水中細菌總數(shù)測定課件

水中的細菌總數(shù)測定

培養(yǎng)基的配制消毒與滅菌水中細菌總數(shù)的測定菌落計數(shù)法（一）實驗目的（二）實驗原理（三）實驗器材（四）實驗方法（五）實驗作業(yè)培養(yǎng)基的制備與滅菌（一）實驗目的1、明確培養(yǎng)基的配制原則；2、掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟；3、了解高壓蒸汽滅菌的基本原理及應用范圍；4、掌握高壓蒸汽滅菌技術，了解幾種常用滅菌方法。常用加熱滅菌法：1、干熱滅菌：用火焰燒灼或電熱干燥箱內(nèi)高溫熱空氣滅菌2、濕熱滅菌⑴高壓蒸汽滅菌法⑵間歇滅菌法⑶煮沸消毒法

滅菌是指應用物理或化學的方法，殺滅物體表面和內(nèi)部一切微生物營養(yǎng)體、芽孢和孢子。滅菌方法很多，可分為加熱、過濾、照射和化學藥品法等。（三）實驗器材1.藥品和試劑：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、10％NaOH溶液、10％鹽酸溶液。2.器材：天平、藥匙、瓷缸、玻璃棒、電爐、PH試紙、試管、三角瓶、分裝漏斗、牛皮紙、棉花、線繩、干燥箱、高壓鍋。1.稱量

按照培養(yǎng)基配方，準確稱量各成份放于瓷缸中。配方：牛肉膏5.0g,蛋白胨10.0g，NaCl5.0g,瓊脂20.0g,蒸餾水1000ml,pH7.0。（四）實驗方法

培養(yǎng)基的制備過程

稱量---溶解----調(diào)節(jié)pH值----過濾----分裝及包扎----滅菌----滅菌后試管擺放斜面2.溶解向上述瓷缸中加入所需要的水量，攪拌，加熱使其溶解。如是配制固體培養(yǎng)基，在瓊脂的熔化過程中，需不斷攪拌，并控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦。待完全熔化后，補足所失水分。3.調(diào)節(jié)pH值用玻璃棒沾少許液體，測量PH值。用氫氧化鈉和鹽酸調(diào)節(jié)PH。6.滅菌：高壓蒸汽滅菌，1210C滅菌20分鐘。注意事項1、稱取藥品時嚴防藥品混雜，一把牛角匙稱一種藥品；2、蛋白胨極易吸濕，稱取時動作要迅速；2、配制固體培養(yǎng)基時，先將其他藥品加熱溶解到快沸時，再將稱好的瓊脂加入，繼續(xù)加熱至瓊脂完全熔化，此過程要不斷攪拌，以免瓊脂糊底，并控制火力，防止沸騰外溢；4、分裝量根據(jù)試管大小和實際需要而定，固體培養(yǎng)基裝量約為管高的1/5，液體培養(yǎng)基的裝量約為管高的1/4，三角瓶的裝量不超過瓶體的1/2；5、分裝過程中注意不要將培養(yǎng)基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。返回（五）實驗作業(yè)為什么濕熱滅菌比干熱滅菌法更有效？消毒與滅菌1．干熱滅菌法2．高壓蒸汽滅菌

3．紫外線滅菌法（二）高壓蒸汽滅菌

1、原理利用加熱一個密閉的加壓滅菌鍋，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸氣。由于蒸氣不能溢出，而增加了滅菌鍋內(nèi)的壓力，從而使沸點增高，得到高于100℃的溫度。導致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達到滅菌的目的。一般培養(yǎng)基用0.1Mpa，121.5℃,15～30min2、步驟加水裝待滅菌物品加蓋加熱滅菌時間到后斷電源壓力降為零開箱取物（三）紫外線滅菌法1、原理

紫外線殺菌機理主要是因為它誘導了胸腺嘧啶二聚體的形成和DNA鏈的交聯(lián)，從而抑制了DNA的復制。另一方面，由于輻射能使空氣中的氧電離成[O]，再使O2氧化生成臭氧或使水氧化生成H2O2。O3和H2O2均有殺菌作用。適用于無菌室，接種箱，手術室內(nèi)的空氣及物體表面的滅菌。水中細菌總數(shù)測定一、水樣的采集

1.采水容器

①采樣瓶：具磨口玻塞的500mL廣口瓶②采樣瓶的洗滌③

采樣瓶的滅菌:160～170℃干熱滅菌2h，或用高壓蒸汽滅菌器，121℃滅菌15min二、樣品保存

采好的水樣，應迅速運往實驗室，進行細菌學檢驗。一般從取樣到檢驗不宜超過2h，否則應使用10℃以下的冷藏設備保存樣品，但不得超過6h

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細菌總數(shù)的測定

細菌總數(shù)：指lmL水樣在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，于37℃培養(yǎng)24h后，所生長細菌菌落的總數(shù)。

一、細菌總數(shù)測定的意義

?可以反映水體有機污染的程度

?生活飲用水的細菌總數(shù)lmL不得超過100個Ⅰ細菌總數(shù)的測定水樣225mL無菌水25mL1mL1mLckck10-110-110-210-210-310-31mL1mL1mL1mL1mL1mL三、菌落計數(shù)37℃24hⅠ細菌總數(shù)的測定例次不同稀釋度的平均菌落數(shù)兩個稀釋度菌落數(shù)之比菌落總數(shù)/CFU·mL-1報告方式/CFU·mL-110-110-210-3123456136527602890無法計算27無法計算164295271165011305204660513512－1.62.2－－－1640037750271005130002703050016000或1.6×10