氨基酸的分離鑒定-濾紙層析法

氨基酸的分離鑒定

―濾紙層析法

氨基酸的分離鑒定-濾紙層析法共11頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!通過氨基酸的分離：1.學(xué)習(xí)紙層析法的基本原理；2.掌握濾紙層析的操作方法。目的氨基酸的分離鑒定-濾紙層析法共11頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!一.濾紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分配層析法。以水（被濾紙纖維結(jié)合）作為固定相，以有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，樣品點(diǎn)在濾紙上進(jìn)行展層，氨基酸在兩相中不斷分配，因?yàn)榉峙湎禂?shù)不同，故樣品隨流動(dòng)相移動(dòng)的速率不同，從而被分開，形成距原點(diǎn)距離不等的層析點(diǎn)。原理氨基酸的分離鑒定-濾紙層析法共11頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!原理二.氨基酸被分離后在紙層析圖譜上的位置是用Rf值(比移)來表示的

Rf=原點(diǎn)到層析中心的距離/原點(diǎn)到溶劑前沿的距離(在一定的條件下某種物質(zhì)的Rf值是常數(shù)。Rf值的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、溶劑系統(tǒng)、層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度等因素有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)利用紙層析法分離氨基酸。)氨基酸的分離鑒定-濾紙層析法共11頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!器材1、玻璃鐘罩

2、毛細(xì)管3、噴霧器4、培養(yǎng)皿5、層析濾紙(新華一號(hào))6、烘箱7、鉛筆（直尺）8、裁紙刀9、一次性手套

10、分液漏斗11、吹風(fēng)機(jī)12、移液管等常規(guī)儀器氨基酸的分離鑒定-濾紙層析法共11頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!1、準(zhǔn)備濾紙

取層析濾紙(15*17cm，距下端2cm處用鉛筆劃一條與底邊平行的直線，在此直線上每間隔相等距離作一記號(hào)，一共做五個(gè)記號(hào)（點(diǎn)樣用）。2、點(diǎn)樣

用毛細(xì)管將各氨基酸樣品分別點(diǎn)在中間5個(gè)記號(hào)上，自然風(fēng)干（或冷風(fēng)）后再點(diǎn)一次樣，每點(diǎn)在紙上擴(kuò)散的直徑，最大不超過5mm。操作（單向上行層析法）氨基酸的分離鑒定-濾紙層析法共11頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!1、整個(gè)實(shí)驗(yàn)為什么要戴手套進(jìn)行，且濾紙要妥善保存？2、為避免實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)“拖尾”現(xiàn)象，實(shí)驗(yàn)操作中應(yīng)注意哪些環(huán)節(jié)？3、為什么幾種氨基酸在濾紙上會(huì)出現(xiàn)上下分布？結(jié)合實(shí)驗(yàn)原理說說選擇其他氨基酸可能會(huì)有什么現(xiàn)象。思考題氨基酸的分離鑒定-濾紙層析法共11頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!顯色原理無色物質(zhì)的紙層析圖譜可用光譜法（紫外光照射）或顯色法鑒定。氨基酸紙層析圖譜常用的顯色劑為茚三酮或吲哚醌，本實(shí)驗(yàn)采用茚三酮為顯色劑。氨基酸的分離鑒定-濾紙層析法共11頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!1、物質(zhì)的量為0.008摩爾/升的賴氨酸、亮氨酸、天門冬氨酸、丙氨酸溶液及它們的混合液(各組份物質(zhì)的量均為0.008摩爾/升)。2、擴(kuò)展劑

正丁醇：甲酸：水=70:17:8（體積比）3、顯色劑2.5％茚三酮丙酮溶液。試劑氨基酸的分離鑒定-濾紙層析法共11頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!操作3、展層用訂書機(jī)將濾紙訂成筒狀，紙的兩邊不能接觸。將濾紙豎直立于培養(yǎng)皿中（有鉛筆線的一端朝下），用玻璃鐘罩蓋住，用層析柱與漏斗從鐘罩上口處加展開劑至培養(yǎng)皿高度2/3處，蓋上上口蓋子，待溶劑前沿上升至距頂端約1cm時(shí)取出濾紙，用鉛筆描出溶劑前沿界線，自然干燥或用吹風(fēng)機(jī)冷風(fēng)吹干。4、顯色用噴霧器均勻噴上2.5％茚三酮丙酮溶液，然后置烘箱中烘烤5分鐘(65℃)即可顯出各層析斑點(diǎn)。5、計(jì)算各種氨基酸的Rf值。氨基酸的分