chap14維生素類藥物的分析課件

第十四章維生素類藥物的分析AnalysisofVitaminsPharmaceuticalAnalysis1學習要求掌握維生素A、維生素B、維生素C、維生素E的化學結構、理化性質以及與分析方法間的關系，它們的專屬鑒別反應、主要的含量測定方法與原理。熟悉維生素A、維生素B、維生素C、維生素E的有關物質、檢查方法與原理。了解維生素D性質和分析特點。2維生素：是維持人體正常代謝機能所必需的微量營養(yǎng)物質。脂溶性：VitA、D2、D3、

E、K1

等水溶性：VitB族(B1、B2、B6、B12)、VitC、葉酸、煙酸、煙酰胺3維生素缺乏導致的病癥維生素A缺乏——夜盲癥、干眼?。▌游飪扰K、富含胡蘿卜素的蔬菜水果）維生素B1缺乏——腳氣?。ü阮?、豆類、堅果類、瘦豬肉及動物內臟）維生素C缺乏——壞血?。ㄐ迈r蔬菜和水果）維生素D缺乏——小兒佝僂病與成人骨軟化病(足夠的日光、海魚、動物內臟、蛋黃)維生素E缺乏——一般不缺乏（體內駐留時間長）。（植物油）5R:-H維生素A醇-COCH3維生素A醋酸酯-COC15H31維生素A棕櫚酸酯第一節(jié)維生素A一、結構與性質環(huán)己烯共軛多烯醇6結構特點：（1）環(huán)己烯+共軛多烯側鏈；（2）天然VA側鏈為全反式；（3）天然來源主要是魚肝油，為醋酸酯，棕櫚酸酯等,目前多由人工合成。7性質：1、紫外吸收＊具有共軛多烯側鏈－－紫外吸收。＊最大吸收波長在325～328nm，隨VA存在狀態(tài)以及所用的溶劑，最大吸收波長的位置有所不同。＊有干擾物質存在（VitA2、VitA3、鯨醇）。82、不穩(wěn)定性：共軛多烯側鏈易被氧化，△或有金屬離子存在時氧化↑環(huán)氧化物VitA醛VitA酸10條件：無水、無醇CHCl3二、鑒別試驗1.三氯化銻反應藍色紫紅12λmax326nm一個吸收峰λmax350～390nm三個吸收峰2、UV法（BP2000）去水VitA（VitA3）↓VitA14153、TLC法

BP雜質對照品法顯色劑：三氯化銻USP顯色劑：磷鉬酸規(guī)定斑點顏色和Rf值16三、含量測定UV法:三點校正法（ChP2010第一法）三氯化銻比色法HPLC法（ChP2010第二法）171、為何要采用三點校正法？維生素A原料藥中?；煊须s質，如維生素A2、維生素A3等，這些雜質在維生素A的最大吸收波長附近有吸收，采用三點校正法可以消除這些雜質的干擾。2、測定原理1）在310～340nm范圍內，雜質吸收呈一直線，且隨波長的增大吸收度下降。2）物質對光吸收呈加和性。三點校正法184、測定方法首先判斷用哪個吸收度(A328orA328(校正)）進行含量計算。第一法：供試液濃度為9～15IU/ml，溶劑為環(huán)己烷，在300、316、328、340、360nm五個波長處測定吸收度。1）最大吸收波長在326～329nm之間，計算吸收度比值Ai/A328，并與規(guī)定值相減，差值不超過±0.02，則用A328計算含量。202）如果最大吸收波長在326～329nm之間，5個波長下的差值有一個或幾個超過±0.02，這時先計算A328（校正）：A328（校正）=3.52（2A328-A316-A340）A328（校正）-A328------------------×100%A328

再計算21三點校正法第一法步驟小結：Ⅰ：最大吸收波長是否在326-329nm間符合--Ⅱ，不符合—第二法Ⅱ：測定指定波長吸收度Ⅲ：計算（A指定波長/A328）比值,并與規(guī)定值比較符合--Ⅴ，不符合—ⅣⅣ：計算校正吸收度，并與實測值比較，判斷是否需要校正Ⅴ：計算328nm處樣品的E1cm1%

Ⅵ：計算效價及標示量的百分含量維生素A醋酸酯的換算：IU/g=E1cm1%×1900

IU/丸標示量%=×100%標示量23第二法（皂化法，適用于維生素A醇）第一法無法消除雜質干擾時用此法2426275、討論1）維生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直線方程式法推導而來：維生素A醇的吸收度校正公式是用相似三角形法推導而來。2）在應用三點校正法時，除其中一點在最大吸收波長處測定外，其余兩點均在最大吸收峰的兩側進行測定。如果儀器波長精度不準確時，會產生較大誤差。因此，在測定前務必要校正波長，并可用全反式維生素A進行測定，比較測定結果和比值是否與對照品相符合，以進一步核對儀器波長是否準確。測定的樣品應不得少于兩份。3）中國藥典（2010年版）收載的維生素A軟膠囊采用三點校正法測定。28A300：0.354A316：0.561A328：0.628A340：0.523A360：0.216A300/A328：0.555A316/A328：0.907A328/A328：1.000A340/A328：0.811A360/A328：0.299規(guī)定比值30A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.833A360/A328：0.3440.5550.9071.0000.8110.299+0.01－0.010+0.02+0.04－－－－－=====3132優(yōu)點：簡便、快速缺點：呈色不穩(wěn)定（5～10s內）水分干擾（反應需要無水條件）專屬性差（有關物質的干擾）三氯化銻有腐蝕性（注意安全）λmax618nm～620nm2、三氯化銻比色法(標準曲線法)333、HPLC法（ChP2010新增的分析方法）適用于維生素A醋酸酯原料及其制劑中維生素A的含量測定。34第二節(jié)維生素E一、結構與性質名稱：消旋—α—生育酚醋酸酯母核：苯駢二氫吡喃衍生物苯環(huán)上有一乙?；姆恿u基側鏈：脂肪烷烴35化學性質：1、易溶于有機溶劑，不溶于水2、UV:284nm(乙醇)3、酯鍵易水解4、對氧敏感，易氧化△36橙紅色二、鑒別1.硝酸反應（chp2010）取本品約30mg，加無水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，搖勻，在75℃加熱15分鐘，溶液應顯橙紅色。37生育紅（橙紅色）生育酚HNO3強氧化劑38△[O]2.三氯化鐵－聯吡啶反應紅色39生育酚對-生育醌[O]弱氧化劑403.UV法284nm254nm414.TLC法薄層板硅膠G展開劑環(huán)己烷-乙醚（4：1）顯色劑硫酸（105℃5′）

VitERf

=0.742三、檢查：游離生育酚硫酸鈰滴定液（0.01mol/L）指示劑：二苯胺（亮黃→灰紫）

2.試劑1.原理：利用游離生育酚的還原性，將硫酸鈰還原成硫酸亞鈰433、方法取本品0.10g，加無水乙醇5ml溶解后，加二苯胺試液1滴，用硫酸鈰液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸鈰液（0.01mol/L）不得過1.0ml。44四、含量測定1.GC法（ChP2010）載氣→N2固定液→硅酮（OV-17）擔體→硅藻土或高分子多孔小球柱溫→265℃檢測器→FID內標→正三十二烷色譜條件適用性試驗n≥500，R≥245462、JP-RP-HPLC法樣品→dl－α－生育酚固定相→十八烷基硅烷鍵合硅膠流動相→甲醇-水（49：1）檢測波長→292nmR＞2.6RSD≤0.8%色譜條件47原理：利用生育酚的易氧化性指示劑：二苯胺（亮黃→灰紫）△3、鈰量法48氨基嘧啶環(huán)－CH2－噻唑環(huán)(季銨堿)Cl-·HCl第四節(jié)維生素B1一、結構與性質493.硫色素反應4.堿性：嘧啶環(huán)——伯氨，噻唑環(huán)——季銨可與酸成鹽與生物堿↓→↓含量測定——非水堿量法1.溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性2.UV:246nm(鹽酸液)501.硫色素反應（維生素B1專屬反應）二、鑒別試驗51H+H+2.沉淀反應H+523、硝酸鉛反應4、氯化物反應53三、含量測定1.非水溶液滴定法（ChP2010）喹那啶紅－亞甲藍（紫紅→天藍）加入醋酸汞的目的－－消除氫鹵酸鹽對非水滴定的干擾。542.UV法246nm553.硫色素熒光法NaOH56自學--維生素D:了解雜質檢查中麥角甾醇的檢查；2.初步掌握正相高效液相色譜法的應用。57L－抗壞血酸第五節(jié)維生素C一、結構與性質581.強還原性：烯二醇結構59△50℃2.結構與糖類相似，具糖的性質----糖類的顯色反應3.UV特征(243nm)4.溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性。605.酸性：一元酸C3－OH，pKa=4.17C2－OH，pKa=11.57616.水解反應：與堿反應62二、鑒別試驗1.與氧化劑的反應631)與AgNO3反應(ChP2010)2)與2，6-二氯靛酚反應(ChP2010)氧化型玫瑰紅色藍色OHˉ（還原型）643)與堿性酒石酸銅反應（USP）4)與KMnO4反應652.糖類的反應糠醛：3.UV0.01mol/LHCL液中，λmax＝243nm66指示劑：淀粉指示液三、含量測定1.碘量法（ChP2010）原理67取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯藍色，在30秒內不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相當于8.806mg的C6H8O6方法68酸性環(huán)境：減慢VitC被O2氧化速度新沸冷H2O：趕走水中O2

立即滴定：減少O2的干擾附加劑干擾的排除：討論片劑——滑石粉——過濾注射劑——抗氧劑——丙酮Na2SO3NaHSO3

Na2S2O3Na2S2O5692.2，6-二氯靛酚滴定法原理方法自身指示劑終點法70討論（1）酸性環(huán)境（HPO3-HAc）：

穩(wěn)定VitC（2）快速滴定（2min內）：

防止其他還原性物質干擾（3）剩余比色測定71（4）缺點

需經常標定貯存≤一周干擾多氧化力較強（5）專屬性比碘量法高，多用于維生素C制劑的分析。不穩(wěn)定72在三氯醋酸或鹽酸存在下，經水解、脫羧、失水后，加入吡咯即產生藍色產物的藥物應是A.氯氮卓B.維生素AC.普魯卡因D.鹽酸嗎啡E.維生素C習題73中國藥典（2005年版）采用以下何法測定維生素E含量A.酸堿滴定法B.氧化還原法C.紫外分光光度法D.氣相色譜法E.非水滴定法74下列藥物的堿性溶液，加入鐵氰化鉀后，再加正丁醇，顯藍色熒光的是A.維生素AB.維生素B1

C.維生素CD.維生素DE.維生素E75既具有酸性又具有還原性的藥物是A.維生素AB.咖啡因C.苯巴比妥D.氯丙嗪E.維生素C76測定維生素C注射液的含量時，在操作過程中要加入丙酮，這是為了A.保持維生素C的穩(wěn)定B.增加維生素C的溶解度C.使反應完全D.加快反應速度E.消除注射液中抗氧劑的干擾77能發(fā)生硫色素特征反應的藥物