青島大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)免疫學(xué)chapter24

24免疫診斷第一節(jié)Ag或Ab的檢測(cè)AgAb反應(yīng)的原理㈠反應(yīng)的特異性（Specificity

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Ag與Ab的結(jié)合為非共價(jià)的可逆結(jié)合一種抗原一般只能與由它刺激所產(chǎn)生的抗體結(jié)合，這是抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的專(zhuān)一性，即特異性。抗原抗體結(jié)合力的大小，常用親和力（affinity）或親合力（avidity）來(lái)表示。親和力（affinity）——指抗體分子上一個(gè)抗原結(jié)合部位與相應(yīng)的抗原決定基之間的結(jié)合強(qiáng)度。親合力（avidity）——指一個(gè)抗體分子與整個(gè)抗原之間的結(jié)合強(qiáng)度，與抗原決定基的數(shù)目相關(guān)。一抗——用已知抗原免疫動(dòng)物所得的抗血清（antiserum）或單抗二抗——用Ig免疫異種動(dòng)物所得的抗抗體㈡反應(yīng)的可見(jiàn)性

是指抗原抗體特異性結(jié)合時(shí)，生成結(jié)合物的量與反應(yīng)物的濃度的關(guān)系，只有當(dāng)兩者濃度比例適當(dāng)時(shí)，才出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)。Ag或Ab的檢測(cè)方法凝集反應(yīng)，agglutination直接凝集：玻片法，如血型鑒定、細(xì)菌鑒定試管法，如肥大凝集試驗(yàn)間接凝集：Coombs試驗(yàn)（二）沉淀反應(yīng)（precipitation）血清蛋白質(zhì)、細(xì)胞裂解液或組織浸液等可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后出現(xiàn)沉淀物的反應(yīng)。1、單向免疫擴(kuò)散（singleimmunodiffusion）2、雙向免疫擴(kuò)散（doubleimmunodiffusion）3、免疫電泳（immunoelectrophoresis）4、免疫比濁（immunonephelometry）（三）補(bǔ)體參加的反應(yīng)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)溶血空斑試驗(yàn)（四）用標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)1、免疫熒光法（immunofluorescence）（1）直接熒光法（2）間接熒光法2、酶免疫測(cè)定（enzymeimmunoassay，EIA）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA

）（1）雙抗體夾心法（2）間接法（3）BAS（biotinavidinsystem）-ELISA

固相載體包被抗體+待檢抗原+生物素（biotin）標(biāo)記的抗體+親和素（avidin）及酶標(biāo)記的生物素+底物顯色（4）酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法（enzyme-linkedimmunespot，ELISPOT）抗細(xì)胞因子的抗體包被固相載體+待檢細(xì)胞，溫育后洗去細(xì)胞+酶標(biāo)抗體+底物顯色（5）免疫組化技術(shù)（immunohistochemistrytechnique）包括酶免疫組化、免疫金銀組化、免疫電鏡技術(shù)等4、放射免疫測(cè)定法（radioimmunoassay，RIA）5、化學(xué)發(fā)光免疫分析6、免疫印跡法（Westernblotting）分三步：（1）SDS（2）電轉(zhuǎn)移（3）固相酶免疫測(cè)定第二節(jié)免疫細(xì)胞的測(cè)定一、淋巴細(xì)胞的分離與類(lèi)型鑒定分離：1、用淋巴細(xì)胞分層液密度梯度離心法制備外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheralbloodmononuclearcell，PBMC），包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。2、用粘附貼壁法、磁鐵吸引法等將淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞分離3、用E花環(huán)沉降法、尼龍毛柱分離法等可將T、B淋巴細(xì)胞分離類(lèi)型鑒定：——檢測(cè)表面標(biāo)志1、免疫熒光法——間接免疫熒光法2、磁珠分離法3、流式細(xì)胞術(shù)（flowcytometry）流式細(xì)胞儀（flowcytometer，F(xiàn)CM）GreenFluorescenceIntensityNumberofCellsUnstainedcellsFITC-labeledcellsOneParameterHistogram二、淋巴細(xì)胞功能測(cè)定（一）T細(xì)胞功能測(cè)定1、T細(xì)胞增殖試驗(yàn)——PHA、ConA作刺激物（1）形態(tài)學(xué)方法（2）3H-TdR摻入法（3）MTT法2、細(xì)胞毒試驗(yàn)（1）51Cr釋放法（2）凋亡細(xì)胞檢查法（如電泳法、流式細(xì)胞術(shù)等）3、細(xì)胞因子檢測(cè)（1）ELISA——雙抗體夾心法、ELISPOT法（2）生物學(xué)活性測(cè)定法（3）聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）4、皮膚試驗(yàn)1）特異性抗原皮膚試驗(yàn)如OT試驗(yàn)——將定量舊結(jié)核菌素（OT）注射到受試者前臂皮內(nèi)，24~48h局部紅腫硬結(jié)，硬結(jié)直徑大于0.5cm者為陽(yáng)性。2）PHA皮膚試驗(yàn)將定量PHA注射到受試者前臂皮內(nèi)，6~16h局部紅斑硬結(jié)，24~48h達(dá)到高峰，硬結(jié)直徑大于15mm者為陽(yáng)性。（二）B細(xì)胞功能測(cè)定1、B細(xì)胞增殖試驗(yàn)小鼠——用LSP刺激人—