討論ttMA與SPMA動力學(xué)研究及劑量反應(yīng)效應(yīng)關(guān)系復(fù)習(xí)課件

職業(yè)接觸苯生物限值研究報告

武漢科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院宋世震songshizhen64@126.com

討論ttMA與SPMA動力學(xué)研究及劑量反應(yīng)效應(yīng)關(guān)系復(fù)習(xí)課件研究選題背景1.

職業(yè)危害現(xiàn)狀職業(yè)病病人數(shù)量大，近年新發(fā)病例數(shù)仍呈上升趨勢，塵肺病、職業(yè)中毒等職業(yè)病發(fā)病率居高不下，2007年統(tǒng)計資料顯示：塵肺病累計62萬例;1991～2007年累計發(fā)生職業(yè)中毒4萬多例,急性中毒達(dá)2.2萬例,慢性中毒近1.9萬例；根據(jù)衛(wèi)生部公布的統(tǒng)計數(shù)據(jù)，近年在各類職業(yè)病中，職業(yè)中毒始終占有很大比例，約13％～20％；急性職業(yè)中毒以一氧化碳、氯氣和硫化氫中毒最為嚴(yán)重。慢性職業(yè)中毒以鉛及其化合物、苯和二硫化碳中毒較為嚴(yán)重。2.職業(yè)衛(wèi)生服務(wù)狀況在最發(fā)達(dá)的工業(yè)化國家，職業(yè)衛(wèi)生的服務(wù)質(zhì)量好、服務(wù)水平高、服務(wù)對象面廣，服務(wù)覆蓋了70%～90%的勞動人群。我國職業(yè)衛(wèi)生覆蓋率卻僅為10%～20%左右，與社會需求存在很大差異，尤其一些中小企業(yè)、民營企業(yè)的勞動者基本得不到職業(yè)衛(wèi)生服務(wù)，嚴(yán)重?fù)p害了勞動者生命健康權(quán)益，因患職業(yè)病而導(dǎo)致家庭貧困已經(jīng)成為突出的社會問題。研究選題背景1.職業(yè)危害現(xiàn)狀研究選題背景3.

職業(yè)危害防治對策1.法律層面政府必須通過立法，運用法律和經(jīng)濟手段來規(guī)范企業(yè)行為，做好職業(yè)危害防治工作；2.行政層面以政府主導(dǎo)，多部門參與，

建立垂直的勞動安全衛(wèi)生監(jiān)察體制，加大監(jiān)察工作力度；3.技術(shù)層面加強建設(shè)衛(wèi)生監(jiān)督、疾病控制、職業(yè)病防治三支隊伍，規(guī)范技術(shù)服務(wù)行為，提高服務(wù)的水平和能力。完善健康監(jiān)護管理規(guī)范，加強職業(yè)健康監(jiān)護工作，組織開展重點監(jiān)督檢查。做好宣傳教育工作，強化職業(yè)病危害告知、警示標(biāo)識、警示標(biāo)志和個人防護用品在企業(yè)職業(yè)病防治中的作用，加強對用人單位負(fù)責(zé)人和勞動者的職業(yè)病防治法律、法規(guī)知識培訓(xùn)。探索我國適宜的基本職業(yè)衛(wèi)生服務(wù)。

研究選題背景3.職業(yè)危害防治對策研究選題背景4.職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)研制1.職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)研制意義立法依據(jù)執(zhí)法標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)規(guī)范2.我國職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)研制發(fā)展趨勢生產(chǎn)環(huán)境檢測—生產(chǎn)環(huán)境、勞動過程、勞動者(生物標(biāo)志物）研究選題背景4.職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)研制研究選題背景5.生物標(biāo)志物—接觸生物標(biāo)志物（一級預(yù)防）、易感性生物標(biāo)志物（一級預(yù)防）、效應(yīng)生物標(biāo)志物（二級預(yù)防）職業(yè)接觸苯的生物限值研究現(xiàn)況職業(yè)苯接觸生物標(biāo)志物—血、尿苯、尿反-反式黏糠酸（ttMA）、苯巰基尿酸（SPMA）、酚、兒茶酚、氫醌、苯三酚苯生物標(biāo)志物接觸標(biāo)志物效應(yīng)標(biāo)志物易感標(biāo)志物環(huán)羥化代謝產(chǎn)物（苯酚、鄰苯二酚、氫醌、苯三酚）苯巰基尿酸(S-PMA)反反式粘糠酸(tt-MA)血苯尿苯生物大分子加合物研究選題背景5.生物標(biāo)志物—接觸生物標(biāo)研究選題背景國內(nèi)外研究狀況尿反-反式黏糠酸（ttMA）、苯巰基尿酸（SPMA）根據(jù)生產(chǎn)環(huán)境空氣苯接觸限值，確定生物接觸限值（生物等效限值）。如美國TWA=0.5ppm(1.6mg/m3),STEL=2.5ppm(8mg/m3)，推薦尿ttMA生物限值為0.5mg/gCr，尿SPMA為25μg/gCr；法國和芬蘭職業(yè)接觸限值均為TWA=5ppm(16mg/m3)，推薦尿ttMA為生物限值為=5mg/L；意大利職業(yè)接觸限值TWA=1ppm(3.2mg/m3)，推薦尿ttMA生物限值為0.85mg/gCr；新加坡職業(yè)接觸限值為TWA=1ppm（3.2mg/m3），制定尿SPMA的生物接觸限值為45μg/gCr；德國在研制苯的生物限值時，考慮到苯的致癌性特征，未確定其生物耐受量(BAT)，而是根據(jù)工作場所空氣中致癌物濃度與生物材料中致癌物或代謝物含量之間的關(guān)系制定致癌物接觸當(dāng)量（EKA），即按作業(yè)場所空氣中苯的梯級濃度規(guī)定尿中ttMA不應(yīng)超過的限值，如接苯濃度為2mg/m3時，尿ttMA為1.6mg/L、尿SPMA為25μg/gCr；接苯濃度為3.3mg/m3時，尿ttMA為2mg/L、尿SPMA為40μg/gCr；接苯濃度為6.5mg/m3時，尿ttMA為3mg/L、尿SPMA為90μg/gCr。我國將苯的職業(yè)接觸限值從40mg/m3（MAC）修訂為6mg/m3（PC-TWA）和10mg/m3（PC-STEL），目前我國未制定生物接觸限值。研究選題背景國內(nèi)外研究狀況研究方案技術(shù)路線查閱、整理資料確定研究方案檢測方法預(yù)實驗現(xiàn)場采樣現(xiàn)場樣品處理統(tǒng)計分析結(jié)論實驗室處理分析驗證實驗研究方案技術(shù)路線查閱、整理資料確定研究方案研究方案研究對象與內(nèi)容1.苯暴露作業(yè)場所空氣苯濃度監(jiān)測；2.苯暴露作業(yè)工人尿中反-反式粘糠酸（ttMA）、苯巰基尿酸（S-PMA）含量測定；3.職業(yè)接苯生物接觸限值推薦。

研究方案研究對象與內(nèi)容研究方案研究方法與目的1.苯暴露作業(yè)場所空氣苯濃度監(jiān)測1.1空氣采樣：區(qū)域采樣在苯作業(yè)場所勞動者活動范圍內(nèi)布點，以200ml/min流量采集4小時空氣，進行定性與定量分析；1.2個體采樣:接苯工人腰部佩帶個體采樣器（TMP-150型），連接膠管至衣領(lǐng)口用夾子固定，插入活性炭吸附管，采集工人呼吸帶苯濃度，按100ml/min流量在上、下午各采樣2h。采樣后，立即封閉活性碳管兩端，置于清潔容器內(nèi)運輸和保存。樣品置于冰箱內(nèi)至少可保存14天。1.3空氣樣品處理：將采樣管的前后段活性碳分別放入溶劑解吸瓶中，各加入1.0ml二硫化碳，塞緊管塞，振搖1min，解吸30min。解析液供測定。1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：用二硫化碳稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)系列，氣相色譜法檢測，每個濃度重復(fù)測定3次。以測得的峰高或峰面積均值分別對苯濃度（μg/ml）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。1.5樣品測定：氣相色譜法檢測用測定標(biāo)準(zhǔn)系列的操作條件測定樣品和空白對照的解吸液；測得的樣品峰高或峰面積值減去空白對照峰高或峰面積值后，由標(biāo)準(zhǔn)曲線得苯的濃度（μg/ml）。按式C＝（c1+c2）×v/V0×D公式計算空氣中苯的濃度公式中：C：空氣中苯的濃度，mg/m3；c1，c2：分別為測得的前后段解吸液中本的濃度，μg/ml；v：解吸液的體積，ml；V0：換算成標(biāo)準(zhǔn)狀況下的采樣體積，L；D：解吸效率％。研究方案研究方法與目的研究方案研究方法與目的苯暴露作業(yè)工人選擇：武漢鋼鐵公司某部門苯接觸工人56名，年齡在19～43歲，平均年齡32.9±5.9歲，工齡在半年到24年之間，平均工齡9.4±6.9年；同時選擇24名健康、非苯接觸工人作為對照組，年齡在22～37歲，平均年齡28.4±5.3歲；武漢地區(qū)兩個制鞋廠鞋底涂粘膠和鞋面粘合車間職業(yè)接觸苯勞動者55人，年齡在19～52歲，平均年齡28.9±10.6歲，工齡在1年到35年之間，平均工齡12.32±7.89年。尿樣采集、保存：用具蓋聚乙烯塑料瓶收集接苯工人空氣苯監(jiān)測當(dāng)日班前尿和班末尿，按100ml尿液加4-5滴的比例加入6mol/L鹽酸，在低于0°C下運輸，尿樣采集后應(yīng)在48小時內(nèi)檢測，若近期不檢測，放置4°C條件下可保存2周。在–20℃冰箱冷凍保存4個月。尿中肌酐檢測：尿樣到實驗室后依據(jù)WS/T97-1996苦味酸分光光度法及時測定尿中肌酐（Cr）濃度。研究方案研究方法與目的研究方案研究方法與目的1.尿中ttMA檢測—HPLC-UV分析方法色譜柱：ODS柱（4.6×150mm×5μm），自裝預(yù)柱C18保護柱（4×20mm）；流動相：冰乙酸-四氫呋喃-甲醇-水＝1︰2︰10︰87，流速：0.9ml/min，紫外檢測波長264nm，柱溫：25℃；進樣量10μl。尿中ttMA的測定采用高效液相色譜法（HPLC）和液-液萃取制備樣品技術(shù)。10ml錐形具塞離心管中加入0.5ml尿樣本，分別加入50μl香草酸內(nèi)標(biāo)應(yīng)用液（100μg/ml）、2mol鹽酸100μl，旋渦快混10秒后，加入4ml乙酸乙酯，蓋緊磨口蓋，在振蕩器上往復(fù)振蕩20min（240次/分），離心15min（2500轉(zhuǎn)/分），吸取上層有機相于另一5ml離心管中，40°C下氮氣流揮干，殘渣用1ml冰乙酸/四氫呋喃/甲醇/水=1:2:10:87（v/v）流動相混合液復(fù)溶，旋混30秒鐘，取10μl進樣，在紫外檢測器264nm下測定，以保留時間和內(nèi)標(biāo)定性，以ttMA（μg/ml）濃度（X）對相應(yīng)待測物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。研究方案研究方法與目的研究方案2.尿中SPMA檢測—HPLC-MS分析方法色譜條件：色譜柱ODS(150mm×2.0mm,4.6μm,)；保護柱：ODS(50mm×2.0mm,4.6μm)；流動相：乙腈：0.3％甲酸水溶液＝25︰75；流速：0.2ml/min；柱溫：35℃；進樣量：5μl。質(zhì)譜條件：離子源為電噴霧離子源(ESI)，負(fù)電模式；接口電壓（IV）：4.5kV，脫溶劑管溫度(CDL)電壓：-15V；模塊加熱器(HeatBlock)溫度：200℃；脫溶劑管溫度：230℃，霧化氣流：1.5L/min。定量測定時采用選擇離子監(jiān)控(SIR)模式：m/z238。樣品處理方法與前述HPLC一致，采用氯仿∶異丙醇（5∶1，v/v）為預(yù)處理萃取溶液，不同點是以乙腈︰0.3%甲酸（25︰75）為流動相，經(jīng)ODS柱二元等度洗脫，待測樣品揮干，殘渣用250μl甲醇溶解，渦旋30s，10000r/min離心5min，取適量上清液，5μl進樣測定。電噴霧離子源負(fù)離子模式檢測，對SPMA全離子峰（掃描范圍：100-300m/z）進行掃描，分子離子峰M/Z238豐度最大，靈敏度最高。研究方案2.尿中SPMA檢測—HPLC-M研究方案研究方法與目的實驗數(shù)據(jù)處理：所有數(shù)據(jù)經(jīng)MicrosoftExcel2000建立數(shù)據(jù)庫，用SAS8.1軟件進行t檢驗、相關(guān)及回歸分析。以苯暴露工人尿中反-反式粘糠酸、苯巰基尿酸為生物接觸標(biāo)志物,參考各國反-反式粘糠酸、苯巰基尿酸生物接觸限值及其RIE，兼顧我國PC-STEL，以我國PC-TWA為依據(jù)，結(jié)合實際測定的職業(yè)苯接觸者反-反式粘糠酸、苯巰基尿酸及苯接觸者體檢狀況，線性回歸分析，提出我國苯暴露工人尿反-反式粘糠酸、苯巰基尿酸推薦生物接觸限值研究方案研究方法與目的研究結(jié)果區(qū)域苯濃度的測定由于工種不同，車間空氣中苯濃度也不同，對不同工種車間做區(qū)域濃度測定，范圍跨度較大，在42.08±34.12mg/m3左右，根據(jù)濃度由低到高分為三組，見表1。研究結(jié)果區(qū)域苯濃度的測定研究結(jié)果個體苯接觸劑量的測定圖1所示接苯工人實際接觸8小時時間加權(quán)評價濃度（8h-TWA）。圖1個體暴露生產(chǎn)環(huán)境空氣苯濃度：研究結(jié)果個體苯接觸劑量的測定圖1個體暴露研究結(jié)果尿中tt－MA測定方法的建立色譜行為ttMA和香草酸的保留時間分別在5.6min和14.0min左右，其標(biāo)準(zhǔn)品、非接苯者和接苯工人尿樣色譜圖見圖2。圖2.粘糠酸(5.6min)和內(nèi)標(biāo)物香草酸(14.0min)標(biāo)準(zhǔn)品(a)、非接苯尿樣(b)和接苯尿樣色譜圖(c)（a）（b）（c）研究結(jié)果尿中tt－MA測定方法的建立圖2.研究結(jié)果tt－MA標(biāo)準(zhǔn)曲線測定值

研究結(jié)果tt－MA標(biāo)準(zhǔn)曲線測定值研究結(jié)果回收率與精密度每一濃度配置5個樣本，按樣品前處理與分析方法操作測定，連續(xù)三天對質(zhì)量分析樣品進行測定。將第一天分析結(jié)果計算回收率，見表3；第二天分析結(jié)果計算日內(nèi)精密度，將三天的測定結(jié)果合并計算日間精密度，結(jié)果見表4。研究結(jié)果回收率與精密度研究結(jié)果苯接觸工人尿中苯代謝產(chǎn)物ttMA的測定結(jié)果24名非苯作業(yè)工人和56名苯作業(yè)工人個體接觸水平與班前和班末尿ttMA的排出規(guī)律進行了觀察，苯作業(yè)者班末尿中ttMA（9.51±7.70mg/gCr）明顯高于班前尿中ttMA（5.23±5.97mg/gCr），p<0.01；見表5。

研究結(jié)果苯接觸工人尿中苯代謝產(chǎn)物ttMA的研究結(jié)果班前尿ttMA與工人個體苯接觸量呈線性相關(guān)Y(mg/gCr)=0.924+0.108X(mg/m3)，（n=56，r=0.62，p<0.01）；班末尿ttMA與個體苯接觸量也存在良好的線性關(guān)系Y(mg/gCr)=2.103+0.177X(mg/m3)，（n=56，r=0.791，p<0.01），見圖3、4。圖3、4：56名苯接觸者暴露水平與尿中tt-MA濃度關(guān)系散點圖研究結(jié)果班前尿ttMA與工人個體苯接觸量呈研究結(jié)果回歸方程預(yù)測值比較將現(xiàn)場研究的接苯工人班末尿ttMA的直線回歸方程與Waidyanatha、Boogaard、Panev所作的直線回歸方程進行比較，并以我國職業(yè)苯接觸限值PC-TWA=6mg/m3代入各回歸方程，推算的工作班末或接觸末尿中ttMA含量，見表6。研究結(jié)果回歸方程預(yù)測值比較研究結(jié)果相對內(nèi)暴露指數(shù)不同苯暴露水平相對內(nèi)暴露指數(shù)的比較,見圖5。圖5不同苯暴露水平相對內(nèi)暴露水平

研究結(jié)果相對內(nèi)暴露指數(shù)圖5不同苯暴露水平相研究結(jié)果國外可借鑒的ttMA生物限值相對內(nèi)暴露的比較研究結(jié)果國外可借鑒的ttMA生物限值相對內(nèi)暴研究結(jié)果尿中SPMA測定方法的建立色譜條件LCMS-2010EV單重四極桿液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀,色譜柱：ODS(150mm×2.0mm,4.6μm,)；保護柱：ODS(50mmⅹ2.0mm,4.6um)；流動相：乙腈︰0.3％甲酸（25︰75,v/v）；流速：0.2ml/min；柱溫：35℃；進樣量：5μl；質(zhì)譜條件離子源為電噴霧離子源(ESI)，負(fù)電模式；接口電壓：4.5kV，脫溶劑管溫度(CDL)電壓：-15V；模塊加熱器(HeatBlock)溫度：200℃；CDL溫度：230℃，霧化氣流：1.5L/min。根據(jù)SPMA的子離子M/Z238-109，將掃描模式范圍設(shè)置為M/Z：100~300，在負(fù)電模式下的SPMA全離子掃描圖見圖4，最后定量測定時采用選擇離子監(jiān)控(SIR)模式：m/z238。圖65mg/l甲醇溶解SPMA樣品LC/ESI-/MS全離子掃描圖研究結(jié)果尿中SPMA測定方法的建立圖65研究結(jié)果色譜行為SPMA的保留時間分別在7.8min左右，其標(biāo)準(zhǔn)品、非接苯者、接苯加標(biāo)尿和接苯工人尿樣色譜圖見圖7。圖7巰基尿酸(7.8min)標(biāo)準(zhǔn)品(a)、非接苯尿樣(b)、非接苯尿樣加標(biāo)(c)和接苯尿樣色譜圖(d)研究結(jié)果色譜行為圖7巰基尿酸(7.8mi研究結(jié)果SPMA標(biāo)準(zhǔn)曲線測定值

研究結(jié)果SPMA標(biāo)準(zhǔn)曲線測定值研究結(jié)果回收率與精密度研究結(jié)果回收率與精密度研究結(jié)果樣品的穩(wěn)定性取6份尿樣，制備一個新鮮的合并樣品，加入SPMA80μg/L。將尿樣分成4組，每組6份，于當(dāng)天、第3天、第七天、第十四天各分析1組。保存時間分為2個檔次：普通溫度（4℃）、低溫冰箱（-20℃）。測定結(jié)果見表11。

研究結(jié)果樣品的穩(wěn)定性研究結(jié)果苯接觸工人尿中苯代謝產(chǎn)物SPMA測定結(jié)果

苯作業(yè)工人班末尿SPMA的分析結(jié)果顯示，班末尿SPMA與個體苯接觸量存在良好的線性關(guān)系Y(μg/gCr)=-8.625+18.367X(mg/m3)，（n=55，r=0.8035，P<0.01），見表12和圖8。研究結(jié)果苯接觸工人尿中苯代謝產(chǎn)物SPMA測定研究結(jié)果圖855名苯接觸者暴露水平與尿中SPMA濃度關(guān)系散點圖研究結(jié)果圖855名苯接觸者暴露水平與尿研究結(jié)果國外可借鑒的生物限值SPMA比較將現(xiàn)場研究的接苯工人班末尿SPMA的直線回歸方程與Ghittori、Sittert所作的直線回歸方程進行比較，并以我國職業(yè)苯接觸限值PC-TWA=6mg/m3代入各回歸方程，推算的工作班末或接觸末尿中SPMA含量，見表13。研究結(jié)果國外可借鑒的生物限值SPMA比較討論ttMA與SPMA動力學(xué)研究及劑量反應(yīng)/效應(yīng)關(guān)系復(fù)習(xí)苯通過離子催化和開環(huán)反應(yīng)形成反-反式粘糠醛（MUC）并經(jīng)醛脫氫酶轉(zhuǎn)化為反-反式粘糠酸（ttMA），一般認(rèn)為，職業(yè)環(huán)境中吸入苯的2％代謝轉(zhuǎn)化ttMA從尿中排出。苯氧化形成環(huán)氧化苯，與谷胱甘肽在谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GST）作用下形成的GSH結(jié)合物，最終生成苯巰基尿酸前體，在酸性條件下，苯巰基尿酸前體經(jīng)脫水反應(yīng)生成S-PMA。進入體內(nèi)的苯僅有0.1-0.5%轉(zhuǎn)化為SPMA被排泄出來。討論ttMA與SPMA動力學(xué)研究及劑量反應(yīng)討論ttMA與SPMA動力學(xué)研究及劑量反應(yīng)/效應(yīng)關(guān)系復(fù)習(xí)ttMA是苯在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物之一，毒代動力學(xué)研究表明尿中ttMA濃度在苯接觸結(jié)束時達(dá)到峰值，人體內(nèi)ttMA的排出半減期約為5±2.3h。苯在機體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化為ttMA的比例在高劑量與低劑量攝入水平下是不同的，動物實驗發(fā)現(xiàn)隨著苯攝入量的降低，體內(nèi)苯代謝物中ttMA所占的比例增大。流行病學(xué)研究表明，在TWA接觸水平為10ppm～100ppm(32mg/m3～320mg/m3)時，ttMA代謝轉(zhuǎn)化率為1.9%，在TWA接觸水平在0.1ppm～20ppm(0.32mg/m3～64mg/m3)時，代謝轉(zhuǎn)化率為3.9%，2小時接苯0.02ppm～0.7ppm(0.064mg/m3～2.24mg/m3)時的代謝轉(zhuǎn)化率則為25%，國內(nèi)外相關(guān)研究表明：尿中ttMA與苯TWA濃度之間存在著良好的線性關(guān)系毒代動力學(xué)研究表明尿中S-PMA經(jīng)尿液排出的半減期為9.1±0.7h。近年來的研究表明，苯在體內(nèi)的毒物代謝酶基因如細(xì)胞色素氧化酶P4502E1(CYP2E1)、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GST）存在著不同程度的多態(tài)性，而且與個體對苯毒性的易感性有關(guān)。因此P4502E1和GST的基因多態(tài)性可以影響尿中SPMA的含量。但流行病學(xué)研究表明空氣苯濃度與工人尿SPMA存在良好的線性關(guān)系。

代謝影響因素：ttMA：苯接觸水平、甲苯的聯(lián)合暴露、遺傳易感性、懷孕、山梨酸、吸煙S-PMA：苯接觸水平、吸煙、遺傳易感性討論ttMA與SPMA動力學(xué)研究及劑量反應(yīng)討論

國外可借鑒的生物接觸限值部分國家提出了適合本國工作場所空氣苯接觸限值相應(yīng)的尿ttMA生物限值，如美國ACGIH的TWA=0.5ppm(1.6mg/m3),STEL=2.5ppm(8mg/m3)，尿ttMA生物限值為0.5mg/gCr；法國和芬蘭1997年職業(yè)接觸限值均為TWA=5ppm(16mg/m3)，生物限值分別為IBE(IndicateursBiologiquesd‘Exposition)=5mg/L和BAL(BiomonitoringActionLevels)=40μmol/L≈5.7mg/L，2002年兩國職業(yè)接觸限值修訂為1ppm(3.25mg/m3)，而生物限值尚未修訂。近年來不斷有國家頒布或更新尿ttMA生物限值，意大利生物等效限值LBE(LimitiBiologiciEquivalenti)=0.85mg/gCr（TWA=1ppm(3.2mg/m3)）巴西1.6mg/gCr（TWA=1ppm(3.2mg/m3)），西班牙2005年計劃修訂中的標(biāo)準(zhǔn)為2mg/L(TWA=1ppm(3.25mg/m3))，德國在研制苯的生物限值時，考慮到苯的致癌性特征，未確定其生物耐受量(BAT)，而是根據(jù)工作場所空氣中致癌物濃度與生物材料中致癌物或代謝物含量之間的關(guān)系制定致癌物接觸當(dāng)量（EKA），即按作業(yè)場所空氣中苯的梯級濃度規(guī)定尿中ttMA不應(yīng)超過的限值，如接苯濃度為2mg/m3時尿ttMA為1.6mg/L，接苯濃度為3.3mg/m3時尿ttMA為2mg/L，接苯濃度為6.5mg/m3時尿ttMA為3mg/L，接苯濃度為13mg/m3時尿ttMA為5mg/L，最大值為接苯濃度為19.5mg/m3時尿ttMA不應(yīng)超過7mg/L討論國外可借鑒的生物接討論

國外可借鑒的生物接觸限值部分發(fā)達(dá)國家將尿SPMA作為職業(yè)苯接觸的生物監(jiān)測指標(biāo)之一，通過專業(yè)組織提出了與本國工作場所空氣苯接觸限值相應(yīng)的尿SPMA生物限值。美國ACGIH-BEI推薦的尿SPMA為25μg/gCr（TWA=1.6mg/m3，STEL=8mg/m3）；德國DFG-BAT對致癌物制定了致癌物接觸當(dāng)量（EKA），即根據(jù)工作場所空氣中致癌物濃度與生物材料中致癌物或代謝物間的相關(guān)關(guān)系來確定接觸限值，接苯濃度為1mg/m3時尿SPMA為10μg/gCr，接苯濃度為2mg/m3時尿SPMA為25μg/gCr，接苯濃度為3mg/m3時尿SPMA為40μg/gCr，接苯濃度為3.3mg/m3時尿SPMA為45μg/gCr，接苯濃度為6.5mg/m3時的尿SPMA為90μg/gCr，接苯濃度為13mg/m3時尿SPMA為180μg/gCr，接苯濃度為19.5mg/m3時尿SPMA為270μg/gCr；新加坡2004年在修訂苯的職業(yè)接觸限值為TWA=3.2mg/m3的同時，制定了尿SPMA的生物接觸限值為45μg/gCr；2005年西班牙也參照德國DFG-BAT標(biāo)準(zhǔn)，修訂了苯的職業(yè)接觸限值和生物接觸限值，分別為TWA=3.25mg/m3和尿SPMA=45μg/gCr。討論國外可借鑒的生物接觸限值討論我國推薦值及其理由推薦值尿ttMA推薦值：工作班后尿ttMA2.4mmol/mol肌酐(3.0mg/gCr)尿SPMA推薦值：工作班后尿SPMA47μmol/molCr(100μg/gCr)理由：借鑒國外的生物接觸限值職業(yè)流行病研究結(jié)果我國苯的職業(yè)接觸限值衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)6mg/m3（PC-TWA）和10mg/m3（PC-STEL）討論我國推薦值及其理由結(jié)論推薦值標(biāo)準(zhǔn)在目前條件下實現(xiàn)的可能性目前，國內(nèi)實現(xiàn)推薦值標(biāo)準(zhǔn)已具備以下條件：已同步建立尿ttMA和SPMA的標(biāo)準(zhǔn)測定方法，方法學(xué)較為成熟。國內(nèi)外對尿ttMA和SPMA的排泄動力學(xué)已作了詳盡的研究，肯定了二者與環(huán)境空氣苯的相關(guān)關(guān)系，并為確定采樣時機提供了客觀依據(jù)。對影響ttMA和SPMA測定結(jié)果的混雜因素已有一定的認(rèn)識，一般認(rèn)為防腐劑山梨酸可增加ttMA，而甲苯可能有抑制ttMA的生成，吸煙可增加尿ttMA和SPMA，為控制生物監(jiān)測的混雜因素和測定結(jié)果的評價提供了參考。隨著我國經(jīng)濟水平的提高、職業(yè)衛(wèi)生事業(yè)的發(fā)展，國內(nèi)許多單位配備了包括HPLC和LC-MS在內(nèi)的大型儀器，有條件開展ttMA和SPMA的生物監(jiān)測工作。本標(biāo)準(zhǔn)研制過程中參照國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)和標(biāo)準(zhǔn)，并實際分析了苯接觸者尿中ttMA和SPMA水平，經(jīng)線形回歸分析得到苯接觸濃度=6mg/m3，工作班后尿ttMA在3mg/gCr和尿SPMA在100μg/gCr，實際測定結(jié)果顯示苯暴露水平在≤6mg/m3工人班后尿ttMA和SPMA均在此限值內(nèi)。結(jié)論推薦值標(biāo)準(zhǔn)在目前條件下實現(xiàn)的可能性

謝謝！討論ttMA與SPMA動力學(xué)研究及劑量反應(yīng)效應(yīng)關(guān)系復(fù)習(xí)課件

職業(yè)接觸苯生物限值研究報告

武漢科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院宋世震songshizhen64@126.com

討論ttMA與SPMA動力學(xué)研究及劑量反應(yīng)效應(yīng)關(guān)系復(fù)習(xí)課件研究選題背景1.

職業(yè)危害現(xiàn)狀職業(yè)病病人數(shù)量大，近年新發(fā)病例數(shù)仍呈上升趨勢，塵肺病、職業(yè)中毒等職業(yè)病發(fā)病率居高不下，2007年統(tǒng)計資料顯示：塵肺病累計62萬例;1991～2007年累計發(fā)生職業(yè)中毒4萬多例,急性中毒達(dá)2.2萬例,慢性中毒近1.9萬例；根據(jù)衛(wèi)生部公布的統(tǒng)計數(shù)據(jù)，近年在各類職業(yè)病中，職業(yè)中毒始終占有很大比例，約13％～20％；急性職業(yè)中毒以一氧化碳、氯氣和硫化氫中毒最為嚴(yán)重。慢性職業(yè)中毒以鉛及其化合物、苯和二硫化碳中毒較為嚴(yán)重。2.職業(yè)衛(wèi)生服務(wù)狀況在最發(fā)達(dá)的工業(yè)化國家，職業(yè)衛(wèi)生的服務(wù)質(zhì)量好、服務(wù)水平高、服務(wù)對象面廣，服務(wù)覆蓋了70%～90%的勞動人群。我國職業(yè)衛(wèi)生覆蓋率卻僅為10%～20%左右，與社會需求存在很大差異，尤其一些中小企業(yè)、民營企業(yè)的勞動者基本得不到職業(yè)衛(wèi)生服務(wù)，嚴(yán)重?fù)p害了勞動者生命健康權(quán)益，因患職業(yè)病而導(dǎo)致家庭貧困已經(jīng)成為突出的社會問題。研究選題背景1.職業(yè)危害現(xiàn)狀研究選題背景3.

職業(yè)危害防治對策1.法律層面政府必須通過立法，運用法律和經(jīng)濟手段來規(guī)范企業(yè)行為，做好職業(yè)危害防治工作；2.行政層面以政府主導(dǎo)，多部門參與，

建立垂直的勞動安全衛(wèi)生監(jiān)察體制，加大監(jiān)察工作力度；3.技術(shù)層面加強建設(shè)衛(wèi)生監(jiān)督、疾病控制、職業(yè)病防治三支隊伍，規(guī)范技術(shù)服務(wù)行為，提高服務(wù)的水平和能力。完善健康監(jiān)護管理規(guī)范，加強職業(yè)健康監(jiān)護工作，組織開展重點監(jiān)督檢查。做好宣傳教育工作，強化職業(yè)病危害告知、警示標(biāo)識、警示標(biāo)志和個人防護用品在企業(yè)職業(yè)病防治中的作用，加強對用人單位負(fù)責(zé)人和勞動者的職業(yè)病防治法律、法規(guī)知識培訓(xùn)。探索我國適宜的基本職業(yè)衛(wèi)生服務(wù)。

研究選題背景3.職業(yè)危害防治對策研究選題背景4.職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)研制1.職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)研制意義立法依據(jù)執(zhí)法標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)規(guī)范2.我國職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)研制發(fā)展趨勢生產(chǎn)環(huán)境檢測—生產(chǎn)環(huán)境、勞動過程、勞動者(生物標(biāo)志物）研究選題背景4.職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)研制研究選題背景5.生物標(biāo)志物—接觸生物標(biāo)志物（一級預(yù)防）、易感性生物標(biāo)志物（一級預(yù)防）、效應(yīng)生物標(biāo)志物（二級預(yù)防）職業(yè)接觸苯的生物限值研究現(xiàn)況職業(yè)苯接觸生物標(biāo)志物—血、尿苯、尿反-反式黏糠酸（ttMA）、苯巰基尿酸（SPMA）、酚、兒茶酚、氫醌、苯三酚苯生物標(biāo)志物接觸標(biāo)志物效應(yīng)標(biāo)志物易感標(biāo)志物環(huán)羥化代謝產(chǎn)物（苯酚、鄰苯二酚、氫醌、苯三酚）苯巰基尿酸(S-PMA)反反式粘糠酸(tt-MA)血苯尿苯生物大分子加合物研究選題背景5.生物標(biāo)志物—接觸生物標(biāo)研究選題背景國內(nèi)外研究狀況尿反-反式黏糠酸（ttMA）、苯巰基尿酸（SPMA）根據(jù)生產(chǎn)環(huán)境空氣苯接觸限值，確定生物接觸限值（生物等效限值）。如美國TWA=0.5ppm(1.6mg/m3),STEL=2.5ppm(8mg/m3)，推薦尿ttMA生物限值為0.5mg/gCr，尿SPMA為25μg/gCr；法國和芬蘭職業(yè)接觸限值均為TWA=5ppm(16mg/m3)，推薦尿ttMA為生物限值為=5mg/L；意大利職業(yè)接觸限值TWA=1ppm(3.2mg/m3)，推薦尿ttMA生物限值為0.85mg/gCr；新加坡職業(yè)接觸限值為TWA=1ppm（3.2mg/m3），制定尿SPMA的生物接觸限值為45μg/gCr；德國在研制苯的生物限值時，考慮到苯的致癌性特征，未確定其生物耐受量(BAT)，而是根據(jù)工作場所空氣中致癌物濃度與生物材料中致癌物或代謝物含量之間的關(guān)系制定致癌物接觸當(dāng)量（EKA），即按作業(yè)場所空氣中苯的梯級濃度規(guī)定尿中ttMA不應(yīng)超過的限值，如接苯濃度為2mg/m3時，尿ttMA為1.6mg/L、尿SPMA為25μg/gCr；接苯濃度為3.3mg/m3時，尿ttMA為2mg/L、尿SPMA為40μg/gCr；接苯濃度為6.5mg/m3時，尿ttMA為3mg/L、尿SPMA為90μg/gCr。我國將苯的職業(yè)接觸限值從40mg/m3（MAC）修訂為6mg/m3（PC-TWA）和10mg/m3（PC-STEL），目前我國未制定生物接觸限值。研究選題背景國內(nèi)外研究狀況研究方案技術(shù)路線查閱、整理資料確定研究方案檢測方法預(yù)實驗現(xiàn)場采樣現(xiàn)場樣品處理統(tǒng)計分析結(jié)論實驗室處理分析驗證實驗研究方案技術(shù)路線查閱、整理資料確定研究方案研究方案研究對象與內(nèi)容1.苯暴露作業(yè)場所空氣苯濃度監(jiān)測；2.苯暴露作業(yè)工人尿中反-反式粘糠酸（ttMA）、苯巰基尿酸（S-PMA）含量測定；3.職業(yè)接苯生物接觸限值推薦。

研究方案研究對象與內(nèi)容研究方案研究方法與目的1.苯暴露作業(yè)場所空氣苯濃度監(jiān)測1.1空氣采樣：區(qū)域采樣在苯作業(yè)場所勞動者活動范圍內(nèi)布點，以200ml/min流量采集4小時空氣，進行定性與定量分析；1.2個體采樣:接苯工人腰部佩帶個體采樣器（TMP-150型），連接膠管至衣領(lǐng)口用夾子固定，插入活性炭吸附管，采集工人呼吸帶苯濃度，按100ml/min流量在上、下午各采樣2h。采樣后，立即封閉活性碳管兩端，置于清潔容器內(nèi)運輸和保存。樣品置于冰箱內(nèi)至少可保存14天。1.3空氣樣品處理：將采樣管的前后段活性碳分別放入溶劑解吸瓶中，各加入1.0ml二硫化碳，塞緊管塞，振搖1min，解吸30min。解析液供測定。1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：用二硫化碳稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)系列，氣相色譜法檢測，每個濃度重復(fù)測定3次。以測得的峰高或峰面積均值分別對苯濃度（μg/ml）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。1.5樣品測定：氣相色譜法檢測用測定標(biāo)準(zhǔn)系列的操作條件測定樣品和空白對照的解吸液；測得的樣品峰高或峰面積值減去空白對照峰高或峰面積值后，由標(biāo)準(zhǔn)曲線得苯的濃度（μg/ml）。按式C＝（c1+c2）×v/V0×D公式計算空氣中苯的濃度公式中：C：空氣中苯的濃度，mg/m3；c1，c2：分別為測得的前后段解吸液中本的濃度，μg/ml；v：解吸液的體積，ml；V0：換算成標(biāo)準(zhǔn)狀況下的采樣體積，L；D：解吸效率％。研究方案研究方法與目的研究方案研究方法與目的苯暴露作業(yè)工人選擇：武漢鋼鐵公司某部門苯接觸工人56名，年齡在19～43歲，平均年齡32.9±5.9歲，工齡在半年到24年之間，平均工齡9.4±6.9年；同時選擇24名健康、非苯接觸工人作為對照組，年齡在22～37歲，平均年齡28.4±5.3歲；武漢地區(qū)兩個制鞋廠鞋底涂粘膠和鞋面粘合車間職業(yè)接觸苯勞動者55人，年齡在19～52歲，平均年齡28.9±10.6歲，工齡在1年到35年之間，平均工齡12.32±7.89年。尿樣采集、保存：用具蓋聚乙烯塑料瓶收集接苯工人空氣苯監(jiān)測當(dāng)日班前尿和班末尿，按100ml尿液加4-5滴的比例加入6mol/L鹽酸，在低于0°C下運輸，尿樣采集后應(yīng)在48小時內(nèi)檢測，若近期不檢測，放置4°C條件下可保存2周。在–20℃冰箱冷凍保存4個月。尿中肌酐檢測：尿樣到實驗室后依據(jù)WS/T97-1996苦味酸分光光度法及時測定尿中肌酐（Cr）濃度。研究方案研究方法與目的研究方案研究方法與目的1.尿中ttMA檢測—HPLC-UV分析方法色譜柱：ODS柱（4.6×150mm×5μm），自裝預(yù)柱C18保護柱（4×20mm）；流動相：冰乙酸-四氫呋喃-甲醇-水＝1︰2︰10︰87，流速：0.9ml/min，紫外檢測波長264nm，柱溫：25℃；進樣量10μl。尿中ttMA的測定采用高效液相色譜法（HPLC）和液-液萃取制備樣品技術(shù)。10ml錐形具塞離心管中加入0.5ml尿樣本，分別加入50μl香草酸內(nèi)標(biāo)應(yīng)用液（100μg/ml）、2mol鹽酸100μl，旋渦快混10秒后，加入4ml乙酸乙酯，蓋緊磨口蓋，在振蕩器上往復(fù)振蕩20min（240次/分），離心15min（2500轉(zhuǎn)/分），吸取上層有機相于另一5ml離心管中，40°C下氮氣流揮干，殘渣用1ml冰乙酸/四氫呋喃/甲醇/水=1:2:10:87（v/v）流動相混合液復(fù)溶，旋混30秒鐘，取10μl進樣，在紫外檢測器264nm下測定，以保留時間和內(nèi)標(biāo)定性，以ttMA（μg/ml）濃度（X）對相應(yīng)待測物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。研究方案研究方法與目的研究方案2.尿中SPMA檢測—HPLC-MS分析方法色譜條件：色譜柱ODS(150mm×2.0mm,4.6μm,)；保護柱：ODS(50mm×2.0mm,4.6μm)；流動相：乙腈：0.3％甲酸水溶液＝25︰75；流速：0.2ml/min；柱溫：35℃；進樣量：5μl。質(zhì)譜條件：離子源為電噴霧離子源(ESI)，負(fù)電模式；接口電壓（IV）：4.5kV，脫溶劑管溫度(CDL)電壓：-15V；模塊加熱器(HeatBlock)溫度：200℃；脫溶劑管溫度：230℃，霧化氣流：1.5L/min。定量測定時采用選擇離子監(jiān)控(SIR)模式：m/z238。樣品處理方法與前述HPLC一致，采用氯仿∶異丙醇（5∶1，v/v）為預(yù)處理萃取溶液，不同點是以乙腈︰0.3%甲酸（25︰75）為流動相，經(jīng)ODS柱二元等度洗脫，待測樣品揮干，殘渣用250μl甲醇溶解，渦旋30s，10000r/min離心5min，取適量上清液，5μl進樣測定。電噴霧離子源負(fù)離子模式檢測，對SPMA全離子峰（掃描范圍：100-300m/z）進行掃描，分子離子峰M/Z238豐度最大，靈敏度最高。研究方案2.尿中SPMA檢測—HPLC-M研究方案研究方法與目的實驗數(shù)據(jù)處理：所有數(shù)據(jù)經(jīng)MicrosoftExcel2000建立數(shù)據(jù)庫，用SAS8.1軟件進行t檢驗、相關(guān)及回歸分析。以苯暴露工人尿中反-反式粘糠酸、苯巰基尿酸為生物接觸標(biāo)志物,參考各國反-反式粘糠酸、苯巰基尿酸生物接觸限值及其RIE，兼顧我國PC-STEL，以我國PC-TWA為依據(jù)，結(jié)合實際測定的職業(yè)苯接觸者反-反式粘糠酸、苯巰基尿酸及苯接觸者體檢狀況，線性回歸分析，提出我國苯暴露工人尿反-反式粘糠酸、苯巰基尿酸推薦生物接觸限值研究方案研究方法與目的研究結(jié)果區(qū)域苯濃度的測定由于工種不同，車間空氣中苯濃度也不同，對不同工種車間做區(qū)域濃度測定，范圍跨度較大，在42.08±34.12mg/m3左右，根據(jù)濃度由低到高分為三組，見表1。研究結(jié)果區(qū)域苯濃度的測定研究結(jié)果個體苯接觸劑量的測定圖1所示接苯工人實際接觸8小時時間加權(quán)評價濃度（8h-TWA）。圖1個體暴露生產(chǎn)環(huán)境空氣苯濃度：研究結(jié)果個體苯接觸劑量的測定圖1個體暴露研究結(jié)果尿中tt－MA測定方法的建立色譜行為ttMA和香草酸的保留時間分別在5.6min和14.0min左右，其標(biāo)準(zhǔn)品、非接苯者和接苯工人尿樣色譜圖見圖2。圖2.粘糠酸(5.6min)和內(nèi)標(biāo)物香草酸(14.0min)標(biāo)準(zhǔn)品(a)、非接苯尿樣(b)和接苯尿樣色譜圖(c)（a）（b）（c）研究結(jié)果尿中tt－MA測定方法的建立圖2.研究結(jié)果tt－MA標(biāo)準(zhǔn)曲線測定值

研究結(jié)果tt－MA標(biāo)準(zhǔn)曲線測定值研究結(jié)果回收率與精密度每一濃度配置5個樣本，按樣品前處理與分析方法操作測定，連續(xù)三天對質(zhì)量分析樣品進行測定。將第一天分析結(jié)果計算回收率，見表3；第二天分析結(jié)果計算日內(nèi)精密度，將三天的測定結(jié)果合并計算日間精密度，結(jié)果見表4。研究結(jié)果回收率與精密度研究結(jié)果苯接觸工人尿中苯代謝產(chǎn)物ttMA的測定結(jié)果24名非苯作業(yè)工人和56名苯作業(yè)工人個體接觸水平與班前和班末尿ttMA的排出規(guī)律進行了觀察，苯作業(yè)者班末尿中ttMA（9.51±7.70mg/gCr）明顯高于班前尿中ttMA（5.23±5.97mg/gCr），p<0.01；見表5。

研究結(jié)果苯接觸工人尿中苯代謝產(chǎn)物ttMA的研究結(jié)果班前尿ttMA與工人個體苯接觸量呈線性相關(guān)Y(mg/gCr)=0.924+0.108X(mg/m3)，（n=56，r=0.62，p<0.01）；班末尿ttMA與個體苯接觸量也存在良好的線性關(guān)系Y(mg/gCr)=2.103+0.177X(mg/m3)，（n=56，r=0.791，p<0.01），見圖3、4。圖3、4：56名苯接觸者暴露水平與尿中tt-MA濃度關(guān)系散點圖研究結(jié)果班前尿ttMA與工人個體苯接觸量呈研究結(jié)果回歸方程預(yù)測值比較將現(xiàn)場研究的接苯工人班末尿ttMA的直線回歸方程與Waidyanatha、Boogaard、Panev所作的直線回歸方程進行比較，并以我國職業(yè)苯接觸限值PC-TWA=6mg/m3代入各回歸方程，推算的工作班末或接觸末尿中ttMA含量，見表6。研究結(jié)果回歸方程預(yù)測值比較研究結(jié)果相對內(nèi)暴露指數(shù)不同苯暴露水平相對內(nèi)暴露指數(shù)的比較,見圖5。圖5不同苯暴露水平相對內(nèi)暴露水平

研究結(jié)果相對內(nèi)暴露指數(shù)圖5不同苯暴露水平相研究結(jié)果國外可借鑒的ttMA生物限值相對內(nèi)暴露的比較研究結(jié)果國外可借鑒的ttMA生物限值相對內(nèi)暴研究結(jié)果尿中SPMA測定方法的建立色譜條件LCMS-2010EV單重四極桿液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀,色譜柱：ODS(150mm×2.0mm,4.6μm,)；保護柱：ODS(50mmⅹ2.0mm,4.6um)；流動相：乙腈︰0.3％甲酸（25︰75,v/v）；流速：0.2ml/min；柱溫：35℃；進樣量：5μl；質(zhì)譜條件離子源為電噴霧離子源(ESI)，負(fù)電模式；接口電壓：4.5kV，脫溶劑管溫度(CDL)電壓：-15V；模塊加熱器(HeatBlock)溫度：200℃；CDL溫度：230℃，霧化氣流：1.5L/min。根據(jù)SPMA的子離子M/Z238-109，將掃描模式范圍設(shè)置為M/Z：100~300，在負(fù)電模式下的SPMA全離子掃描圖見圖4，最后定量測定時采用選擇離子監(jiān)控(SIR)模式：m/z238。圖65mg/l甲醇溶解SPMA樣品LC/ESI-/MS全離子掃描圖研究結(jié)果尿中SPMA測定方法的建立圖65研究結(jié)果色譜行為SPMA的保留時間分別在7.8min左右，其標(biāo)準(zhǔn)品、非接苯者、接苯加標(biāo)尿和接苯工人尿樣色譜圖見圖7。圖7巰基尿酸(7.8min)標(biāo)準(zhǔn)品(a)、非接苯尿樣(b)、非接苯尿樣加標(biāo)(c)和接苯尿樣色譜圖(d)研究結(jié)果色譜行為圖7巰基尿酸(7.8mi研究結(jié)果SPMA標(biāo)準(zhǔn)曲線測定值

研究結(jié)果SPMA標(biāo)準(zhǔn)曲線測定值研究結(jié)果回收率與精密度研究結(jié)果回收率與精密度研究結(jié)果樣品的穩(wěn)定性取6份尿樣，制備一個新鮮的合并樣品，加入SPMA80μg/L。將尿樣分成4組，每組6份，于當(dāng)天、第3天、第七天、第十四天各分析1組。保存時間分為2個檔次：普通溫度（4℃）、低溫冰箱（-20℃）。測定結(jié)果見表11。

研究結(jié)果樣品的穩(wěn)定性研究結(jié)果苯接觸工人尿中苯代謝產(chǎn)物SPMA測定結(jié)果

苯作業(yè)工人班末尿SPMA的分析結(jié)果顯示，班末尿SPMA與個體苯接觸量存在良好的線性關(guān)系Y(μg/gCr)=-8.625+18.367X(mg/m3)，（n=55，r=0.8035，P<0.01），見表12和圖8。研究結(jié)果苯接觸工人尿中苯代謝產(chǎn)物SPMA測定研究結(jié)果圖855名苯接觸者暴露水平與尿中SPMA濃度關(guān)系散點圖研究結(jié)果圖855名苯接觸者暴露水平與尿研究結(jié)果國外可借鑒的生物限值SPMA比較將現(xiàn)場研究的接苯工人班末尿SPMA的直線回歸方程與Ghittori、Sittert所作的直線回歸方程進行比較，并以我國職業(yè)苯接觸限值PC-TWA=6mg/m3代入各回歸方程，推算的工作班末或接觸末尿中SPMA含量，見表13。研究結(jié)果國外可借鑒的生物限值SPMA比較討論ttMA與SPMA動力學(xué)研究及劑量反應(yīng)/效應(yīng)關(guān)系復(fù)習(xí)苯通過離子催化和開環(huán)反應(yīng)形成反-反式粘糠醛（MUC）并經(jīng)醛脫氫酶轉(zhuǎn)化為反-反式粘糠酸（ttMA），一般認(rèn)為，職業(yè)環(huán)境中吸入苯的2％代謝轉(zhuǎn)化ttMA從尿中排出。苯氧化形成環(huán)氧化苯，與谷胱甘肽在谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GST）作用下形成的GSH結(jié)合物，最終生成苯巰基尿酸前體，在酸性條件下，苯巰基尿酸前體經(jīng)脫水反應(yīng)生成S-PMA。進入體內(nèi)的苯僅有0.1-0.5%轉(zhuǎn)化為SPMA被排泄出來。討論ttMA與SPMA動力學(xué)研究及劑量反應(yīng)討論ttMA與SPMA動力學(xué)研究及劑量反應(yīng)/效應(yīng)關(guān)系復(fù)習(xí)ttMA是苯在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物之一，毒代動力學(xué)研究表明尿中ttMA濃度在苯接觸結(jié)束時達(dá)到峰值，人體內(nèi)ttMA的排出半減期約為5±2.3h。苯在機體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化為ttMA的比例在高劑量與低劑量攝入水平下是不同的，動物實驗發(fā)現(xiàn)隨著苯攝入量的降低，體內(nèi)苯代謝物中ttMA所占的比例增大。流行病學(xué)研究表明，在TWA接觸水平為10ppm～100ppm(32mg/m3～320mg/m3)時，ttMA代謝轉(zhuǎn)化率為1.9%，在TWA接觸水平在0.1ppm～20ppm(0.32mg/m3～64mg/m3)時，代謝轉(zhuǎn)化率為3.9%，2小時接苯0.02ppm～0.7ppm(0.064mg/m3～2.24mg/m3)時的代謝轉(zhuǎn)化率則為25%，國內(nèi)外相關(guān)研究表明：尿中ttMA與苯TWA濃度之間存在著良好的線性關(guān)系毒代動力學(xué)研究表明尿中S-PMA經(jīng)尿液排出的半減期為9.1±0.7h。近年來的研究表明，苯在體內(nèi)的毒物代謝酶基因如細(xì)胞色素氧化酶P4502E1(CYP2E1)、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GST）存在著不同程度的多態(tài)性，而且與個體對苯毒性的易感性有關(guān)。因此P4502E1和GST的基因多態(tài)性可以影響尿中SPMA的含量。但流行病學(xué)研究表明空氣苯濃度與工人尿SPMA存在良好的線性關(guān)系。

代謝影響因素：ttMA：苯接觸水平、甲苯的聯(lián)合暴露、遺傳易感性、懷孕、山梨酸、吸煙S-PMA：苯接觸水平、吸煙、遺傳易感性討論ttMA與SPMA動力學(xué)研究及劑量反應(yīng)討論

國外可借鑒的生物接觸限值部分國家提出了適合本國工作場所空氣苯接觸限值相應(yīng)的尿ttMA生物限值，如美國ACGIH的TWA=0.5ppm(1.6mg/m3),STEL=2.5ppm(8mg/