植物顯微技術(shù)-整體裝片法課件

整體裝片法

王名雪06級(jí)生物科學(xué)（1）班

2022/12/52植物制片技術(shù)植物制片技術(shù)是植物顯微技術(shù)課的一個(gè)重要組成部分，在有關(guān)植物形態(tài)建成、植物雜交育種、作物病蟲(chóng)害防治、藥用植物的培育和鑒別以及林木材性鑒定等多方面的研究和教學(xué)工作中，都需要應(yīng)用顯微制片技術(shù)，由于各種作物器官的性質(zhì)差異以及研究目的的不同，就需要不同的制片方法

2022/12/53

切片法

涂片法

整體封片法

壓片法

顯

微

制

片

法2022/12/55

整體裝片法的步驟：1、微小的生物如衣藻、水綿、青霉、變形蟲(chóng)和水螅等2、可以直接作為裝片的材料植物的葉表皮、鱗莖表皮等；3、動(dòng)物中如昆蟲(chóng)的翅、腿、口器等；4、人的口腔上皮細(xì)胞等一、取材：2022/12/56二、固定：

目的：將器官、組織、細(xì)胞按原來(lái)的形態(tài)保存下來(lái)，并為后續(xù)制片保持固有形態(tài)，這樣才達(dá)到固定的要求。2022/12/57注意：

要注意固定目的物本身的結(jié)構(gòu)性質(zhì)，以便選用適合的固定液，如一般根、莖、葉的組織切片用FAA，根尖、花藥壓片材料用卡諾式固定液，花藥胚囊用納瓦申（Navashin‘s）液，莖尖（根尖）用鉻酸-醋酸液。另外，固定時(shí)間的長(zhǎng)短，要根據(jù)材料的特點(diǎn)而增減常用的固定液有以下幾種：1、FAA固定液（福爾馬林－冰醋酸－酒精）

2、FPA固定液

3、CanoysFluid（卡諾氏液）2022/12/58

又稱(chēng)萬(wàn)能固定液或稱(chēng)標(biāo)準(zhǔn)保全液適用范圍：一般根、莖、葉、花藥、子房的組織切片都可使用此固定液。固定時(shí)間：一般需固定24小時(shí)，并可在此液中作較長(zhǎng)期的保存，但溫度宜低（10℃左右）。配法：福爾馬林（38%甲醛）5mL冰醋酸

5mL70%酒精

90mLFAA固定液（福爾馬林－冰醋酸－酒精）2022/12/510固定時(shí)用丙酸代替冰醋酸，三種成分的用量同F(xiàn)AA，制片效果有時(shí)較FAA好。FPA固定液2022/12/512

在材料開(kāi)始處理脫水前，需將組織塊中含固定液沖洗掉，以便后續(xù)處理順利進(jìn)行。通常沖洗法如下：1.流水沖洗法

2.靜水洗滌法

三、沖洗：2022/12/514如以酒精洗滌，或不能使用流水沖的材料（根尖、花藥等）則用連續(xù)換洗來(lái)達(dá)到清洗目的，每次換液只需提起濾器，傾去舊液，換進(jìn)新液。這種洗滌法的優(yōu)點(diǎn)是：①不會(huì)損壞組織材料②省時(shí)間省藥品，提高工效和經(jīng)濟(jì)效益。凡經(jīng)水至各級(jí)酒精脫水至70%酒精級(jí)時(shí)，材料可保存?zhèn)溆?。靜水洗滌法：2022/12/515四、染色：

愛(ài)氏蘇木精是整體制片法最常用的染液，是有效的核染料。其配方和配制方法如下：配方：蘇木精：2g純酒精：100ml冰醋酸：10ml甘油：100ml蒸餾水：100ml鉀明礬：2-3g

2022/12/516先將蘇木精溶于25ml酒精，再加甘油和醋酸，然后將其余75ml酒精加入，將鉀明礬溶于水中，加熱使其溶化，然后慢慢加入蘇木精染液中，隨加隨攪拌，混合后，應(yīng)放在有光和通風(fēng)處3星期使其成熟，成熟后為深紅色，即可使用。材料在染完色后呈藍(lán)紫色配制方法：2022/12/517

常用的脫水劑有乙醇（酒精）、二氧六環(huán)、正丁醇、叔丁醇、丙酮等藥劑

目的：1、除去組織內(nèi)的水分，并使其組織細(xì)胞變硬2、脫水后的組織再經(jīng)透明劑（二甲苯、氯仿等）透明，最后才能經(jīng)加拿大樹(shù)膠封藏，否則組織材料不透明，無(wú)法在顯微鏡下觀察。

方法：脫水之前先用50%A洗去多余的染液（2-5分鐘），然后按順序依次用70%A、85%A、95%A、100%A、100%A對(duì)材料進(jìn)行脫水處理。五、脫水：2022/12/518

透明是制片過(guò)程中的基礎(chǔ)工作，材料經(jīng)各級(jí)酒精脫水以后，要經(jīng)過(guò)常用的有機(jī)榕劑進(jìn)行透明。只有當(dāng)組織材料全為透明劑所占，并在顯微鏡下觀察呈透明狀態(tài)時(shí)，這種材料才符合制片要求，故透明是制片的重要環(huán)節(jié)，萬(wàn)不可忽視，凡未經(jīng)透明的材料（不論在何步驟透明）都必須重新退回處理，直到材料透明再繼續(xù)向下處理。常用透明劑種類(lèi)：二甲苯、氯仿、苯、甲苯、丁香油、冬青油、香柏油等。六、透明：2022/12/520七、封固：

注意：封片時(shí)樹(shù)膠的量要適宜，不宜過(guò)多，溢出蓋玻片四周，導(dǎo)致整個(gè)片子不干凈，不宜太少，不能充盈整個(gè)蓋玻片的范圍，還留有空氣。若樹(shù)膠可用