們各種等級實驗室的建設應該有一個適當比例，應該普及推廣BSL-2實驗室，根據(jù)需要適當建設BSL-3實驗室，特殊需要的建設BSL-4實驗室，要有一個合理的宏觀布局。實驗室生物安全及評估國內(nèi)實驗室生物安全發(fā)展概況82實驗室生物安全及評估病原微生物分類

第一類病原微生物，是指能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。第二類病原微生物，是指能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。第三類病原微生物，是指能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預防措施的微生物。第四類病原微生物，是指在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。

第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物實驗室生物安全及評估病原微生物分類83實驗室生物安全及評估各國病原微生物危險分級組織 對象 低←病原微生物→高 WHO 病原微生物 1 2 3 4 美國 病原微生物 1 2 3 4 日本 微生物病毒 1 2a 2b 3a 3b 4a 4b英國 病原微生物 C B A 中國 病原微生物 4 3 2

1 實驗室生物安全及評估各國病原微生物危險分級84實驗室生物安全及評估生物安全實驗室

㈠生物安全實驗室慨念

1、通過規(guī)范的實驗室設計建造、實驗設備的配置、個人防護裝備的使用（硬件）。2、嚴格遵從標準化的操作程序和管理規(guī)程等（軟件）3、確保操作生物危險因子的工作人員不受實驗對象的傷害，確保周圍環(huán)境不受其污染,確保實驗因子保持原有本性所采取綜合措施的實驗室。（目的）

實驗室生物安全及評估生物安全實驗室85實驗室生物安全及評估生物安全實驗室

㈡分級

根據(jù)實驗室所處理對象的生物危害程度和采取的防護措施，把生物安全實驗室分為四級，其中一級對生物安全隔離的要求最低，四級最高。一般以BSL－1、BSL－2、BSL－3、BSL－4表示實驗室相應的生物安全防護水平。實驗室生物安全及評估生物安全實驗室86實驗室生物安全及評估生物安全實驗室

㈢目的

1、確保操作生物危險因子的工作人員不受實驗對象的傷害---人2、確保周圍環(huán)境不受其污染---環(huán)境3、確保實驗因子保持原有本性（不受污染）---物實驗室生物安全及評估生物安全實驗室87實驗室生物安全及評估生物安全實驗室

㈣三道屏障：

1、生物安全設備和個體防護裝置；2、實驗室設施，實驗室特殊設計和建設要求；3、實驗室管理制度（軟件部分）。包括標準化操作程序和嚴格實驗室管理。實驗室生物安全及評估生物安全實驗室88實驗室生物安全及評估生物安全實驗室組織管理要求㈠實驗室所在機構(gòu)應設立生物安全委員會，實驗室安全負責人是安全委員會委員，該實驗室管理層有責任確保安全檢查的執(zhí)行。每年應對工作場所進行不定期抽查，例行檢查每年至少一次。檢查內(nèi)容包括：

1、應急裝備、警報體系和撤離程序功能及狀態(tài)正常。2、用于危險物質(zhì)漏出控制的程序和物品狀態(tài)正常。3、對可燃易燃性、可傳染性、放射性和有毒物質(zhì)的存放進行適當防護和控制；污染和廢棄物處理程序的狀態(tài)。4、實驗室設施、設備、人員的狀態(tài)正常5、實驗室各項操作規(guī)程與管理制度正確實施。實驗室生物安全及評估生物安全實驗室組織管理要求89實驗室生物安全及評估生物安全實驗室組織管理要求㈡實驗室負責人為實驗室安全第一責任人，可任命一名有適當資質(zhì)和經(jīng)驗的實驗室安全負責人來協(xié)助管理安全事宜。實驗室負責人對所有實驗室員工和實驗室來訪者的安全負責。㈢實驗室安全負責人應對實驗室以及實驗人員進行日常管理監(jiān)督。㈣信息安全及保密制度：與HIV/AIDS檢測相關(guān)的所有資料均應嚴格保密，包括送檢單、檢測記錄、樣品登記、報告單及工作人員年度檢測結(jié)果等，不得對無關(guān)人員透露檢測結(jié)果。實驗室生物安全及評估生物安全實驗室組織管理要求90實驗室生物安全及評估生物安全實驗室組織管理要求（五）制定、維護和監(jiān)督有效的實驗室安全計劃。該安全計劃應包括教育及培訓、審核及評估、促進實驗室安全行為的程序。（六）有權(quán)阻止不安全的活動。實驗室負責人應制定規(guī)定和程序確保實驗室設施、設備、個人防護設備、材料等符合國家有關(guān)安全要求，定期檢查、維護、更新，確保不降低其設計性能。（七）確保提供實驗室人員適當?shù)膶嶒炇野踩矫妫ㄈ鐫撛谖：π裕Ｗo暴露者必要的注意事項以及暴露評估程序）的培訓。實驗室人員必須接受年度最新的補充培訓以了解操作規(guī)程和政策的變化。（八）定期或不定期組織進行實驗室安全自查，對于自查情況應有記錄，對重大生物安全隱患或發(fā)現(xiàn)問題應立即向上級生物安全委員會匯報，對發(fā)現(xiàn)問題應有整改與復查措施。實驗室生物安全及評估生物安全實驗室組織管理要求91實驗室生物安全及評估實驗室人員管理要求㈠實驗室所在單位人事部門、生物安全委員會負責：實驗室人員的組織管理、上崗資格認定、培訓、崗位制定和準入標準。㈡負責成立實驗室人員考核工作組，制定分類的考核標準，定期對實驗室人員基本知識、操作技能、生物安全進行考核與評價。實驗室生物安全及評估實驗室人員管理要求92實驗室生物安全及評估生物安全實驗室化學品安全管理要求化學品安全應符合以下要求：

①在實驗室中，對化學品的存放、處理、使用及處置的規(guī)定和程序均應符合良好化學實驗室行為標準。應按照相關(guān)標準在每個儲存容器上標明每個產(chǎn)品的危害性和風險性，還應在“使用中”材料的器上清楚標明。②對化學、物理及火災危害應有足夠可行的控制措施。應定期對這些措施進行監(jiān)督以確保其有效可用。應保存監(jiān)督結(jié)果記錄。實驗室生物安全及評估生物安全實驗室化學品安全管理要求93實驗室生物安全及評估生物安全實驗室緊急事故處理㈠實驗室負責人負責制定應對涉及本科室及工作的意外事故應急處理程序和預案，報生物安全委員會備案；并制定專人負責應對意外事故應急處理所需的設備材料的保管和維護。實驗室人員應熟記緊急情況下的正確應對措施。㈡實驗中發(fā)現(xiàn)異常情況應及時向?qū)嶒炇邑撠熑藞蟾?，并立即采取控制措施；同時做好詳細的記錄。實驗室發(fā)生安全事故時，應視事故類型等不同情況，進行緊急處理，并詳細記錄事故經(jīng)過，按規(guī)定報告生物安全委員會。實驗室生物安全及評估生物安全實驗室緊急事故處理94實驗室生物安全及評估生物安全實驗室緊急事故處理㈢應制定緊急撤離的行動方案。該方案應考慮到生物性、化學性、失火和其他緊急情況。應包括所采取的使留下的建筑物處于盡可能安全狀態(tài)的措施。所有實驗室人員都應了解緊急撤離的行動方案、撤離路線和緊急撤離的集合地點。每年至少一次演習。㈣實驗室負責人應備有用于急救的物品儲備（如急救藥箱，包括普通和特殊的解毒劑等。實驗室生物安全及評估生物安全實驗室緊急事故處理95實驗室生物安全及評估生物安全柜（BiosafetyCabinet,BSC)

負壓過濾排風柜：在生物因子操作過程中用來保護操作人員、環(huán)境和（或）實驗物品，防止其暴露于實驗中（可能）產(chǎn)生的危險性或潛在危險性生物氣溶膠或濺出物。是病原微生物實驗室的重要設備，是“病原體操作的一級安全隔離屏障”，關(guān)系生命安全和環(huán)境安全，要求非常嚴格。實驗室生物安全及評估生物安全柜（BiosafetyCabi96實驗室生物安全及評估生物安全柜（BiosafetyCabinet,BSC)實驗室生物安全及評估生物安全柜（BiosafetyCabi9798保護類型及生物安全柜的選擇24保護類型及生物安全柜的選擇98實驗室生物安全及評估生物安全柜（BiosafetyCabinet,BSC)

㈠生物安全柜擺放位置1、與其它操作區(qū)域相分離；2、遠離主要通道；3、與氣道有一定距離；4、與實驗室入口保持一定距離。實驗室生物安全及評估生物安全柜（BiosafetyCabi99實驗室生物安全及評估安全柜的檢驗

㈠安裝檢驗

1、下降氣流流速、流入氣流流速、氣流模式過濾器泄漏警報和聯(lián)鎖功能2、排氣系統(tǒng)性能（負壓排氣壓力和排氣罩性能）3、照度、噪聲、振動、漏電流、接地電阻實驗室生物安全及評估安全柜的檢驗100實驗室生物安全及評估安全柜的檢驗

㈡維護檢驗1、更換過濾器和安全柜內(nèi)部維修2、使用的安全柜每年進行驗證3、檢驗項目與安裝檢驗相同實驗室生物安全及評估安全柜的檢驗101實驗室生物安全及評估安全柜的檢驗

㈢檢測周期1、實驗室施工時，Ⅱ級生物安全柜搬放到指定位置后。

2、Ⅱ級生物安全柜被移動位置后。3、對Ⅱ級生物安全柜進行檢修后。

4、Ⅱ級生物安全柜更換高效過濾器后。

5、Ⅱ級生物安全柜一年一度的常規(guī)現(xiàn)場檢測。實驗室生物安全及評估安全柜的檢驗102實驗室生物安全及評估生物安全柜操作注意事項

1、工作臺內(nèi)不應存放過多器具，當使用旋轉(zhuǎn)、震蕩或加熱器具時，應盡可能把這些器具置于操作區(qū)的后端，這樣就可以減少通道口的湍流現(xiàn)象；2、不可隨便改變鼓風機的風速，除非通過檢測空氣速度確實降低了方可進行；3、切勿用操作臺來儲藏設備或?qū)嶒炇移骶撸?、不要阻塞空氣入口格網(wǎng)；5、不要在操作臺內(nèi)使用有毒、易燃或易爆等高度危物；6、操作前后應對臺面進行消毒；7、應對安全柜定期進行檢查、維修。實驗室生物安全及評估生物安全柜操作注意事項103實驗室生物安全及評估生物安全柜內(nèi)感染性材料溢灑的處理

1、當發(fā)生少量溢灑時，應用吸收紙巾立即處理，并立即用浸滿消毒液的毛巾或紗布對生物安全柜及其內(nèi)部的所有物品進行擦洗。工作面消毒后應更換手套，不論是摘下手套還是更換手套都要洗手。2、若發(fā)生大量溢灑，液體會通過生物安全柜前面或后面的格柵流到下面去，生物安全柜內(nèi)所有的物品都應該進行表面消毒并拿出生物安全柜，在確保生物安全柜的排水閥被關(guān)閉后，可將消毒液倒在工作臺面上，使液體通過格柵流到排水盤上。所有接觸溢出物品的材料都要進行消毒和/或高壓滅菌處理。實驗室生物安全及評估生物安全柜內(nèi)感染性材料溢灑的處理104實驗室生物安全及評估生物安全柜消毒

㈠表面消毒1、工作完成時，所有的容器和設備應該進行表面消毒并拿出安全柜。在每天工作結(jié)束時，應該對安全柜進行最后的表面消毒，包括工作臺面、安全柜的邊壁、后壁和觀察窗玻璃內(nèi)部的擦拭。如果必要，安全柜也應該進行放射性檢測并進行必要的消毒。2、作為安全的微生物學操作的最后步驟，操作者應該摘下手套、脫下工作服并且洗手。㈡氣體消毒在更換HEPA過濾器或進行內(nèi)部維修之前要對生物安全柜必須進行消毒。實驗室生物安全及評估生物安全柜消毒105實驗室生物安全及評估生物安全柜的日常維護

1.定期清潔操作臺面和前窗玻璃2.保持實驗室內(nèi)空氣質(zhì)量,延長高效過濾器的使用壽命3.定期檢測紫外燈的照射強度,及時更換燈管4.長期不用應定期進行維護性運行高效過濾器應定期檢測,及時更換.5.做好使用和維護記錄.實驗室生物安全及評估生物安全柜的日常維護106實驗室生物安全及評估生物危害評估1、生物安全危害評估是指實驗室工作人員處理致病微生物及其毒素時，對可能給人或環(huán)境帶來的危害所進行的評估，包括對微生物危險性和防護屏障的評估。2、生物危害評估原則和依據(jù)是根據(jù)生物因子的種類、來源、傳染性、致病性、傳播途徑、在環(huán)境中的穩(wěn)定性、感染劑量、濃度、動物實驗數(shù)據(jù)有效的預防和治療方法等諸因素進行生物危害評估。3、危害評估是為了確定某種微生物實驗過程中的危險所在，危險性大小，以及如何避免和防護危險的發(fā)生，達到保護人、物和環(huán)境的目的。4、根據(jù)衛(wèi)生部病原微生物危害等級分類，艾滋病毒屬第二類高致病性病原微生物（國際危險程度為Ⅲ級）5、根據(jù)危害評估結(jié)果，制定相應的操作規(guī)程、實驗室管理制度和緊急事故處理辦法，必須形成書面文件并嚴格遵守執(zhí)行。在新增加實驗內(nèi)容時應對該實驗進行危險度評估；及時收集與危險程度相關(guān)的新資料以及來自科學文獻的其他相關(guān)的新信息，以便必要時對危險度評估結(jié)果進行定期檢查和修訂。實驗室生物安全及評估生物危害評估107實驗室生物安全及評估

艾滋病毒在衛(wèi)生部《名錄》中的分類

（“衛(wèi)生部關(guān)于印發(fā)《人間傳染的病原微生物名錄》的通知”衛(wèi)科教發(fā)[2006]15號）實驗室生物安全及評估艾滋病毒在衛(wèi)生部《名錄》中的108實驗室生物安全及評估HIV相關(guān)檢測的生物安全級別

(一)HIV抗體檢測（包括篩查和確證實驗）、抗原檢測和相關(guān)的免疫學檢測應在符合Ⅱ級生物安全實驗室（BSL-2）要求的艾滋病檢測實驗室中進行。（二）HIV分離培養(yǎng)、濃縮、中和試驗、細胞培養(yǎng)及研究工作及其它需要應用活病毒的研究工作，應在Ⅲ級生物安全實驗室（BSL-3）中進行。實驗室生物安全及評估HIV相關(guān)檢測的生物安全級別(一)HI109實驗室生物安全及評估HIV相關(guān)檢測的生物安全級別（三）HIV核酸提取和檢測均應在符合Ⅱ級生物安全實驗室（BSL-2）要求的艾滋病檢測實驗室中進行。（四）HIV病毒株應保存在符合Ⅲ級生物安全實驗室（BSL-3）要求的艾滋病實驗室；HIV陽性樣品，包括全血、血清、血漿和其他組織（液）、核酸提取物應保存在符合BSL-2要求的艾滋病實驗室。實驗室生物安全及評估HIV相關(guān)檢測的生物安全級別（三）HIV110HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測實驗室的類型

（一）艾滋病檢測確證實驗室1、艾滋病確證中心實驗室2、艾滋病確證實驗室（二）艾滋病檢測篩查實驗室1、艾滋病篩查中心實驗室2、艾滋病篩查實驗室3、艾滋病檢測點HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測實驗室的類型111HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV篩查實驗室檢測方法

1、酶聯(lián)免疫試驗（ELISA）2、快速檢測（RT）及其它檢測：包括明膠顆粒凝集試驗（PA）、斑點EIA或稱斑點ELISA、斑點免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗、艾滋病唾液檢測卡、家庭HIV檢測。3、尿液HIV抗體檢測HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV篩查實驗室檢測方法112HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV確證實驗室檢測方法

包括免疫印跡試驗（WB）、條帶免疫試驗（LIATEKHIVⅢ）、放射免疫沉淀試驗（RIPA）及免疫熒光試驗（IFA）。

國內(nèi)常用的確認試驗方法是WB。HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV確證實驗室檢測方法113HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測其他輔助方法

1、HIV核酸定性檢測2、HIVRNA定量檢測3、CD4+和CD8+T淋巴細胞檢測4、HIVP24抗原檢測5、HIVRNA定量測定：包括逆轉(zhuǎn)錄PCR試驗（RT-PCR）、核酸序列擴增試驗（NASBA）、分支DNA雜交試驗（bDNA）HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV檢測其他輔助方法114HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV實驗室質(zhì)量體系概述

ISO9001定義為：在質(zhì)量方面指揮和控制組織的管理體系，它具備了保證產(chǎn)品質(zhì)量的人力、物力，還要明確有關(guān)部門和人員的職責和權(quán)力，以及規(guī)定完成任務所必須的各項程序和活動。HIV檢測質(zhì)量控制及報告HIV實驗室質(zhì)量體系概述115HIV檢測質(zhì)量控制及報告

行業(yè)標準:《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標準》WS298-2008技術(shù)規(guī)范:《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》

（2009年修訂版）HIV檢測質(zhì)量控制及報告行業(yè)標準:116HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控

1、人員：是指實驗室負責人和血液檢測技術(shù)人員。

①實驗室負責人對實驗室運行和行政管理全面負責，確保血液檢測量

②血液檢測人員需經(jīng)過職業(yè)道德培訓保證血液檢測結(jié)果的真實性、可靠性和保密性

③檢測人員需接受血液檢測崗位職責相關(guān)文件的培訓和實踐技能的培訓，并有相應的培訓記錄；還必須經(jīng)過簽名和相關(guān)法律的培訓；檢測人員必須登記和保存簽名并定期更新和存檔；制定實驗室全員會議制定④有專人負責職業(yè)健康和安全衛(wèi)生；

⑤實驗室負責人和血液檢測技術(shù)人員都應具有相應的學歷要求；新增的技術(shù)人員要經(jīng)過滿足崗位需求的培訓和考核，合格后方能上崗。

HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控117HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控

2、設備：①設備的配置應能滿足血液檢測業(yè)務工作的需要并與其功能相適應②設備在投入使用前或維修后均應確認③設備在使用時應有使用和維護記錄④大型關(guān)鍵設備應具有唯一性標識并明確維護校準周期，檔案應由人管理有使用維護和校準記錄，停用或維修的設備也應有明顯的標志⑤關(guān)鍵設備在檢測過程中有不間斷電力供應和應急預案。⑥使用的儀器應符合國家相關(guān)標準⑦建立和實施儀器設備的評估、確認、維護、校準、和持續(xù)監(jiān)控等管理制度，以保證儀器設備符合預期使用要求。HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控118HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控

3、物料：①建立和實施血液檢測試劑與材料管理程序，包括試劑與材料的生產(chǎn)商和供應商的資質(zhì)評估

②建立試劑與材料的評估、選購、確認、保存、使用、監(jiān)控以及庫存管理程序

③物料須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準、在有效期內(nèi)的試劑，其中酶聯(lián)免疫試劑應批批檢合格。推薦使用臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的試劑

④建立和實施試劑的確認和庫存管理程序

HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控119HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控

4、方法：是指實驗室的檢查項目均應有相適應的檢測方法，這些檢測方法必須符合相關(guān)法律、法規(guī)和文件規(guī)定并在體系內(nèi)受控。HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控120HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控

5、環(huán)境：①分區(qū)：清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū)分開；實驗區(qū)和工作區(qū)分開，實驗室內(nèi)禁止進食、飲水、化妝等②實驗室溫濕度要符合要求③具有BSL-2級實驗室應有的相應配備和要求。如防蚊蠅、防水、具有密閉性、配備滅火器報警器、有沖淋設施和洗眼器和職業(yè)暴露相關(guān)的藥品等。④具有國際通用的生物危害標識、危險級別標識、授權(quán)人員方可進入標識等。⑤HIV實驗室應有HIV檢測相應資質(zhì)標志。HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控121HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控6、信息管理系統(tǒng)：①建立和使用血液檢測計算機信息管理系統(tǒng)，對從標本接收到檢測報告發(fā)出整個血液檢測過程實行計算機管理程序②嚴格控制非授權(quán)人員進入計算機系統(tǒng)，非法查詢、錄入和更改數(shù)據(jù)或檢測程序③血液檢測計算機管理軟件供應商應具備國家規(guī)定資質(zhì)④應建立和實施計算機管理系統(tǒng)使用的風險分析、培訓、確認和使用及使用后的評估程序⑤建立和實施發(fā)生意外事件的應急預案和恢復程序，確保血液檢測正常進行。

HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控122HIV檢測質(zhì)量控制及報告影響質(zhì)量的七大因素：人機料法環(huán)信控7、受控：指從標本接收開始到報告的發(fā)放整個過程受控，