白帶常規(guī)課件

陰道分泌物檢驗海南省人民醫(yī)院檢驗科戴海玲臨床意義標本的采集及處理陰道分泌物理學檢驗陰道分泌物化學檢驗陰道分泌物有形成分檢驗細菌性陰道炎檢驗質(zhì)量控制陰道分泌物(vaginaldischarge)為女性生殖系統(tǒng)分泌的液體，主要由陰道粘膜滲出液、宮頸腺體及子宮內(nèi)膜分泌物混合而成，總稱陰道分泌物。二、標本的采集及處理一般在陰道深部或陰道穹后部、宮頸管口等處取材，制成生理鹽水懸液和涂片染色，臨床醫(yī)師應根據(jù)對感染病原體的初步判斷來確定取材部位可顯著提高檢出率。如真菌好在陰道前，中、段的側(cè)壁生長，滴蟲容易在陰道后穹窿滋生，所以采集要注意部位，以免造成漏診。陰道標本采集前24小時，禁止盆浴、陰道灌洗及陰道用藥、性交等，月經(jīng)期間不宜進行陰道分泌物檢查，以免影響結(jié)果。三、陰道分泌物的理化檢驗外觀酸堿度外觀在生理狀態(tài)下，陰道分泌物為白色稀糊狀，一般無氣味，量的多少不等與雌激素水平高低及生殖器官充血情況有關，于近排卵期白帶量多，清澈透明、稀薄如蛋清樣，排卵期2-3天后白帶混濁粘稠、量少，行經(jīng)前量又增加。妊娠期白帶量增多。異常的外觀膿性白帶：黃色或銅綠色有臭味，多為滴蟲或化膿性細菌感染；泡沫性膿性白帶，常見于滴蟲性陰道炎；其他膿性白帶可見于慢性宮頸炎、老年性陰道炎、子宮內(nèi)膜炎、宮腔積膿、陰道異物等。豆腐渣樣白帶：為念珠性陰道炎所特有，常伴有外陰瘙癢。無色透明粘液白帶：常見于使用雌激素后及卵巢顆粒細胞瘤時。酸堿度（PH值）正常的陰道PH值為＜4.5（一般為4-4.5）滴蟲性陰道炎、細菌性陰道炎和化膿性陰道炎時PH升高，PH為5.5-6。PH增高也可見于幼女和絕經(jīng)期婦女。陰道分泌物化學檢驗

1、過氧化氫濃度測定

反應液中過氧化氫經(jīng)過氧化物酶作用，釋放出新生態(tài)氧，后者在4-氨基安替比啉存在下，使TOOS氧化呈紅色或紫紅色，呈色深度與H2O2濃度成正比臨床意義：表示分泌物中有益菌如乳酸桿菌的多少，陰性表明乳酸桿菌多，清潔度高。2、白細胞酯酶活性測定

白細胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽，釋放出溴吲哚基，后者在氧存在的條件下呈藍色，呈色深度與白細胞酯酶活性成正比。臨床意義：用來表示白細胞的多少，陽性表明白細胞多于15/HP，陰道炎呈陽性。陰道分泌物化學檢驗

5、乙酰氨基葡萄糖苷酶活性測定

白色念珠菌和滴蟲有很強的乙酰氨基葡萄糖苷酶活性，水解對硝基苯-N-乙酰-β-D-乙酰氨基葡萄糖苷，釋放出對硝基苯酚，后者在堿性條件下呈黃色，呈色深度與乙酰氨基葡萄糖苷酶活性成正比臨床意義：陽性，若同時pH≥4.8，表示可能滴蟲感染；若同時pH≤4.6,則表明霉菌感染。6、胺試驗陰道分泌物加2.5mol/LKOH溶液時出現(xiàn)魚腥味氣味。臨床意義：細菌性陰道炎呈陽性。五、陰道分泌物有形成分檢驗

1、清潔度2、陰道毛滴蟲檢驗3、真菌檢驗4、淋病奈瑟菌5、陰道加德納菌6、線索細胞1、清潔度取陰道分泌物，用生理鹽水涂片，高倍鏡檢查，根據(jù)所含WBC（或膿細胞）、上皮細胞、桿菌、球菌的多少，分成Ⅰ~Ⅳ度，清潔度的判定標準見表。參考范圍：I-II度為正常，III-IV度為異常。清潔度桿菌球菌上皮細胞膿細胞或白細胞個數(shù)Ⅰ多無滿視野0~5個/HPⅡ中少?視野5~15個/HPⅢ少多少15～30個/HPⅣ無大量無>30個/HP表層細胞角化的陰道鱗狀上皮（10×100油鏡）中層陰道鱗狀上皮細胞（10×40油鏡）

陰道優(yōu)勢菌的作用分泌乳酸，維持酸性環(huán)境

占位性保護刺激機體免疫系統(tǒng)維持陰道微生態(tài)正常的核心是維持乳酸桿菌的優(yōu)勢地位！分泌H2O2、乳酸菌素和硬脂酸等營養(yǎng)競爭乳酸桿菌的作用正常的陰道分泌物（革蘭染色）II度（濕片）III度（濕片）2、陰道毛滴蟲陰道毛滴蟲呈梨形，后端尖，約為白細胞的2~3倍大小，蟲體頂端有鞭毛4根，體部有波動膜，后端有軸柱凸出。在25~42°C下可活動，它能消耗或吞噬陰道上皮細胞內(nèi)的糖原，阻礙乳酸生成，改變了陰道酸堿度，破壞陰道防御機制。臨床表現(xiàn)：陰道會產(chǎn)生黃綠色泡沫或米糠狀有惡臭的分泌物，有時會有外陰瘙癢或是下腹部輕微疼痛，嚴重會導致陰道黏膜腫脹、發(fā)紅、充血。滴蟲可寄生于陰道后穹隆，常引起滴蟲性陰道炎，可合并鄰近器官的感染，如尿道和尿道旁腺感染。主要傳播途徑是通過衣物或性交。在男性可長時間寄生，具有感染性，經(jīng)直接或間接方法傳播，男性常為攜帶者，發(fā)病率為2~１５%。女性則達10~２５%。陰道毛滴蟲（TV）前鞭毛細胞核后鞭毛波動膜軸柱陰道毛滴蟲（TV）陰道毛滴蟲（美蘭染色）陰道毛滴蟲檢驗方法1.濕片法，操作簡單，陽性檢出率為50%，標本注意保溫，迅速送檢，可觀察到陰道毛滴蟲的活動，可提高檢出率。2.涂片染色法，敏感性和陽性率檢出率高。3.干化學法，滴蟲有很強的乙酰氨基葡萄糖苷酶活性，水解對硝基苯-N-乙酰-β-D-乙酰氨基葡萄糖苷，釋放出對硝基苯酚，后者在堿性條件下呈黃色，呈色深度與乙酰氨基葡萄糖苷酶活性成正比。3、真菌檢驗真菌性陰道炎在陰道抵抗力低的時候容易患病,陰道真菌多為白色假絲酵母菌,當陰道內(nèi)糖原增多、酸性增強時，真菌迅速繁殖引起炎癥，多內(nèi)孕婦、糖尿病患者及接受大量雌激素治療患者。臨床癥狀：外陰瘙癢或灼痛為主要癥狀，急性期白帶增多，外因性排尿困難，外陰地圖樣紅斑。分泌物呈乳凝塊或豆腐渣樣。真菌好在陰道前，中、段的側(cè)壁生長。真菌孢子和菌絲（濕片）真菌孢子和菌絲（濕片）真菌孢子和菌絲（革蘭染色）真菌和其它病原體混合感染真菌和陰道加德納菌真菌和陰道毛滴蟲真菌檢驗方法濕片法采用顯微鏡濕片高倍鏡鏡檢見到白色絲假酵母菌的卵圓形孢子或假菌絲。涂片染色法

涂片美蘭或革蘭染色后油鏡觀察，可見芽胞、孢子或與出芽細胞相連接的菌強絲，成鏈狀及分支狀，敏感性和陽性率檢出率高。干化學法

白色念珠菌有很強的乙酰氨基葡萄糖苷酶活性，水解對硝基苯-N-乙酰-β-D-乙酰氨基葡萄糖苷，釋放出對硝基苯酚，后者在堿性條件下呈黃色，呈色深度與乙酰氨基葡萄糖苷酶活性成正比。培養(yǎng)法采用真菌培養(yǎng)基培養(yǎng)，提高檢出率。4、淋病奈瑟菌

（Neisseriagonorrhoeae）淋病由淋病奈瑟球菌(NG，簡稱淋球菌)引起的泌尿生殖系統(tǒng)的化膿性感染，也是目前世界上發(fā)病率較高的性傳播疾病之一。人類是淋病奈瑟菌唯一的宿主。女性淋球菌感染主要部位為子宮頸，部分患者無自覺癥狀。表現(xiàn)為白帶增多，為膿性或不具有特性，常有外陰刺癢和燒灼感，伴宮頸充血，觸痛，偶有下腹痛及腰痛。尿道口充血，有觸痛及膿性分泌物，有輕度尿頻、尿急、尿痛，排尿時有燒灼感；淋菌性陰道炎較少見，癥狀輕微，有些患者有腹部墜脹，腰背酸痛，白帶較多，有些患者有下腹痛和月經(jīng)過多等。分泌物呈粘液性或膿性。淋病奈瑟菌

（Neisseriagonorrhoeae）細胞內(nèi)（革蘭染色）細胞外（革蘭染色）淋病奈瑟菌（美蘭染色）淋病奈瑟菌

（Neisseriagonorrhoeae）淋球菌其他革蘭陰性雙球菌淋病奈瑟菌檢驗方法涂片染色法

染色后油鏡觀察，革蘭氏陰性雙球菌，形似腎或咖啡豆狀，凹面相對，除散在于白細胞之間外，還可見于被吞噬于中性粒細胞之內(nèi)，由于陰道分泌物雜菌多，因此淋病奈瑟菌容易漏檢或誤診，所以必要進行細菌培養(yǎng)確認。報告：找到“細胞內(nèi)或細胞外雙球菌”。培養(yǎng)法采用巧克力瓊脂或血瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)法對癥狀很輕或無癥狀的患者都是較敏感的方法，只要培養(yǎng)陽性就可確診，且有利于菌株分型和藥過敏試驗。在基因診斷問世以前，培養(yǎng)是世界衛(wèi)生組織推薦的篩選淋病的惟一方法。免疫技術采用單克隆抗體技術生產(chǎn)的淋病抗血清，可與受檢查者宮頸分泌物中的淋病奈瑟菌結(jié)合，采用免疫熒光技術，在30分鐘內(nèi)即可準確得出結(jié)果。比培養(yǎng)法快，比涂片更準確，較易掌握?；蛟\斷運用PCR技術也可對淋病奈瑟菌過少，雜菌過多的標本進行診斷。5、陰道加德納菌

(gardnerellavaginalis，GV)加德納氏菌：革蘭氏陰性或染色不定，有時可染成革蘭氏陽性的小桿菌。大小為（1.5-2.5）μm×0.5μm,具有多形性，呈桿狀或球桿狀，無鞭毛，無莢膜，無芽孢。陰道加德納菌與其他厭氧菌在陰道內(nèi)過度生長可引起細菌性陰道炎。陰道分泌物呈奶油狀大量排出，有惡臭，找到陰道分泌物中的線索細胞，是診斷加德納氏菌陰道炎的重要指標。陰道分泌物PH常大小4.5，胺試驗陽性，唾液酸苷酶或脯氨酸氨基肽酶陽性。陰道加德納菌

(gardnerellavaginalis，GV)下一頁6、線索細胞（cluecell）是診斷BV的重要指標之一

線索細胞：是陰道鱗狀上皮細胞的胞質(zhì)表面粘附大量GV及短小桿菌或其他厭氧菌，使上皮細胞表面粗糙，有斑點和大量細小顆粒，其邊緣不整齊，呈鋸齒狀。線索細胞（cluecell）粘附大量加德納菌（革蘭染色）粘附大量彎曲弧菌（革蘭染色）下一頁線索細胞（濕片）線索細胞（美蘭染色）六、細菌性陰道炎（BV）是由于陰道生態(tài)環(huán)境的改變，正常生態(tài)菌群乳酸桿菌減少，陰道加德納菌（GV）和大量致病性厭氧菌（如彎曲弧菌）增多，GV可產(chǎn)生丙酮酸和氨基酸，被厭氧菌群脫羧基生成相應的胺，促使陰道

pH值升高，另外，精液也可使陰道pH值升高，在此環(huán)境下GV逐漸形成優(yōu)勢菌。厭氧菌產(chǎn)生的胺可導致上皮細胞脫落和大量分泌物排出，陰道分泌物中氨增加，產(chǎn)生特殊腥臭味，導致BV的發(fā)病。GV還可引起早產(chǎn)、產(chǎn)褥熱、新生兒敗血癥等。精液（堿性）

BV患者促使

(殺死厭氧菌的作用減弱或消失)乳酸桿菌↓

陰道

分泌物

產(chǎn)生

GV獲得合適的pH環(huán)境，逐漸形成優(yōu)勢菌

過氧化氫↓

(過度生長，可達1千-1萬倍)胺

↑使

陰道pH↑（≥4．5）

陰道分泌物↑胺↑

可引起

產(chǎn)生臭味(魚腥味)導致BV

使

GV

+某些厭氧菌大量繁殖↑

生成相應產(chǎn)生

高濃度的丙酮酸和氨基酸厭氧菌1、皮膚粘膜過敏，血管通透性↑2、陰道上皮細胞脫落和大量分泌物排出BV發(fā)病機理示意圖脫羧基陰道pH↑早產(chǎn)、產(chǎn)褥熱、新生兒敗血癥等上頁細菌性陰道炎（BV）BV的診斷標準①陰道分泌物增多，灰白色稀薄均勻如奶油樣。②分泌物的pH值>4.5。③胺試驗陽性(即有魚腥氣味)。④線索細胞陽性。(以線索細胞檢出≥20％為陽性)，革蘭染色見特定菌群分布。第4項加上前3項中2項即可診斷BV。七、質(zhì)量控制嚴格做好實驗前質(zhì)量控制，把好標本采集送檢關

嚴格做好實驗中質(zhì)量控制，把好標本的檢測關

嚴格做好實驗后質(zhì)量控制，把好檢測結(jié)果報告關實驗前質(zhì)量控制及時告知患者正確做好采樣前的準備。嚴格按照陰道分泌物采集要求進行采樣送檢。在寒冷天氣，檢查TV的標本要采取保溫措施送檢，防止TV活動能力明顯減低或死去，使?jié)衿z出率降低。淋球菌易自溶，可使陽性標本變成陰性結(jié)果，因此，采樣后應及時送檢，立即涂片風干染色鏡檢返回實驗中質(zhì)量控制建立統(tǒng)一的操作程序，嚴格控制各種影響因素；做好專業(yè)培訓，掌握好方法學的各個環(huán)節(jié)，掌握不同檢查方法陰道分泌物中正常和異常各種有形成分的辨認和相應的臨床意義；做好標本的收集、編號、登記等工作，嚴防“張冠李戴”的差錯發(fā)生；試驗中質(zhì)量控制所用玻璃器材應干凈，染色液應新鮮，無污染；根據(jù)不同檢查方法進行涂片的制作，注意染色標本涂片宜??；嚴格遵守染色操作規(guī)程，厚涂片脫色時間應延長，否則革蘭陰性菌染成陽性菌，沖洗應防止涂膜脫落；試驗中質(zhì)量控制觀察時應注意陰道病原體可單一感染，也可混合感染，因此，應低倍鏡觀察全片，選擇厚薄適宜的區(qū)域，濕片法用高倍鏡、染色法用油鏡檢查；觀察標準應一致，避免漏檢；必要時可作培養(yǎng)對照，以保證檢測結(jié)果的準確；返回試驗后質(zhì)量控制濕涂片法以高倍視野報告，染色法用油鏡視野報告，結(jié)果應力求準確可靠，報告方式要力求一致；有條件時，可采用圖文方式報告，提供檢測結(jié)果的依據(jù)，防止醫(yī)療糾紛的發(fā)生試驗后質(zhì)量控制應加強與臨床科室聯(lián)系，對于可疑和與臨床診斷不吻合的標本應進行復查；染色標本可保存，可進行復查和回顧性室內(nèi)質(zhì)量控制；建立室內(nèi)質(zhì)控制度，也可在較大范圍開展室間質(zhì)量評價，以提高陰道疾病實驗診斷的整體水平。提問1.豆腐渣樣白帶是哪種陰道炎特有的？A.念珠性陰道炎B.細菌性陰道炎C.滴蟲性陰道炎D.支原體感染2.滴蟲性陰道炎白帶的PH值一般為多少？A.4.0

B.4.5C.5.5~6.0D.7.03.陰道分泌物用生理鹽水涂片，高倍鏡下可見乳酸桿菌大量，球菌未見，上皮細胞滿視野，WBC:0~5個每高倍視野，應該判定為清潔度幾度？A、