VB2的測定和方法學(xué)

組長:劉曉斌組員:夏敏，夏亮，樂樂，謝曄，孫敏杰指導(dǎo)老師:陳旭，戴小峰藥片和果蔬中VB2的測定及VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!VB2的生理作用VB2，又稱核黃素，分子式C17H20N4O6，它是人體必需的13種維生素之一，作為維生素B族的成員之一，VB2對于人體的生理作用為：促進(jìn)發(fā)育和細(xì)胞的再生；促使皮膚，指甲，毛發(fā)的正常生長；幫助消除口腔內(nèi)，唇，舌的炎癥；增進(jìn)視力，減輕眼睛的疲勞；和其他的物質(zhì)相互作用來幫助碳水化合物，脂肪，蛋白質(zhì)的代謝。VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!國內(nèi)外研究方法近年來對VB2測定方法報(bào)道較多，如：高效液相色譜法流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法多元線性分光光度法熒光分光光度法這些方法操作麻煩，時(shí)間較長，本實(shí)驗(yàn)用紫外分光光度法和熒光法測定VB2含量。VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!實(shí)驗(yàn)思路VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!4mg/LVB2全掃描圖VB2片全掃描VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!VB2片的濃度計(jì)算結(jié)論：所測樣品的含量為4.563mg/片VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!②VB2的紫外加標(biāo)回收率測定VB2樣品量VB2標(biāo)準(zhǔn)液（200mg/L)Readings平均值回收率5ml0ml0.03110.03030.03075ml0.2ml0.04040.04050.0404132%5ml0.3ml0.04320.04210.0426108%5ml0.5ml0.04790.04800.047993.5%VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!2.VB2片熒光法測定VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!標(biāo)準(zhǔn)曲線：I=465.728C+4.562R=0.9998濃度：0.048~0.96mg/L計(jì)算得，VB2藥片樣品含量為5.874mg/片VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!②VB2熒光藥片加標(biāo)回收率 *加入標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為200mg/LVB2樣品量I回收率3ml104.944104.7703ml+30μl164.083163.967106.04%3ml+50μl198.703198.270100.73%3ml+100μl289.369288.96299.24%VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁!方法學(xué)評價(jià)維生素B2片紫外分光光度法熒光分光光度法線性范圍0.2—24mg/L0.048—0.96mg/L相對標(biāo)準(zhǔn)偏差5.776*10-4檢出限0.2515mg/L1.49*10-2μg/L加標(biāo)回收率低濃度132%106.04%中濃度108%100.73%高濃度93.5%99.24%VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁!VB2片測定小結(jié)紫外：VB2片含量片4.563mg/片熒光：VB2片含量5.874mg/片分析：由于兩種方法的檢出限不同，因而VB2片稀釋倍數(shù)不同，并在稀釋操作過程中產(chǎn)生誤差，致使檢測結(jié)果有較大差異紫外分光光度法和熒光分光光度法差異極顯著VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁!果蔬中維生素B2的紫外測定VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁!人參果青菜芹菜（葉）生菜黑木耳水果蔬的紫外全掃描VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁!果蔬中維生素B2的熒光測定

VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁!樣品熒光全掃描芹菜生菜如上圖所示，芹菜與生菜在530nm發(fā)射波長與450nm激發(fā)波長的附近有比較特征的熒光，結(jié)合文獻(xiàn)即確定該波長可作為熒光測定的發(fā)射與激發(fā)波長。VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁!數(shù)據(jù)處理及計(jì)算樣品VB2含量(μg/100g)=(FAO-FA)/(FSO-FS)×c×50×100/wFAO——樣品加入Na2S2O3前的熒光值FSO——標(biāo)準(zhǔn)液加入Na2S2O3前的熒光值FA——樣品加入Na2S2O3后的熒光值FS——標(biāo)準(zhǔn)液加入Na2S2O3后的熒光值w——樣品重量(g)c——標(biāo)準(zhǔn)液的濃度樣品VB2含量黑木耳38.8μg/100g生菜38.2μg/100g青菜38.6μg/100g芹菜（葉）64.5μg/100g人參果6.64μg/100gVB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁!以標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定樣品中VB2含量樣品VB2含量（μg/100g）黑木耳45生菜44.3青菜44.8芹菜（葉）75.2人參果7.4VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁!結(jié)論VB2的熒光特征性強(qiáng)于紫外特征性。檢測VB2時(shí)，運(yùn)用熒光分光光度法優(yōu)于紫外分光光度法。熒光檢出限低于紫外，能測定較低濃度VB2溶液。硫代硫酸鈉具有還原性，且安全無害，可代替含有較強(qiáng)毒性的連二亞硫酸鈉作為還原劑，與維生素B2反應(yīng)，效果十分明顯。VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁!收獲我們學(xué)會(huì)了分析課題，查找文獻(xiàn)并設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，以及對實(shí)驗(yàn)的嚴(yán)謹(jǐn)態(tài)度。學(xué)會(huì)獨(dú)立操作紫外分光光度計(jì)和熒光分光光度計(jì)，并了解其工作原理。了解了維生素B2的特性及富含維生素B2的食物。VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁!1.VB2片的紫外測定VB2的避光措施VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁!標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制StandardConcentrationmg/LReadingsStd110.000.3158Std212.000.3777Std314.000.4432Std416.000.5059Std518.000.5676Std620.000.6301濃度：10~20mg/L標(biāo)準(zhǔn)曲線A=0.03278·C+3.3059*10-3VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁!①VB2紫外線性范圍濃度：0.2~24mg/L

A=0.0312c+0.0069

R2=0.9998StandardConcentration(mg/L)ReadingsStd10.20.0082Std20.50.0211Std31.00.0378Std41.50.0523Std52.00.0705Std64.00.1299Std78.00.2672Std8120.3828Std9160.5063Std10200.6280Std11240.7528VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁!③紫外分光光度法VB2檢出限SampleReadingssample1-0.0027sample2-0.0018sample3-0.0023Sample4-0.0030sample5-0.0017sample6-0.0028Sample7-0.0031sample8-0.0015sample90.0005sample10-0.0020sample11-0.0020紫外分光光度計(jì)的檢出限為0.2515mg/L。VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁!熒光工作參數(shù)燈管類型:R928電壓:700V激發(fā)波長:450nm發(fā)射波長:530nm激發(fā)狹縫:6.0nm發(fā)射狹縫:6.0nm濾光片狀態(tài):打開攪拌子:高速VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁!Ref.IDConc.IntStd1a0.04824.552Std1b0.04824.575Std2a0.07236.072Std2b0.07236.019Std3a0.09649.461Std3b0.09649.481Std4a0.1260.401Std4b0.1260.191Std5a0.14470.770Std5b0.14470.610Std6a0.19293.952Std6b0.19294.275Std7a0.24121.567Std7b0.24121.107Std8a0.288140.029Std8b0.288139.698Std9a0.384185.399Std9b0.384184.989Std10a0.48228.367Std10b0.48227.593Std11a0.72336.366Std11b0.72336.975Std12a0.96452.284Std12b0.96452.125①熒光線性范圍濃度：0.048~0.96mg/L

I=465.728c+4.562

R=0.9998VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁!③熒光光度法檢出限SampleReadingssample10.828sample20.818sample30.879Sample40.841sample50.817sample60.842Sample70.782sample80.829sample90.842sample100.804sample110.839LOD=(XL-XB)/m=K·Sb/mSb=0.02486LOD=1.49*10-2μg/LVB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁!t=S平=t=28.480>>t0.01結(jié)論

紫外分光光度法和熒光分光光度法差異極顯著VB2片t檢驗(yàn)法VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁!實(shí)驗(yàn)思路VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第29頁!菠菜黃瓜紅莧菜大白菜蘋果雞毛菜各個(gè)樣品的全掃描圖VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第30頁!結(jié)論與分析討論結(jié)合以上幾張果蔬的紫外全掃描圖可以看出實(shí)驗(yàn)中所選的幾類果蔬在波長445nm附近沒有很特征的吸收峰，故不適宜使用紫外可見分光光度法來測定其中VB2的含量。經(jīng)過查閱資料，討論分析，初步得出可能原因：樣品的預(yù)處理比較粗糙，果蔬中有物質(zhì)在波長445nm附近較大范圍亦有吸收會(huì)影響VB2的吸收峰；VB2的濃度經(jīng)過預(yù)處理而降低了，如抽濾過程中舍去了初濾液，將樣品液定容等。VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第31頁!空白溶劑熒光全掃描如左圖所示，空白溶劑（0.1M的鹽酸和醋酸-醋酸鈉緩沖液）在530nm的發(fā)射波長和450nm的激發(fā)波長下熒光值極低，對樣品測定的影響很小VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第32頁!果蔬樣品的測定加入硫代硫酸鈉前熒光強(qiáng)度加入硫代硫酸鈉后熒光強(qiáng)度黑木耳22.7088.307生菜26.24512.082青菜28.39414.085芹菜（葉）47.83123.914人參果9.1656.702VB2標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.096mg/L）55.64420.032VB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第33頁!添加硫代硫酸鈉所制成的標(biāo)準(zhǔn)曲線VB2標(biāo)液濃度(mg/L)加入前熒光值加入后熒光值0.02413.3975.4190.04825.0839.8930.07236.31012.6700.09648.23617.6540.12059.68621.2590.14470.52325.0240.240114.77440.8200.288136.87745.7950.384182.34059.340I=316.55c+0.1245R2=0.9994濃度：0.024~0.384mg/LVB2的測定和方法學(xué)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第34頁!果蔬VB2測定小結(jié)紫外果蔬中VB2的預(yù)處理比較粗糙，VB2的濃度經(jīng)過預(yù)處理而降低了，如抽濾過程中舍去了初濾液，將樣品液定容等。使得紫外分光光度法無法測得果蔬中VB2的含量。比較單點(diǎn)法和標(biāo)準(zhǔn)曲線兩種方法求得果蔬VB2的含量，兩者之間有較大的差異，這是因?yàn)楣咧谐齎B2還有其他物質(zhì)與硫代硫酸鈉反應(yīng)，而標(biāo)準(zhǔn)維生素B片中沒有，使計(jì)算誤差產(chǎn)