生藥1121-丙種球蛋白(聚丙烯酰胺凝膠電泳制備丙種球蛋白)-邱小猛課件

項目三丙種球蛋白的制備生藥1121邱小猛2011423237第一組任務(wù)1丙種球蛋白分離制備方案的制定SephadexG-50分離制備丙種球蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳制備丙種球蛋白掌握聚丙烯酰胺凝膠盤狀電泳的原理及基本操作。丙種球蛋白的制備電泳——帶電顆粒在電場的作用下，向著與其電性相反的電極移動，稱為電泳(electrophoresis)。電泳技術(shù)——指利用電泳現(xiàn)象對混合物進行分離分析的技術(shù)。應(yīng)用：

1、分離各種有機物：如蛋白質(zhì)、酶、核酸等

2、分析某種物質(zhì)的純度及分子量

3、電泳技術(shù)與層析法結(jié)合可用于物質(zhì)的結(jié)構(gòu)分析4、免疫電泳可提高對蛋白質(zhì)的鑒別能力電泳基本原理樣品本身：帶電量，分子大小，形狀電場強度：電壓電泳介質(zhì)的pH和離子強度電滲作用影響電泳速度的因素：電泳儀的安裝裝上貯槽和固定螺絲銷釘，仰放在桌面上。將長、短玻璃板分別插到凵形硅橡框的凹形槽中，注意勿用手接觸灌膠面的玻璃。將已插好玻璃板的凝膠模平放在上貯槽上，短玻璃板應(yīng)面對上貯槽。將下貯槽的銷孔對準已裝好螺絲銷釘?shù)纳腺A槽，雙手以對角線的方式旋緊螺絲帽。豎直電泳槽，在長玻璃板下端與硅膠?？蚪唤绲目p隙內(nèi)加入已融化的1%瓊脂(糖)。其目的是封住空隙，凝固后的瓊脂(糖)中應(yīng)避免有氣泡。試劑牛血清樣品、分離膠緩沖液、凝膠溶液、四甲基乙二胺、10%過硫酸銨（AP）、電極緩沖液、固定液、染色液、脫色液儀器圓盤電泳槽、電泳儀、電泳玻璃管、滴管、燒杯、刻度吸管、加樣槍、注射器等。實驗器材步驟：裝管配膠灌膠制樣點樣電泳剝膠固定染色脫色結(jié)果分析第二次第一次3.灌膠及封膠將混勻好的膠液，用滴管緩慢注入玻璃管，當(dāng)加到液面距離電泳玻璃管上口1cm時停止。注意在加的過程中不要混進空氣，

隨即用注射器經(jīng)針頭沿凝膠管壁緩慢加入蒸餾水至管滿，防止氧化，室溫下聚合15-20min。聚丙烯酰胺凝膠電泳制備丙種球蛋白6．電泳（1）電流電壓條件圓盤電泳：剛接通電源時，直流穩(wěn)流電流強度通常為1mA/管，10分鐘后直流穩(wěn)流電流強度通常為4mA/管。（2）電泳時間一般約需2.5小時。樣品中溴酚藍電泳至距分離膠前緣約1cm處時即可停止電泳。7.剝膠電泳結(jié)束后，取下玻璃管，用帶長針頭的注射器（內(nèi)盛蒸餾水）從濃縮膠一端緊貼玻璃管壁緩慢插入針頭，一面注入蒸餾水一面緩慢旋轉(zhuǎn)玻璃管?？克鞯膲毫蜐櫥饔檬鼓z和玻璃管的內(nèi)壁分開，待水流從另一端流出時，再慢慢將針頭退出（注意操作中不要把膠條攪碎）。然后用洗耳球輕輕在膠管的一端加壓，將膠條從玻璃管中緩慢滑出（置培養(yǎng)皿中）。

11.結(jié)果分析（1）觀察結(jié)果脫色完全后（背景清晰），觀察區(qū)帶的數(shù)量、大小、顏色深淺等，記錄（畫圖）（2）分析標(biāo)準結(jié)果γβα2α1

清蛋白

1．丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺是神經(jīng)毒性試劑，對皮膚有刺激作用，注意避免直接接觸。2．制膠時，要充分搖勻，加速劑TEMED最后加。3．灌凝