液相色譜基礎(chǔ)知識

液相色譜基礎(chǔ)知識WatersLCSchool培訓(xùn)教材第一頁，共二十二頁。蒸餾離心電泳過濾超濾色譜常見的分離方式第二頁，共二十二頁。色譜法的分類第三頁，共二十二頁。HPLC分離的機理第四頁，共二十二頁。典型的儀器配置第五頁，共二十二頁。液相色譜的應(yīng)用（一）“分析型液相色譜”定性及定量分析靈敏度的要求樣品的復(fù)雜性樣品量的要求精度及準(zhǔn)確度的要求容易使用第六頁，共二十二頁。液相色譜的應(yīng)用（二）“制備型液相色譜”分離及純化化合物的穩(wěn)定性樣品的復(fù)雜性制備量的要求純度的要求，及純度的鑒定方法的安全性第七頁，共二十二頁。開發(fā)液相色譜方法問題∶什么樣的分離結(jié)果是好的?分辨率?第八頁，共二十二頁。什么是色譜的分辨率？分辨率的公式：第九頁，共二十二頁。影響分辨率的因素：K’，a，N分辨率的方程∶

k'是容量因子，表達了樣品與柱填料的作用強弱。

a是選擇性系數(shù)，描述兩化合物分離的好壞程度。是化學(xué)因素。N是理論塔板數(shù)，描述色譜峰的譜帶展寬程度。第十頁，共二十二頁。色譜柱的柱效N理論塔板數(shù)計算公式：W s

方法Wtan 16 切線法Wh 5.54 半峰高W3s 9 3sW4s 16 4sW5s 25 5s第十一頁，共二十二頁。InjectInject用“切線”法計算柱效不好的色譜柱的柱效反而比好色譜柱的要高，因為其拖尾部分測不出來第十二頁，共二十二頁。GoodColumnBadColumnInjectInject用“5”法計算柱效第十三頁，共二十二頁。提高柱效的方法色譜柱本身減小填料的顆粒度找到最佳的流速(根據(jù)不同內(nèi)徑)合適的溫度降低溶劑的粘度增加柱長第十四頁，共二十二頁。其他影響柱效的因素柱外效應(yīng)連接管路進樣器、檢測器進樣體積進樣量第十五頁，共二十二頁。容量因子k'改變k'值的方法∶調(diào)節(jié)流動相的極性、pH、離子強度等梯度淋洗與峰高的關(guān)系與R的關(guān)系第十六頁，共二十二頁。選擇性系數(shù)a定義∶

a=1時兩組分分不開，改變a的途徑改變固定相改變流動相改變溫度改變樣品的本身性質(zhì)第十七頁，共二十二頁。a，k'，N∶如何控制分辨率?第十八頁，共二十二頁。液相色譜的檢測模式靈敏度、選擇性、及適應(yīng)能力第十九頁，共二十二頁。色譜條件的優(yōu)化第二十頁，共二十二頁。開發(fā)液相色譜方法分辨率是色譜分離中主要考慮的因素在開發(fā)色譜方法時，有很多因素是很重要的。除分辨率之外，以下幾個因素都要考慮。 靈敏度載樣量分析速度溶劑損耗成本容易使用色譜柱壽命效率第二十一頁，共二十二頁。內(nèi)容梗概液相色譜基礎(chǔ)知識。WatersLCSchool培訓(xùn)教材。純度的要求，及純度的鑒定。問題∶什么樣的分離結(jié)果是好的。影響分辨率的因素：K’，a，N。W s 方法。Wtan 16 切線法。Wh 5.54 半峰高。W5s 25 5s。不好的色譜柱的柱效反而比好色譜柱的要高，因為