食品微生物實驗室的基本要求課件

食品微生物實驗室的

基本要求與管理嚴(yán)紀(jì)文jiwen.y@163.comGB4789.1-2010總則：3.1環(huán)境3.1.1實驗室環(huán)境應(yīng)不影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。3.1.2實驗室的工作區(qū)域應(yīng)與辦公室區(qū)域明顯分開。3.1.3實驗室工作區(qū)域面積和總體布局應(yīng)能滿足從事檢測工作需求，實驗室布局應(yīng)采用單方向工作流程，避免交叉污染。3.1.4實驗室內(nèi)溫度、濕度、照度、噪聲和潔凈度等應(yīng)符合工作要求。3.1.5一般樣品檢測應(yīng)在潔凈區(qū)域(包括超凈工作臺或潔凈實驗室)進(jìn)行，潔凈區(qū)域的應(yīng)有明顯標(biāo)示。3.1.6病原微生物分離鑒定工作應(yīng)在二級生物安全實驗室(Biosafetylevel2BSL-2)進(jìn)行。什么是生物安全實驗室？是通過規(guī)范的實驗室設(shè)計建造、實驗設(shè)備的配置、個人防護(hù)裝備的使用（硬件）、嚴(yán)格遵從標(biāo)準(zhǔn)化的操作程序和管理規(guī)程等（軟件）：確保操作生物危險因子的工作人員不受實驗對象的傷害；確保周圍環(huán)境不受其污染；確保實驗因子保持原有本性所采取綜合措施的實驗室。生物安全防護(hù)的基本原則(三要素)安全設(shè)備、個體防護(hù)裝置和措施。實驗室的特殊設(shè)計和建設(shè)要求。嚴(yán)格的管理制度和標(biāo)準(zhǔn)化的操作程序和規(guī)程目標(biāo)確保實驗室工作人員不受實驗對象侵染，確保周圍環(huán)境不受其污染的目的。生物安全實驗室設(shè)施的基本要求必須為實驗室安全運(yùn)行、清潔和維護(hù)提供足夠的空間。實驗室的墻壁、天花板和地面應(yīng)光整、易清潔、防滲漏并耐化學(xué)品和消毒劑的腐蝕。地板應(yīng)防滑。實驗臺面應(yīng)防水，并可耐消毒劑、酸、堿、有機(jī)溶劑和中等熱度的作用。應(yīng)保證實驗室內(nèi)所有活動的照明，避免不必要的反光和閃光。實驗室器具應(yīng)堅實耐用，在實驗臺、生物安全柜和其它設(shè)備之間及其下面要保證有足夠的空間以便進(jìn)行清潔。應(yīng)當(dāng)有足夠的儲存空間。應(yīng)當(dāng)有足夠的儲存空間擺放隨時使用的物品(試劑、氣體等)。在實驗室工作區(qū)外應(yīng)當(dāng)有存放外衣和私人物品的設(shè)施。還應(yīng)當(dāng)有供長期使用的存儲空間。應(yīng)當(dāng)考慮設(shè)置機(jī)械通風(fēng)系統(tǒng)，以使空氣向內(nèi)單向流動。如果沒有機(jī)械通風(fēng)系統(tǒng)，實驗室窗戶應(yīng)當(dāng)能夠打開，同時安裝防蟲紗窗。在實驗室內(nèi)應(yīng)有基本生物安全設(shè)備：生物安全柜(一級或二級）、移液助器、乳膠手套等BSL-2實驗室的主要技術(shù)指標(biāo)級別潔凈度級別最小換氣次數(shù)(次/h)與室外方向上相鄰相通房間的最小負(fù)壓差(Pa)溫度℃相對濕度%噪聲dB(A)最低照度lx一級_可開窗_18~28≤70≤60200二級_可開窗_18~2730~70≤60300三級7或815或12-1015~2530~60≤60350四級7或815或12-1018~2430~60≤60350注：BSL-3主要實驗室相對于大氣的最小負(fù)壓不應(yīng)小于-30Pa，BSL-4主要實驗室相對于大氣的最小負(fù)壓不應(yīng)小于-40Pa。本表中的噪聲不包括生物安全柜、動物隔離器的噪聲，如包括上述設(shè)備的噪聲，則最大不應(yīng)超過68dB(A)。BSL－2：實驗室設(shè)施(二級屏障)BSL-2實驗室生物安全標(biāo)識生物安全柜千級無菌實驗室風(fēng)淋室無菌入口處應(yīng)開設(shè)緩沖間，緩沖間內(nèi)應(yīng)安裝非手動式形關(guān)的洗手盆，并可有毛巾。緩沖間應(yīng)有足夠的面積以保證操作人員更換工作服和鞋帽。無菌室內(nèi)工作臺的高度約80cm，工作臺應(yīng)保持水平。工作臺面應(yīng)無滲漏，耐腐蝕，易于清潔、消毒。無菌室內(nèi)光照應(yīng)分布均勻，工作臺面的光照度應(yīng)不低于540lx。無菌室內(nèi)應(yīng)具備適當(dāng)?shù)耐L(fēng)和溫度調(diào)節(jié)條件。無菌室的推薦溫度為20℃，相對濕度為40%~60%。緩沖間及操作室內(nèi)均應(yīng)設(shè)置達(dá)到空氣消毒效果的紫外燈或其它適宜的消毒裝置。微生物實驗室消毒處理方法無菌室紫外線消毒在室溫20℃~25℃時，220V30W紫外燈垂直1.0m處的253.7nm紫外線輻射強(qiáng)度應(yīng)≥70μW/cm2，低于此值時應(yīng)更換。適當(dāng)數(shù)量的紫外燈，確保平均每立方米應(yīng)不少于1.5W。紫外線消毒時，無菌室內(nèi)應(yīng)保持清潔干燥。在無人條件下，可采取紫外線消毒，作用時間應(yīng)≥30min，室內(nèi)濕度＜20℃或＞40℃、相對濕度＞60%時，應(yīng)適當(dāng)延長照射時間。用紫外線消毒物品表面時，應(yīng)使照射表面受到紫外線的直接照射，且應(yīng)達(dá)到足夠的照射劑量。人員在關(guān)閉紫外燈后至少30min方可入內(nèi)操作。按照ISO18953的規(guī)定，評價紫外線的消毒與殺菌效果。無菌室臭氧消毒封閉無菌室內(nèi)，無人條件下，采用20mg/m3濃度的臭氧，作用時間應(yīng)≥30min。消毒后臭氧濃度≤0.2mg/m3時方可入內(nèi)操作。按照GB/T18202的規(guī)定，檢測室內(nèi)臭氧濃度。無菌室(≤30m2)無菌室(≤30m2)無菌室(≥30m2)采樣點設(shè)置圖

在所選位點，將平板計數(shù)瓊脂平板(90mm)或置于距地面80cm，開蓋暴露15min，然后，置36℃±1℃的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h±1h。如果檢測某目標(biāo)霉菌或細(xì)菌，則可用選擇性瓊脂平板(如PDA、PALCAM等)。確定平板上的菌落數(shù)，如大于所設(shè)定的風(fēng)險值，應(yīng)分析原因，并采取適當(dāng)措施。培養(yǎng)基與試劑的消毒與滅菌培養(yǎng)基通常應(yīng)采用高壓溫?zé)釡缇ǎ?21℃滅菌15min，特殊培養(yǎng)基按使用者的特殊要求進(jìn)行滅菌(如含糖培養(yǎng)基，115℃滅菌20min)。部分培養(yǎng)基(如嗜鹽瓊脂培養(yǎng)基、膽硫乳培養(yǎng)基等)，只能煮沸滅菌。對熱敏感的培養(yǎng)基或添加物質(zhì)，應(yīng)采用膜過濾的方法過濾除菌。即用型培養(yǎng)基不需滅菌，應(yīng)參見相關(guān)國際標(biāo)準(zhǔn)或供應(yīng)商使用說明書，直接使用。器具與設(shè)備的消毒滅菌溫?zé)釡缇翰捎酶邏簻缇鳎?21℃滅菌20min，適用于玻璃器皿、移液器吸頭、塑料瓶等。按照GB15981的規(guī)定，評價高壓滅菌器的殺菌效果。干燥滅菌：采用干燥箱滅菌，160℃，滅菌2h，適用于玻璃器皿和不銹鋼器具等。液體消毒劑消毒：使用適當(dāng)濃度自配或商業(yè)液體消毒劑對工作臺面、器具或設(shè)備表面進(jìn)行消毒?？砂凑誈B15981的規(guī)定，評價自配或商業(yè)液體消毒劑的消毒效果?？砂凑誌SO18953的規(guī)定，監(jiān)測工作臺面、器具或設(shè)備表面的消毒效果。實驗室廢棄物的處理對于培養(yǎng)物及其污染的物品(如培養(yǎng)基、測試條、生物鑒定管、血清學(xué)鑒定用玻片、用過的移液器吸頭、細(xì)菌培養(yǎng)皿、注射器等)，應(yīng)使用適當(dāng)濃度的自配或商業(yè)液體消毒劑對其處理一定時間，或121℃高壓滅菌至少30min，或其他有效處理措施。將處理物倒入特殊標(biāo)志的垃圾袋內(nèi)，直接送到指定地點。對于實驗動物尸體及相關(guān)廢棄物，按照GB14925的規(guī)定進(jìn)行處理。記錄并保留廢棄物和實驗動物尸體處理的記錄。部分消毒劑的特性消毒劑抗活性被滅活毒性真菌細(xì)菌分枝桿菌孢子親脂病毒非親脂病毒蛋白質(zhì)天然物質(zhì)合成物質(zhì)硬水去垢劑皮膚眼睛肺G+G_次氯酸鹽+++++++++++++++++++C+++乙醇-+++++++++-+V++++-+甲醛+++++++++++++++a++++++-+++戊二醛+++++++++++++++b++NA+++NA+++++++++碘載體+++++++++++++++++++++++A++-注：+++，良好；++，一般；+，