2022-2023學年浙科版（2019）選擇必修三 1.2 純凈的目標微生物可通過分離和純化獲得（第1課時） 課件（28張）

浙科版2019版選擇性必修三第一節(jié)體液調(diào)節(jié)是通過化學信號實現(xiàn)的調(diào)節(jié)第一章發(fā)酵工程第二節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)通過下丘腦控制內(nèi)分泌系統(tǒng)第二節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)通過下丘腦控制內(nèi)分泌系統(tǒng)第二節(jié)純凈的目標微生物可通過

分離和純化獲得素養(yǎng)目標浙科版2019版選擇性必修三采用劃線或涂布的接種方法能夠?qū)崿F(xiàn)對

目標微生物的分離和純化第一節(jié)體液調(diào)節(jié)是通過化學信號實現(xiàn)的調(diào)節(jié)第一節(jié)體液調(diào)節(jié)是通過化學信號實現(xiàn)的調(diào)節(jié)第一章發(fā)酵工程第二節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)通過下丘腦控制內(nèi)分泌系統(tǒng)第二節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)通過下丘腦控制內(nèi)分泌系統(tǒng)第二節(jié)純凈的目標微生物可通過

分離和純化獲得（1）一、采用劃線或涂布的接種方法能夠?qū)崿F(xiàn)對目標微生物的分離和純化1.接種方法接種：微生物進入培養(yǎng)基質(zhì)的過程。自然接種：牛奶暴露在空氣中，會由于微生物落入、生長、繁殖而變質(zhì)。人為接種：挑取目標微生物的純種將其轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，或在培養(yǎng)基斜面連續(xù)劃線用于保存菌種（接種環(huán)）。單菌落：在固體培養(yǎng)基上通過接種、培養(yǎng)獲得的由一個細胞分裂形成的、肉眼可見的、有一定形態(tài)構(gòu)造的子細胞集團。2.單菌落分離意義：單菌落的分離是消除雜菌污染的通用方法，也是用于篩選高表達量菌株的最簡便方法之一.單菌落分離或接種的方法：通過平板劃線法和稀釋涂布平板法等方法獲得單菌落3．平板劃線法：（1）原理：接種環(huán)劃線的過程中，菌液被逐漸稀釋，最終出現(xiàn)單個細菌，培養(yǎng)后形成單菌落。(2)方法：通常用___________蘸取液體培養(yǎng)物或挑取固體表面的微生物后，在固體培養(yǎng)基表面進行連續(xù)平行劃線、______________或其他形式的劃線，以實現(xiàn)接種的目的。

(3)劃線方式的比較扇形劃線接種環(huán)（4）過程：

不能使用脫脂棉，否則容易吸水，造成污染。棉塞也可用封口膜替代或6層紗布封口（1）一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；（2）二是存留在劃破處的單個細胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。灼燒接種環(huán)接種環(huán)冷卻后，蘸取帶菌培養(yǎng)物在酒精燈火焰旁，讓帶菌種的接種環(huán)在固體培養(yǎng)基上第一區(qū)劃線。

燒灼接種環(huán)，從第一區(qū)末端開始往第二區(qū)劃線

燒灼接種環(huán)，從第二區(qū)末端開始往第三區(qū)劃線

燒灼接種環(huán)，從第三區(qū)末端開始往第四區(qū)劃線

燒灼接種環(huán)，從第四區(qū)末端開始往第五區(qū)劃線

燒灼接種環(huán)，

避免污染

培養(yǎng)皿倒置，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)

用接種環(huán)蘸菌液____次，在固體培養(yǎng)基表面劃線，下一次劃線應從上一次劃線的______開始。每次劃線前接種環(huán)要

，聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以在劃線的末端出現(xiàn)不連續(xù)的

。若共劃線五次，接種環(huán)要燒灼____次。另外：每次劃線都不能與之前的線條_____；不能將最后一次劃線與第一次劃線相連；不能_____培養(yǎng)基。培養(yǎng)基需

后，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。劃破重疊6末端1例題滅菌單菌落

倒置注意：1.無論是何種劃線法，蘸取菌種前和劃線后，接種環(huán)都要灼燒滅菌。2.無論是何種劃線法，菌種只蘸取一次。

1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？思考：

操作的第一步灼燒接種環(huán)：是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)：是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后仍灼燒接種環(huán)：能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。例題1.微生物接種的方法很多,平板劃線法是常用的一種。下圖是平板劃線示意圖,劃線的順序為①②③④。下列相關(guān)敘述錯誤的是(

)A.劃線操作時,將蘸有菌種的接種環(huán)插入培養(yǎng)基B.平板劃線后,培養(yǎng)微生物時要倒置培養(yǎng)C.不能將第④區(qū)域的劃線與第①區(qū)域的劃線相連D.在第②~④區(qū)域中劃線前都要對接種環(huán)進行滅菌A劃線時不能將接種環(huán)插入培養(yǎng)基,而是在培養(yǎng)基表面劃線例題2.下列有關(guān)分離酵母菌實驗操作的敘述,錯誤的是(

)A.在第二次劃線時,接種環(huán)上的菌種直接來源于菌液B.第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物C.每次劃線前,灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種D.劃線結(jié)束后,灼燒接種環(huán)能及時殺死接種環(huán)上的菌種,避免細菌污染環(huán)境和感染操作者A例3：在分離、純化大腸桿菌實驗中，劃線接種（甲）、培養(yǎng)結(jié)果（乙）如圖所示。有關(guān)敘述錯誤的是（）Ａ．接種前應對培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌Ｂ．連續(xù)劃線的目的是獲得單個細菌形成的菌落Ｃ．接種過程中至少需要對接種環(huán)灼燒５次Ｄ．甲中ａ區(qū)域為劃線的起始位置例4．下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述中，不正確的是（）Ａ．獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染Ｂ．單菌落的分離是消除污染雜菌的通用方法Ｃ．培養(yǎng)基都必須使用高壓蒸汽滅菌法滅菌Ｄ．倒置平板防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水滴落DC例5：要篩選得到純凈的菌種，通常在固體培養(yǎng)基上劃線分離，下列操作正確的是（）Ａ．每次劃線時，接種環(huán)都需蘸菌液一次Ｂ．劃線分離時，需要把接種環(huán)深入到培養(yǎng)基中進行接種Ｃ．在超凈臺中接種時要在酒精燈火焰旁進行Ｄ．劃線分離后將培養(yǎng)皿正放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)c例6：若實驗室為分離純化優(yōu)良菌種進行如下操作，排序最合理的是（）Ａ．②①④③Ｂ．②①④①③②Ｃ．②①④②③②Ｄ．①④①③②B4．稀釋涂布平板法接種時，通常需要先將菌液進行_____________，并在培養(yǎng)皿側(cè)面或底面做好標記后，將稀釋度不同的菌液各取0.1mL，（移液管或槍）加在固體培養(yǎng)基表面，然后用___________將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面上進行培養(yǎng)。這樣在稀釋度適當?shù)墓腆w培養(yǎng)基表面也能得到單個細胞生長繁殖成的單菌落。根據(jù)菌落的形狀，大小、顏色、邊緣或表面光滑與否等特征可以選取目標微生物繼續(xù)培養(yǎng)。梯度稀釋涂布器a.原理：用無菌水將菌液進行一系列的梯度稀釋，在適當?shù)南♂尪认?，可培養(yǎng)得到相互分開的單菌落。分離、計數(shù)微生物——稀釋涂布平板法無法計數(shù)1591720無法計數(shù)1411310無法計數(shù)15011319ml無菌水加入0.1ml稀釋液（移液管）例：將1g土樣加到盛有99ml無菌水的三角瓶中，如圖進行稀釋，每個稀釋度涂布三個平板，根據(jù)結(jié)果計算1g土樣中菌的數(shù)量？注意：1.分離得到單菌落一般以培養(yǎng)皿中有20個以內(nèi)菌落為宜。2.計算微生物數(shù)量一般以培養(yǎng)皿中有30~300個菌落為宜。（159+141+150）÷3×10×105=1.5×108個/gb.過程：稀釋菌液（10-5~10-7倍）涂布培養(yǎng)

用移液管吸取1ml細菌培養(yǎng)液加入另一個盛有9ml無菌水的試管中，混合均勻，以此制成10-1倍的稀釋液，依次方法得到10-5~10-7倍稀釋液。用移液管取0.1ml稀釋度不同的菌液，加在培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基上。再將玻璃刮刀放在酒精燈火焰上灼燒，待刮刀冷卻后，在酒精燈旁打開培養(yǎng)皿，將菌液涂布到整個平面上。將培養(yǎng)皿倒置，在37℃恒溫箱中培養(yǎng)24~48h。稀釋涂布平板法涂布分離：單菌落更易分開，可用于計數(shù)，但操作復雜。劃線分離：方法簡單，但單菌落較難分開，不能計數(shù)。例7：劃線分離法和涂布分離法是接種微生物的兩種常用方法，下列描述正確的是（）Ａ．都要將菌液進行一系列的梯度稀釋Ｂ．劃線分離法是將不同稀釋度的菌液通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作Ｃ．涂布分離法是將不同稀釋度的菌液倒入液體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)Ｄ．都能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落D例題8：（溫州十校聯(lián)合體期初聯(lián)考）有些細菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學欲從污染的土壤中篩選出高效降解原油的菌株。請回答下列問題：（１）在篩選過程中，應將土壤樣品稀釋液接種于以

為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于

培養(yǎng)基。（２）純化菌種時，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即

和

。常用的操作工具分別是

和

。（３）為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍分解圈的大小，分解圈大說明該菌株的降解能力

。（４）實驗室常用的滅菌方法有過濾滅菌法、

和

。無菌技術(shù)要求實驗操作應在酒精燈

附近進行，以避免周圍環(huán)境中微生物的污染。原油選擇平板劃線法稀釋涂布平板法接種環(huán)涂布器強灼燒滅菌高壓蒸汽滅菌火焰某同學嘗試過程③的操作，其中一個平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖乙所示。該同學的接種方法是

；推測該同學接種時可能的操作失誤是

。稀釋涂布平板法涂布不均勻

現(xiàn)取5mL陳泡菜汁用于測定其中的乳酸菌含量,可采取

方法進行操作:取0.5mL泡菜汁逐級稀釋至10-5,取10-4、10-5稀釋液各0.ImL,分別接種到固體培養(yǎng)基,置于特定環(huán)境培養(yǎng)48h后，菌落計數(shù)。若培養(yǎng)結(jié)果如下圖所示，則5mL陳泡菜汁中乳酸菌約

個.稀釋涂布平板法7x107例題9：圖甲、圖乙是微生物接種常用的兩種方法，請回答相關(guān)問題：

（１）圖甲是利用

法進行微生物接種，圖乙是利用

法進行微生物接種。

（２）這兩種方法所用的接種工具分別是

和

；

對這兩種接種