藥學(xué)分子生物學(xué)

一、名解DNA的一級構(gòu)造：指四種脫氧核苷酸〔dAMP、dCMP、dGMP、dTMP〕依據(jù)肯定的排列挨次，通過3’5不同，故又可稱為堿基挨次。DNA的二級構(gòu)造：即DNA的雙螺旋構(gòu)造，DNA分子由兩條多聚脫氧核糖核苷酸鏈(DNA單鏈)組成。兩條鏈沿著同一根軸平行盤繞，形成右手雙螺旋構(gòu)造。兩條鏈的走向相反。3.DNA的三級構(gòu)造：即超螺旋DNA，指DNA雙螺旋通過彎曲和扭轉(zhuǎn)所形成的特定構(gòu)象。DNA或RN形成一個雜交體，這個過程即雜交。或核酸。通常是人工合成的?；蛐酒河址QDNA芯片，指將大量〔通常每平方厘米點陣密度高于400〕探針分子固定于微小載體后與標記的樣品分子進展雜交而獵取樣品分子的數(shù)量和序列信息。DNA或RNA的核酸序列互補結(jié)合，通過空間位阻效應(yīng)或誘導(dǎo)RNase活性的降解作用，抑制或封閉目的基因的表達。染色體：真核細胞有絲分裂期(M期)高度螺旋化的DNA蛋白質(zhì)纖維，是間期染色質(zhì)進一步嚴密盤繞折疊的結(jié)果?！瞡ucleosome〕:是染色質(zhì)的根本構(gòu)造單位,〔coreparticle〕DNA〔linkerDNA〕二局部組成10.DNADNA序列成為兩個或兩個以上基因的組成局部。斷裂基因：真核生物構(gòu)造基因，由假設(shè)干個編碼區(qū)和非編碼區(qū)相互間隔開但又連續(xù)鑲嵌而成，去除非編碼區(qū)再連接后，可翻譯出由連續(xù)氨基酸組成的完整蛋白質(zhì)，這些基因稱為斷裂基因復(fù)等位基因：每條基因位于染色體的特別位點上，稱為遺傳基因座。復(fù)等位基因就是該基因座上所覺察的不同形式?；蚣易澹赫婧松锘蚪M中有很多來源一樣、構(gòu)造相像、功能相關(guān)的基因，這樣一組基因稱為基因家族。遺傳圖譜：又稱基因連鎖圖或染色體圖。是以具有多態(tài)性的遺傳標記為界標，以遺傳學(xué)距離為圖距的基因組圖。物理圖譜：是以一段的特異DNA序列為界標，以堿基對(bp)或千堿基(kb)或兆堿基(Mb)為圖距所呈現(xiàn)的基因組圖。它能反映生物基因組中基因或標記間的實際距離。質(zhì)粒：是指細菌和某些真核生物染色體以外的小分子環(huán)狀雙鏈DNA。質(zhì)粒不相容性：同種的或親緣關(guān)系相近的兩種質(zhì)粒不能同時穩(wěn)定地保持在一個細胞內(nèi)的現(xiàn)象，稱為質(zhì)粒不相容性。操縱子：是基因表達的協(xié)調(diào)單位，由啟動子、操縱序列及其所把握的一組功能上相關(guān)的構(gòu)造基因所組成。操縱子是原核基因表達調(diào)控的一種重要的形式乳糖操縱子：是一種典型的可誘導(dǎo)系統(tǒng)，他把握乳糖的分解代謝。乳糖的存在可誘導(dǎo)操縱子的轉(zhuǎn)錄，并合成一系列酶，催化乳糖的分解。順式作用元件：與相關(guān)基因處于同一DNA分子上，能起調(diào)控作用的DNA序列，一般不轉(zhuǎn)錄任何產(chǎn)物。1反式作用因子：為DNA結(jié)合蛋白、核內(nèi)蛋白，識別啟動子、啟動子近側(cè)元件和增加子等順式作用元件中的特異性序列。鋅指：一個α螺旋與一個反向平行β片層的基部以鋅原子為中心，通過與一組保守的氨基酸相連接，在蛋白質(zhì)中形成相對獨立的功能域。限制性核酸內(nèi)切酶：簡稱限制酶：是一類能夠識別和切割某種特定核苷酸序列并能產(chǎn)生具有二重對稱特異序列構(gòu)造的水解酶。表達載體：在常用的克隆載體中參加一些與表達調(diào)控有關(guān)的元件〔DNA序列〕即為表達載體，它不僅可攜帶外源基因片段進入宿主細胞，而且可在宿主細胞中表達外源基因。25.限制－修飾現(xiàn)象：細菌能將外來DNA片段在某些專一位點上切斷，破壞入侵的外源DNA(如噬菌體DNA等)DNADNA分子合成限制性酶的破壞DNA物理圖譜〔限制性圖譜：標明限制酶在DNA大小及排列挨次的圖譜。DNA序列在受體細胞中復(fù)制擴增并產(chǎn)生足夠量目的基因的載體。多克隆位點：DNA載體序列上人工合成的一段序列，含有多個限制內(nèi)切酶識別位點。能為外源DNA供給多種可插入的位置或插入方案。粘尾質(zhì)粒：即含有cos位點的質(zhì)粒。cos位點：當λDNA進入細菌細胞后，便快速通過黏性末端配對形成雙鏈環(huán)狀的DNA分子，這種黏性末端結(jié)合形成雙鏈的區(qū)域稱為 cos位點。非融合型表達載體：pKK223-3，這類載體表達出的蛋白質(zhì)不與細菌任何蛋白質(zhì)或多肽融合在一起。酵母人工染色體：是利用酵母染色體DNA和大腸桿菌pBR322改造而成，可以插入長達1000Kb的外源DNA片斷基因組文庫：基因組文庫是指將某生物的全部基因組DNA切割成肯定長度的DNA片段克隆到某種載體上而形成的集合。穿梭質(zhì)粒：指一類人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制起點和選擇標記，因而可以在兩種不同類群宿主〔如原核細胞和真核細胞〕中存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體。cDNAmRNADNA為根底構(gòu)建的。由某一生物的特定器官或特定發(fā)育階段細胞內(nèi)總mRNA逆轉(zhuǎn)錄成互補cDNA所構(gòu)成的重組DNA克隆群體。人工接頭：指用化學(xué)方法合成一段由10～20個核苷酸組成，并具有一個或數(shù)個限制酶識別位點的平頭末端雙鏈寡核苷酸短片段。感受態(tài)細胞：細胞膜構(gòu)造轉(zhuǎn)變、通透性增加并具有攝取外源DNA力量的細胞。轉(zhuǎn)化：由于外源DNA的進入而使細胞遺傳學(xué)發(fā)生轉(zhuǎn)變的過程。轉(zhuǎn)染：溫存噬菌體、病毒DNA或病毒重組DNA進入宿主細胞的過程稱為轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染是轉(zhuǎn)化的一種特別形式。2簡答題分子雜交的根本原理是什么？DNA-DNADNA-RNARNA-RNA，依據(jù)堿基互補配對原則，借助氫鍵相連所形成雙鏈雜交分子的過程。反義核酸其在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用如何？反義DNA：是人工合成的與待封閉基因的某一區(qū)段互補的正?；蚧瘜W(xué)修飾的DNA片段，用來抑制或封閉這一基因的表達。RNA：RNA的序列互補的RNA片段，通過與靶RNA形成雙鏈復(fù)合物而影響其正常的修飾、翻譯等過程，從而抑制或封閉靶RNA的功能。談?wù)剬虻睦斫饣蚴侵笖y帶有遺傳信息的DNA或RNA序列，是把握性狀的根本遺傳單位，通過指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成來表達自己所攜帶的遺傳信息，從而把握生物個體的性狀表現(xiàn)。原核生物基因組構(gòu)造特點①基因組較小，平均1kb；②幾乎無蛋白質(zhì)與核酸結(jié)合；③有操縱子構(gòu)造；④有單真核生物基因組構(gòu)造特點①基因組浩大；②與蛋白質(zhì)結(jié)合，形成染色體；③有重復(fù)序列；④以單拷貝和多拷貝兩種形式存在；⑤基因不連續(xù)：斷裂基因，基因家族；⑥單順反子。染色體的多級螺旋模型2nmDNA10nm的核小體“串珠”構(gòu)造6個核小體盤繞形成一種中空螺線管，其外徑為30nm。三級構(gòu)造：即超螺線管，由螺線管纖維纏繞在一個由某些非組蛋白構(gòu)成的中心軸骨架上成。四級構(gòu)造：即染色單體，三級包裝后，超螺線管纖維進一步包裝形成染色單體，這是DNA200-240倍質(zhì)粒遺傳學(xué)類型及其特點F質(zhì)粒：為性質(zhì)粒?？蓪⑺拗魅旧w基因轉(zhuǎn)移至另一細胞中R質(zhì)粒：R質(zhì)粒轉(zhuǎn)移至細菌中，該細菌即可產(chǎn)生對抗抗生素的力量Col質(zhì)粒：含有合成大腸桿菌素基因的質(zhì)粒質(zhì)粒噬菌體：質(zhì)粒DNA和噬菌體DNA整合后產(chǎn)生的嵌合體質(zhì)粒DNA的特性①質(zhì)粒的復(fù)制：質(zhì)粒DNA的復(fù)制由細菌染色體的多種酶系統(tǒng)來完成，不同的質(zhì)粒在宿主細胞中承受的酶系統(tǒng)不同，復(fù)制的程度也有很大的差異。3程需要幾代或幾十代或更長的細菌生殖周期，而并不是一個快速的過程。③質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移性：自然條件下，很多質(zhì)粒可以通過細菌結(jié)合作用將質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)移到的宿主細胞中。如F質(zhì)粒、R質(zhì)粒④質(zhì)粒中的選擇性標記：常用的選擇性標記是抗生素標記原核生物和真核生物基因表達調(diào)控策略原核生物的基因調(diào)控：①取決于環(huán)境因素及細胞對環(huán)境條件的適應(yīng)；②在DNA、轉(zhuǎn)錄和翻譯三個水平上進展；③操縱子—原核生物轉(zhuǎn)錄調(diào)控的主要方式真核生物的基因調(diào)控：①比原核生物簡單得多〔多細胞生物〕②基因表達調(diào)控貫穿于DNA到有功能蛋白質(zhì)的全過程③未覺察操縱子的存在乳糖操縱子的構(gòu)造、功能及其調(diào)控機制構(gòu)造：乳糖操縱子由調(diào)整基因IPO3LacZ、lacY、lacA組成。功能：乳糖操縱子是一種典型的可誘導(dǎo)系統(tǒng)，他把握乳糖的分解代謝。乳糖的存在可誘導(dǎo)操縱子的轉(zhuǎn)錄，并合成一系列酶，催化乳糖的分解。就負調(diào)控而已，當細菌缺乏可利用的底物時，就不必合成大量相關(guān)的酶，可通過調(diào)控機制阻斷酶的合成，但同時又做好預(yù)備，一旦有底物存在時就馬上合成這些酶，通過分解代謝滿足自己生長生殖的養(yǎng)分要求。LacORNA聚合酶與LacPRNA聚合酶通過LacO因作為誘導(dǎo)物的乳糖與阻遏蛋白結(jié)合，轉(zhuǎn)變了它的構(gòu)象，在成為失活狀態(tài)后脫離LacORNALacPLacZ5ˊ端，終止于LacA3ˊ端，3個機構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄成單個多順反子mRAN。色氨酸操縱子的構(gòu)造及其調(diào)控機制p24451個把握區(qū)組成機制：色氨酸操縱子受到trp阻遏蛋白的副調(diào)控。當培育基中有豐富的色氨酸存在時，阻遏蛋白能與之結(jié)合形成復(fù)合物trpO結(jié)合，使RNA聚合酶無法與啟動子結(jié)合，從而關(guān)閉操縱子表達。當操縱子中缺乏色氨酸時，沒有輔料去阻遏物去激活阻遏蛋白，因此這種沒有活性的阻遏蛋白不能與trpO結(jié)合，此時RNA聚合酶結(jié)合與啟動子，操縱子表達。真核生物的反式作用因子中常見的DNA結(jié)合域①螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋：兩個α螺旋由中間短肽轉(zhuǎn)折形成120o“轉(zhuǎn)折”。一個α螺旋負責識別DNA的大溝，另一個與DNA主鏈骨架非特異性結(jié)合。②鋅指：一個α螺旋與一個反向平行β片層的基部以鋅原子為中心，通過與一組保守的氨基酸相連接，在蛋白質(zhì)中形成相對獨立的功能域。4③堿性-亮氨酸拉鏈構(gòu)造：C6個氨基酸就有一個Leu，這些Leu在α螺旋的同側(cè)排列。兩個蛋白單體分子通過Leu，就能以疏水鍵結(jié)合成二聚體。該二聚體的另一端富含堿性氨基酸殘基，借其正電荷與DNA雙螺旋鏈上帶負電荷的磷酸基團結(jié)合。④堿性-螺旋-環(huán)-螺旋構(gòu)造：兩個α螺旋由連接環(huán)相連，形成同源或異源二聚體。通過二聚體的氨基端堿性區(qū)與DNA相結(jié)合?；蚬こ痰闹饕獱庌q內(nèi)容？①目的基因的制備和分別；②選擇或改造表達載體，將目的基因插入到表達載體上；③重組DNA導(dǎo)入宿主細胞；④重組體篩選和鑒定；⑤外源基因的在宿主細胞中表達重組體DNA的鑒定和分析方法有哪些？②核酸分子雜交法：菌落原位雜交、DNA、RNA印跡③免疫分析④依據(jù)DNA限制酶的酶譜分析⑤雙脫氧終止法測定基因工程載體必需具備的根本條件有哪些？①有自身的復(fù)制子，能獨立復(fù)制，目的基因插入不影響載體復(fù)制力量；②必需具備適宜的酶切位點，最好含有多種限制酶的單一切點，多個限制酶的酶切位點也稱多克隆位點，在切點內(nèi)可以與外源DNA進展連接重組；③應(yīng)具有遺傳表型或篩選標記，如對抗生素的抗性，噬菌斑的形成等；④載體分子量較小，可以攜帶足夠長的外源DNA；⑤載體DNA中均有一段不影響其復(fù)制和生長的非必需區(qū)，將外源基因插入該非必需區(qū)，而載體本身不受影響。例舉幾種基因工程相關(guān)的工具酶及其工作性質(zhì)。P308限制性核酸內(nèi)切酶〔基因剪刀：能識別雙鏈DNA特異的回文序列，并在此序列內(nèi)特異切割DNA，切割后產(chǎn)生粘性末端或平末端。DNA連接酶〔縫紉針：催化具有5′磷酰基與′羥基末端而且彼此相鄰的兩條鏈形DNA分子之間的斷裂以及參與DNA合成、損傷修復(fù)和遺傳重組中DNA。聚合酶：催化dNTP加到生長中的DNA3’－OH末端，DNA5’→3。DNARNA〔可以在沒有模板鏈存在的狀況下，將核苷酸連接到dsDNAssDNA3’－OH〕和堿性磷酸酶〔催化去除DNA、RNA5-磷酸基團〕核酸酶：除去粘性末端以產(chǎn)生平末端；除去cDNA合成時形成的發(fā)夾構(gòu)造；分析RNA的莖環(huán)構(gòu)造和DNA-RNA分子的雜交狀況5例舉幾種常見的目的基因制備和分別的方法?；瘜W(xué)合成法：依據(jù)某種基因的核苷酸序列，或某種基因產(chǎn)物的氨基酸序列〔可推導(dǎo)出為該多肽編碼的核苷酸短序列DNA合成儀合成目的基因。此法適用于合成分子量較小的目的基因。聚合酶鏈反響(PCR)：DNADNADNA聚合酶隨即以4種dNTP為底物，在引物的引導(dǎo)下合成與模板互補的DNA鏈。重復(fù)此過程，DNA以指數(shù)方式擴增?；蛭膸欤篋NA切割成肯定長度的DNA片段克隆到某種載體上而形成的集合。cDNA文庫：mRNA合成的互補DNA為根底構(gòu)建的。由某一生物的特定器官或特定mRNAcDNADNA克隆群體。大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)點和缺點是什么？如何提高外源基因在大腸桿菌中的表達效率。優(yōu)點:在于能夠在較短時間內(nèi)獲得基因表達產(chǎn)物，而且所需的本錢相比照較低廉。缺點:①通常使用的表達系統(tǒng)無法對表達時間及表達水平進展調(diào)控;②有些基因的持續(xù)表達可能會