實(shí)驗(yàn)7 直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)課件

實(shí)驗(yàn)七

直接抗人球蛋白試驗(yàn)

第一部分直接抗人球蛋白試驗(yàn)原理直接抗人球蛋白試驗(yàn)原理：

直接抗人球蛋白試驗(yàn)是檢測紅細(xì)胞在體內(nèi)是否被不完全抗體致敏的實(shí)驗(yàn)。若紅細(xì)胞在體內(nèi)已被不完全抗體所致敏，加入的抗人球蛋白則可與紅細(xì)胞表面不完全抗體結(jié)合使紅細(xì)胞相互連接起來出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。

——直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性

抗球蛋白試劑通常有三種：多特異性抗球蛋白試劑，簡稱多抗，多抗包括了抗-IgG和抗-C3兩種成分，在直抗試驗(yàn)中常常作為初篩試劑使用。單特異性抗-IgG試劑，簡稱抗-IgG單特異性抗-C3試劑，簡稱抗-C3在直抗試驗(yàn)中一旦出現(xiàn)陽性結(jié)果，通常需要抗-IgG和抗-C3進(jìn)一步分析。

直接抗人球蛋白試驗(yàn)臨床意義

檢測體內(nèi)紅細(xì)胞是否被不完全抗體或補(bǔ)體致敏,可用于：

1）新生兒溶血病胎（嬰）兒致敏紅細(xì)胞檢測

2）自身免疫溶血性貧血的診斷

3）溶血性輸血反應(yīng)的研究

第二部分直接抗人球蛋白試驗(yàn)操作直接抗人球蛋白試驗(yàn)難點(diǎn)：難以獲取致敏紅細(xì)胞標(biāo)本？解決方案：試劑紅細(xì)胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)

人工制備IgG型致敏紅細(xì)胞（陽性對(duì)照）：1、采集3人份O型RhD陽性抗凝全血，1000g離心3min，分離血漿；紅細(xì)胞經(jīng)生理鹽水（NS）3次洗滌后，取3人份的壓積紅細(xì)胞各5滴混勻，備用；2、用一次性吸管取壓積紅細(xì)胞3滴于試管中，加入2倍體積的單克隆IgG抗D血清，混勻，置于37℃孵育45min；3、孵育結(jié)束取出試管，1000g離心2min，棄上清，用2倍體積的NS洗滌3次（1000g離心1min），最后加入NS配制成約5％的致敏紅細(xì)胞懸液（1d壓積紅細(xì)胞＋19dNS），備用標(biāo)記3支試管，分別為待檢管、陰性對(duì)照和陽性對(duì)照。按下表加入各反應(yīng)物：反應(yīng)物待檢管陰性對(duì)照陽性對(duì)照5％待檢標(biāo)本RBC15％陰性對(duì)照RBC15％陽性對(duì)照RBC1多特異性抗球蛋白試劑111受檢者標(biāo)本檢測如陽性對(duì)照凝集，陰性對(duì)照不凝集，受檢RBC凝集者直接抗球蛋白試驗(yàn)為陽性，不凝集者為陰性。結(jié)果判定標(biāo)本采集后應(yīng)盡快進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)延遲或中途停止可能使抗體從細(xì)胞上釋放出來。待檢紅細(xì)胞一定要用鹽水洗滌至少3次，除去紅細(xì)胞懸液中混雜的血清蛋白，以防止假陰性結(jié)果。離心時(shí)間和離心力要按標(biāo)準(zhǔn)操作。若果要了解在體內(nèi)致敏紅細(xì)胞的免疫球蛋白類型，則可分別以抗IgG、抗IgM或抗C3單特異性抗球蛋白試劑進(jìn)行試驗(yàn)。紅細(xì)胞上若抗體吸附較少，自身免疫性溶血性貧血直接抗球蛋白試驗(yàn)可呈陰性反應(yīng)