仿制藥相關(guān)問題

如何根據(jù)文獻標準

做好仿制藥質(zhì)量研究余立yuliyy8716@.仿制藥品在國際上，仿制藥從廣義上講是指專利到期的已上市藥，因此又被稱為非專利藥。在我國，仿制藥申請是指對國內(nèi)已批準上市銷售的已有國家標準的原料藥與制劑的注冊申請。

（化藥6類、中藥、天然藥物9類、生物制品15類）《藥品注冊管理辦法》第七十四條：仿制藥應(yīng)當與被仿制藥具有同樣的活性成分、給藥途徑、劑型、規(guī)格和相同的治療作用.仿制藥品研究研發(fā)基調(diào)

比較研究研發(fā)目標

不次于被仿制藥研發(fā)基礎(chǔ)

被仿藥的專利、文獻及標準

《中國藥典》國外藥典（EP/USP/BP/JP）包括局頒標準（轉(zhuǎn)正標準、地標升國標）進口藥注冊標準

.其他參考資料研發(fā)要求-《已有國家標準化學藥品研究技術(shù)指導原則》.《已有國家標準化學藥品研究技術(shù)指導原則》在選擇參比制劑時一般遵循以下原則：如原發(fā)廠家生產(chǎn)的制劑已在我國上市，一般首選原研廠產(chǎn)品作為參比制劑；如不能獲得，次選研究基礎(chǔ)較好、臨床應(yīng)用較為廣泛的首仿廠產(chǎn)品作為參比制劑；也可以對不同廠家生產(chǎn)的同品種進行質(zhì)量對比，優(yōu)選質(zhì)量較好、占市場份額較高的產(chǎn)品作為參比制劑。

比較研究的標尺

-被仿制藥品的選擇原則.原研品認可度高首仿品被仿品注意：可比性

-

貯存時間大致相同！包裝條件相同！真實性–

保存好發(fā)票、標簽、批號或照片

比較研究的標尺問題

-被仿制藥品的選擇原則.研發(fā)者困難-有些原研藥品不易得到審評者困難-如無對照藥品，無法比較雜質(zhì)譜，無法評價質(zhì)量是否等同、穩(wěn)定性是否等同

例外-主成分純度99%以上，單個雜質(zhì)0.1%以下，穩(wěn)定性非常好，6個月加速無降解趨勢

比較研究的標尺

-使用對照藥品的矛與盾.藥學比較重點：質(zhì)量與穩(wěn)定性對比研究≠對比檢驗研究項目≠原執(zhí)行標準考察方法≠原法定標準

比較研究的范圍與方法

-考察項目與方法的選擇.

物料不同－原料、輔料分析對象｛工藝不同－試劑、中間體、副產(chǎn)物設(shè)備不同－質(zhì)材、參數(shù)精度不全面－沒的學（復方無有關(guān)物質(zhì)）已有標準｛不完善－不應(yīng)學（地標升國標標準）不適用－不能學（廠送設(shè)備,特定雜質(zhì)）

為什么呢？.結(jié)合產(chǎn)品生產(chǎn)個性應(yīng)關(guān)注標準隱性變化借鑒同類最新動態(tài)進行縱橫向比較

如何在已有文獻標準基礎(chǔ)上變化拓展.

分析工藝、處方異同點重點落在差異處

為什么要不同不同點對產(chǎn)品的影響質(zhì)量標準隨之改變

結(jié)合產(chǎn)品生產(chǎn)個性.項目原研標準擬定標準EP7.0USP34JP15含量限度按干燥品計算≥150IU/mg按干燥品計算≥150IU/mg按干燥品計算≥150IU/mg（非口服制劑）≥120IU/mg（口服制劑）按干燥品計算≥180USP單位/mg≥110IU/mg性狀白色或類白色的粉末，有引濕性白色或類白色的粉末，極具引濕性白色或幾乎白色的粉末，有適度的引濕性白色至灰棕色的粉末或顆粒溶解度在水中易溶在水中易溶，在乙醚中不溶在水中易溶在水中溶解，在乙醚中不溶比旋度≥+35°(40mg/ml,水)≥+50°(40mg/ml,水)鑒別1、電泳法2、鈉鹽1、電泳法2、鈉鹽A、具有抗凝血作用B、比旋度C、電泳法：D.鈉鹽A、H-NMRB、IC法C、抗Xa/抗IIa：D、鈉鹽酸堿度5.0～7.50.10g/10ml水5.0～7.50.10g/10ml水5.5～8.00.10g/10ml水5.0～7.50.10g/10ml水6.0～8.0.單體混合物分子量分布組分比例晶型異構(gòu)體結(jié)晶水主成分

多組分生化藥的特點

活性成分的比較.第一次飛躍第二次飛躍純度控制雜質(zhì)控制雜質(zhì)譜分析雜質(zhì)質(zhì)控理念的變遷.雜質(zhì)譜的定義ImpurityProfile

（雜質(zhì)譜）:Adescriptionoftheidentifiedandunidentifiedimpuritiespresentinadrugsubstance.對存在于藥品中所有已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)的總的描述。

.Clicktoedittitlestyle選擇最優(yōu)物質(zhì)守恒雜質(zhì)歸屬比較雜質(zhì)的數(shù)與量，一致或基本一致，物質(zhì)基礎(chǔ)相同與否決定仿制藥可否橋接已上市藥品的安全有效性結(jié)果雜質(zhì)譜分析的意義雜質(zhì)譜分析.已鑒定雜質(zhì)IdentifiedImpurity特定雜質(zhì)SpecifiedImpurity潛在雜質(zhì)PotentialImpurity毒性雜質(zhì)ToxicImpurity已確證了結(jié)構(gòu)特征的雜質(zhì)在質(zhì)量標準中規(guī)定檢查并有自己限度標準的雜質(zhì)。已鑒定或未鑒定理論推測在生產(chǎn)或貯藏過程中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)實際產(chǎn)品中不一定存在具強烈不良生物作用的雜質(zhì).新方法分析方法的有效性（氨芐西林鈉/舒巴坦鈉）原方法中國抗生素雜志，2009，34：734在對各國藥典方法比較的基礎(chǔ)上確定分析方法.強制降解試驗評價方法分離能力粗品強制降解（工藝雜質(zhì)+降解雜質(zhì)）強制降解條件的摸索控制以雜質(zhì)增長10%~20%為最佳各峰分離程度的考察比較色譜系統(tǒng)的評價以圖譜和數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，針對實驗目的，作出相應(yīng)的結(jié)論！

.雜質(zhì)譜的比較－方法選擇最優(yōu)柱串聯(lián)技術(shù)適用于溶解度無明顯差異但電荷上有明顯差異的難分離物質(zhì)，通過將一根SCX（陽離子交換）短柱與一根MGⅡC18長柱串聯(lián)就可以簡單達到將其分離的目的。原理：有電荷差異的被分離物質(zhì)進入色譜柱串聯(lián)系統(tǒng)后，帶正電荷的物質(zhì)（通常是堿性物質(zhì)）會由于SCX短柱的離子交換作用而被保留在短柱中，而帶負電荷的物質(zhì)（通常為酸性物質(zhì)）與中性物質(zhì)則會毫無阻礙的通過短柱進入C18長柱中，從而成功分離；然后由于MGⅡC18長柱中疏水性基團間的相互作用而對中性物質(zhì)有強保留作用，但對帶負電荷物質(zhì)無強保留作用，這樣帶負電荷物質(zhì)與中性物質(zhì)也簡單被分開了如果為了讓峰形更好，各峰間分離更開，還可在陽離子交換短柱與C18長柱前接一根NH2短柱（它可與陰離子發(fā)生交換作用），進行三根串聯(lián)，也可以使帶負電荷的酸性物質(zhì)與中性物質(zhì)達到更好的分離效果。

.雜質(zhì)譜的比較－多種互補不同色譜系統(tǒng)（流動相、色譜柱、波長）不同檢測器（uv、DAD）不同原理的方法-分離或檢測

.雜質(zhì)譜的比較平行列表、圖譜疊加、逐峰比較報告新雜質(zhì)（個數(shù)、單個最大、總量）單一新雜質(zhì)量（0.1%？、0.2%？）新雜質(zhì)總量所占比例

.峰序號溶劑峰對照藥峰/量自制品峰/量峰性質(zhì)新增雜質(zhì)總量10.20.20.2溶劑峰22.2/0.2%34.2/0.2%新增雜質(zhì)48.2/0.5%8.2/0.3%原有雜質(zhì)511.8/0.5%苯乙胺618.2/0.5%新增雜質(zhì)（苯乙醇）雜質(zhì)總量1.2%1.0%0.7%.雜質(zhì)峰的歸屬平行列表、圖譜疊加、逐峰比較雜質(zhì)來源雜質(zhì)是什么物料平衡（計算與歸一）

.新雜質(zhì)的研究－藥物雜質(zhì)的可能來源.1.原料：紅霉素A、紅霉素B、紅霉素C、紅霉素D、紅霉素E、紅霉素F、阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F2.中間體：紅霉素A肟（Z）、6，9-亞胺醚、氮紅霉素A、紅霉素A肟（E）、紅霉素C肟（E）、9，11-亞胺醚、紅霉素C6，9-亞胺醚、紅霉素A內(nèi)酰胺3.副產(chǎn)物：紅霉素-N-氧化物、N-去甲基紅霉素A、N-去甲基阿奇霉素A、氨基阿奇霉素A、N-甲酰基-N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-苯磺酰基阿奇霉素、阿奇霉素N-氧化物、3’-去（二甲氨基）-3’,4’-去氫阿奇霉素、O-甲苯磺?；t霉素肟、紅霉素Z肟重排物、氮紅霉素11，12-硼酸酯、N，N-去二甲基N-甲?；⑵婷顾谹、丙基阿奇霉素、3’-N，N-去二甲基氨基-酮基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯4.降解產(chǎn)物：去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮紅霉素、紅霉素8，

9-脫水-6，9-半縮酮、紅霉素6，9：9，12-螺縮酮阿奇霉素中可能存在的雜質(zhì)：37種.模擬色譜圖實際色譜圖.結(jié)構(gòu)確證常用的方法熱分析Ｘ－粉末衍射核磁元素分析質(zhì)譜紫外紅外.特定雜質(zhì)

非特定雜質(zhì)有效雜質(zhì)寬管毒性雜質(zhì)嚴控雜質(zhì)限度的制訂未知單個≤0.10%根據(jù)生產(chǎn)現(xiàn)狀校正因子新增雜質(zhì)限度的考慮.新增雜質(zhì)限度的考慮毒性雜質(zhì)嚴控：-遵守公認標準-不超越前期標準

-以相關(guān)安全實驗數(shù)據(jù)為科學依據(jù)

-日服藥劑量推算安全限度.新增雜質(zhì)限度的考慮有效雜質(zhì)寬管：-不能不管-不超越前期標準

-以投入產(chǎn)出比等利弊平衡為科學依據(jù).新增雜質(zhì)限度的考慮普通雜質(zhì)：-不超越前期標準-未知單個一般不得過0.10%、0.2%（日服劑量）

-以安全實驗和投入產(chǎn)出比等利弊平衡為科學依據(jù).雜質(zhì)毒性快速評價斑馬魚毒性快速評價法，對雜質(zhì)的胚胎毒性、神經(jīng)毒性，心臟毒性等進行評價。優(yōu)點：雜質(zhì)用量少無需知道雜質(zhì)結(jié)構(gòu)實驗周期短（3－4天一個周期）..藥物耳毒性檢測利用一種特殊染料對斑馬魚幼體頭部耳蝸區(qū)神經(jīng)丘毛細胞的染色，檢測毛細胞的存活狀態(tài)，來判斷檢測物的耳毒性。下圖中紅色圈示耳蝸區(qū)域；給藥組中紅色箭頭示給藥后毛細胞減少，黃色圈示給藥后1神經(jīng)丘消失。給藥后系統(tǒng)對照組（正常幼體）.隱性變化舉例

－鈉鹽的鑒別反應(yīng)重金屬檢查法：pH測定法：不溶性微粒檢查法：可見異物檢查法：滲透壓摩爾濃度：

2010年版2005年版

鈉

鹽（1）取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯鮮黃色。（2）取供試品約100mg，置10ml試管中，加水2ml溶解，加15%碳酸鉀溶液2ml，加熱至沸，應(yīng)不得有沉淀生成；加焦銻酸鉀試液4ml，加熱至沸；置冰水中冷卻，必要時，用玻棒摩擦試管內(nèi)壁，應(yīng)有致密的沉淀生成。（替換使用醋酸氧鈾鋅試液的方法）（1）取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯鮮黃色。（2）取供試品的中性溶液，加醋酸氧鈾鋅試液，即生成黃色沉淀。標準字面未改，實質(zhì)內(nèi)容已變.隱性變化舉例

－鋅鹽的鑒別反應(yīng)重金屬檢查法：pH測定法：不溶性微粒檢查法：可見異物檢查法：滲透壓摩爾濃度：

2010年版2005年版鋅鹽（1）取供試品溶液，加亞鐵氰化鉀試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在稀鹽酸中不溶解。（2）取供試品溶液，制成中性或堿性溶液，加硫化鈉試液，即產(chǎn)生白色沉淀。（替換使用硫氰酸汞銨試液的檢查方法）（1）取供試品溶液，加亞鐵氰化鉀試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在稀鹽酸中不溶解。（2）取供試品溶液，以稀硫酸酸化，加0.1％硫酸銅溶液1滴及硫氰酸汞銨試液數(shù)滴，即生成紫色沉淀。新方法做考察:取樣量,輔料干擾,延伸-環(huán)境友好.Page

38引濕性試驗

不溶性微粒高分子聚合物HPLC重金屬溶出度殘留溶劑含量均勻度制劑通則

現(xiàn)行版藥典附錄修訂重點項目提示

.有關(guān)溶出度的變化

小杯法正在被淘汰！

體外模擬，靈敏度高的測定方法，比色池調(diào)整

沉降籃使用與否要求標準寫明！

檢驗者判斷不一，使用與否差異大，研發(fā)決定

“可”

“應(yīng)”

“照”

.有關(guān)含量均勻度的變化

10mg25mg(小劑量規(guī)格)5%25%(主藥占總量比例)

復方制劑重（裝）量差異含量均勻度.參考同類最新動態(tài)舉例

由于某些藥物組成的復雜性，特別是一些生物大分子藥物，使用傳統(tǒng)的分析方法已經(jīng)不能滿足當前的質(zhì)控需要，2010年版藥典逐漸改用現(xiàn)代分析技術(shù)。

首次運用毛細管電泳法注射用抑肽酶：檢查兩個特定雜質(zhì)

注射用鹽酸頭孢吡肟：方法1-毛細管電泳法

N-甲基吡咯烷方法2-HPLC法（羧基柱，電導檢測）.抑肽酶SDS凝膠電泳圖

本品系自牛胰或肺中提取、純化制得的肽酶抑制劑。采用SDS凝膠電泳的方法抑肽酶的有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果如圖所示，都只有一個條帶?？赡苁且蛛拿负陀嘘P(guān)物質(zhì)的分子量相差不大，使用凝膠電泳不能將其分離.2010版：品種增加,方法多元化

自填柱和商品玻璃柱：填料常用葡聚糖凝膠G-10（SephadexG10）；短柱子的使用，減少分離時間

商品凝膠柱TSK-GELG2000SWXL：

頭孢地嗪與注射用頭孢地嗪

β-內(nèi)酰胺類抗生素的高聚物.

鹽酸頭孢替安分析方法的比較SephadexG-10系統(tǒng)TSK-GelG2000swxl系統(tǒng)

0.8ml/min.頭孢羥氨芐高分子雜質(zhì)分析圖譜SephadexG-10系統(tǒng)TSK-GelG2000swxl系統(tǒng)

0.8ml/min1-頭孢羥氨芐；2-高分子雜質(zhì).純化水、注射用水和滅菌注射用水的增修訂純化水、注射用水的修訂增訂：

電導率

氯化物硫酸鹽鈣鹽二氧化碳

替代總有機碳測定

易氧化物可任選一項藥典中新檢驗技術(shù)的應(yīng)用.甲氧基苯胺值

含有不飽和脂肪酸的藥物在生產(chǎn)和貯藏過程中易被氧化，初級氧化產(chǎn)物一般不穩(wěn)定，又可進一步生成醛類等化合物，而甲氧基苯胺值（也稱p-茴香胺值）就是ISO推薦的一種對此類降解產(chǎn)物進行評價的手段，歐洲藥典附錄2.5.36收載了此測定方法。藥物的甲氧基苯胺值越高，說明其劣變程度越嚴重測定原理：甲氧基苯胺與醛反應(yīng)生成醇胺，醇胺脫水生成的醛亞胺可采用紫外-可見分光光度法在350nm波長處測定。.2-乙基己酸β-內(nèi)酰胺類抗生素對生產(chǎn)工藝過程中使用2-乙基己酸的原料，增加此項檢查，采用氣相色譜法測定；方法增訂為附錄－2010年版藥典二部（附錄ⅦL）；如:頭孢地嗪鈉、頭孢呋辛鈉、頭孢孟多酯鈉、氨芐西林鈉等。.2-乙基己酸勘誤：β-內(nèi)酰胺類抗生素對生產(chǎn)工藝過程中使用2-乙基己酸的原料，增加此項檢查，采用氣相色譜法測定；方法增訂為附錄－2010年版藥典二部（附錄ⅦL）；如:頭孢地嗪鈉、頭孢呋辛鈉、頭孢孟多酯鈉、氨芐西林鈉等?？闭`：.系統(tǒng)適用性試驗方法和指標的優(yōu)化重復性理論板數(shù)分離度保留時間拖尾因子系統(tǒng)適用性試驗要求.如何借鑒進口藥注冊標準讀懂取長補短更上一層樓學到位.

+先進性完成時應(yīng)該是當時最為嚴格的同品種標準專屬性僅屬于某個企業(yè)專有個性化某些項目的適用性及推廣性較差保密性非公開的，僅在CDE，中檢所和口岸所等部門存檔進口藥注冊標準的特點.前體片劑溶出度設(shè)兩個指標15分鐘60％和45分鐘75％棄去5ml初濾液，用xx膜過濾，柱溫25℃，加預柱，用聚四氟酰胺小瓶，機械振搖xx分鐘等等借鑒進口藥注冊標準

－讀懂、學到位

.研究與標準改進緊密結(jié)合溶劑的優(yōu)化：溶液穩(wěn)定性考察-溶解度高且穩(wěn)定＞8小時不需提示＜4小時提示臨用現(xiàn)配或立即進樣＜2小時改換溶劑

-無背景干擾或小

溶劑峰、倒峰

-低毒價廉.柱溫的確定-不規(guī)定（不需加溫且對溫度不敏感）

-25℃或30℃

（不需加溫但對溫度敏感，需保持恒溫）

-35℃～70℃（需加溫且對溫度敏感，需保持恒溫）

50℃以上要加預熱管.檢出雜質(zhì)的數(shù)與量干擾因素操作的便捷性利用DAD檢測器

檢測波長的選擇-薄弱點.對于不該學的、不方便學的、學不了的、需轉(zhuǎn)換的要盡量不降低質(zhì)控水平替換例如:某季銨鹽片可能具有食道刺激性，所以選用了在酸性條件下可溶、但在堿性條件下僅膨脹而不溶解的材料進行包衣，以保證服用后在食道中不破裂但在胃液中仍可快速崩解，包衣的質(zhì)量與服用后的刺激性相關(guān)借鑒進口藥注冊標準

－取長補短、更上一層樓借鑒進口藥注冊標準

－取長補短、更上一層樓

.耐水時間：取本品20片，分別置2只裝有200ml水的燒杯中，每只燒杯中放置10片，在37±0.5℃水浴中保溫，觀察各片破裂，崩解時間，20片的耐水時間平均值應(yīng)超過45分鐘，小于20分鐘的不得多于2片，小于10分鐘的不得多于1片

借鑒進口藥注冊標準

－取長補短、更上一層樓

.該檢查項立意雖好，但實驗設(shè)計和限度制訂還不夠科學合理。比如，根據(jù)破裂還是完全崩解記錄時間標準中沒有明確，而通常從破裂到完全崩解是需要一段時間的，現(xiàn)在靜態(tài)檢驗間距就會更大；如果耐水時間平均值規(guī)定應(yīng)超過45分鐘，還允許有小于10分鐘的樣品出現(xiàn)，那么樣品間存在的質(zhì)量差異就過大。

借鑒進口藥注冊標準

－取長補短、更上一層樓

.耐水時間取本品20片，分別置2個裝有200ml水的燒杯中，每個燒杯放入10片，在37℃±0.5℃水浴中保溫，觀察各片的破裂情況，45分鐘內(nèi)各片均應(yīng)完整不破裂，如有破裂，20片的耐水時間平均值應(yīng)不低于45分鐘，在20分鐘內(nèi)破裂的片子不得多于2片，且在10分鐘內(nèi)不得有片破裂。改為溶出度，規(guī)定兩點限度

借鑒進口藥注冊標準

－取長補短、更上一層樓

.應(yīng)用色差計轉(zhuǎn)換顏色限度舉例國外標準規(guī)定為“與B5號標準比色液（歐洲藥典第5版2.2.2溶液的顏色）比較不得更深”則因歐洲藥典標準比色液的配制從三原色開始就與中國藥典不同，按此制訂標準則在國內(nèi)檢驗較困難、麻煩可采用色差計進行對比測定，歐洲藥典的B5號標準比色液的色差值（△E*=3.58）與中國藥典BR3號（△E*=3.19）和BR4號（△E*=4.46）的中值（3.82）較為接近，約相當于BR3.5號。因BR3號是取棕紅色貯備液1.5ml加8.5ml水，BR4號是取棕紅色貯備液2.0ml加8.0ml水配制而成，所以可將棕紅色貯備液1.8ml加8.2ml水配制了專用比色液，該比色液的△E*為3.64，與歐洲藥典B5號標準比色液的色差值幾乎一致，按此轉(zhuǎn)換限度既不改變企業(yè)標準原有水平，又方便了國內(nèi)檢驗

.

質(zhì)量研究的標尺問題

-對照品/標準品購買的對照品/標準品

權(quán)威性

真實性

準確性原始記錄核查需要檢查的問題：-質(zhì)量研究所用的對照品/標準品是否具有合法來源？-如果質(zhì)量研究所用對照品/標準品為自制品，有否精制和標化記錄與標化結(jié)果？.

比較研究的標尺問題

-購買的對照品/標準