基因工程之基因操作的工具酶培訓(xùn)課件

基因工程之基因操作的工具酶培訓(xùn)課件基因工程之基因操作的工具酶培訓(xùn)課件

DNA聚合酶只能在已有的核酸鏈上延伸DNA鏈，而不能從無到有開始DNA鏈的合成。種類：到目前為止，已從E.coli

中發(fā)現(xiàn)了PolI、PolII、PolIII三種DNA聚合酶。其中PolI和PolII的主要功能是參與DNA的修復(fù)過程，PolIII與DNA的復(fù)制有關(guān)。三種聚合酶中，只有PolI同分子克隆關(guān)系密切。DNA聚合酶只能在已有的核酸鏈上延伸DNA鏈，3.3.1大腸桿菌DNA聚合酶I（E.coliDNAPolI）

DNAPolI是從大腸桿菌細(xì)胞中分離得到的，該酶是由單一多肽組成的球蛋白，MW=109000，直徑=65?DNAPolI已得到高度純化，從100kg大腸桿菌中可以分離到約500mg純化的酶蛋白。每個(gè)成熟的大腸桿菌細(xì)胞中約有400個(gè)分子的PolI。3.3.1大腸桿菌DNA聚合酶I（E.coliDNA1.DNAPolI在空間結(jié)構(gòu)上有三個(gè)位點(diǎn)：

(1) DNA模板結(jié)合位點(diǎn)——結(jié)合模板

(2) 核苷酸-磷酸結(jié)合位點(diǎn)——結(jié)合引物

(3) dNTP結(jié)合位點(diǎn)——結(jié)合底物1.DNAPolI在空間結(jié)構(gòu)上有三個(gè)位點(diǎn)：2.DNAPolI是一種多功能酶：(1)5’3’的聚合酶活性催化單核苷酸逐個(gè)地結(jié)合到DNA模板的3’-OH末端，沿著引物的3’-OH方向按模板順序從5’3’延伸。每分子DNApolI每分鐘可以催化約1000個(gè)核苷酸的聚合。2.DNAPolI是一種多功能酶：(2)5’3’的外切酶活性只作用于雙鏈DNA（dsDNA），從5’端切割下一個(gè)個(gè)單核苷酸。(2)5’3’的外切酶活性(3)3’5’的外切酶活性能從游離的3’末端降解單鏈DNA（ssDNA）成為單核苷酸，通常對(duì)雙鏈DNA不作用。(3)3’5’的外切酶活性

在正常聚合條件下，該酶對(duì)dsDNA的3’5’外切酶活性受到5’3’聚合酶活性的抑制。但一旦出現(xiàn)錯(cuò)配堿基時(shí)，聚合反應(yīng)立即停止，由3’5’外切酶迅速除去錯(cuò)誤進(jìn)入的核苷酸，然后聚合反應(yīng)才得以繼續(xù)進(jìn)行下去。所以3’5’核酸外切酶活力被認(rèn)為起著校對(duì)功能，對(duì)DNA復(fù)制的忠實(shí)性極為重要。在正常聚合條件下，該酶對(duì)dsDNA的33.E.coliDNAPolI在基因工程中的用途:(1)可用于填補(bǔ)dsDNA上的缺口，以便有效地進(jìn)行DNA重組

(2)用于DNA序列分析

(3)用于制備DNA探針在DNA分子的單鏈缺口上，DNA聚合酶I的5’3’核酸外切酶活性和聚合作用可以同時(shí)發(fā)生。當(dāng)外切酶活性從缺口的5’一側(cè)移去一個(gè)5’核苷酸后，聚合作用就會(huì)在缺口的3’一側(cè)補(bǔ)上一個(gè)新的核苷酸。隨著反應(yīng)的進(jìn)行，5’一側(cè)的核苷酸不斷地被移去，3’一側(cè)的核苷酸又按序地增補(bǔ)，于是缺口便沿著DNA分子按合成的方向移動(dòng)——缺口平移（NickTranslation）。3.E.coliDNAPolI在基因工程中的用途:

應(yīng)用缺口平移法制備DNA雜交探針，其典型的反應(yīng)體系是：在25

l總體積中含有1g純化的特定的DNA片段，并加入適量的DNaseI、polI、32PdNTP和未標(biāo)記的dNTP。

脫氧核糖核苷酸酶I（DNaseI）是一種內(nèi)切酶，它能夠水解單鏈或雙鏈DNA，形成帶有5’-磷酸末端的單（寡）核苷酸。

應(yīng)用缺口平移法制備DNA雜交探針，其典型的基因工程之基因操作的工具酶培訓(xùn)課件

由于32PdNTP比較昂貴，所以一般都采用低濃度的32PdNTP（2mol/L）和高濃度的未標(biāo)記的dNTP（20mol/L）。而且就大多數(shù)實(shí)驗(yàn)的要求，使用一種32PdNTP就足夠了，其他3種均可采用未標(biāo)記的dNTP，或是用適量的未標(biāo)記的dNTP稀釋每種32PdNTP。改變反應(yīng)體系中DNaseI的數(shù)量，可以控制32PdNTP的參入程度，一般希望有30%左右的32PdNTP參入DNA鏈。由于32PdNTP比較昂貴，所以一般都采3.3.2大腸桿菌DNA聚合酶I的Klenow片段

（E.coliDNAPolIKlenowfragment）用蛋白酶將DNAPolI作有限水解，可得到分子量為75000dal和36000dal的兩個(gè)片段，大片段即稱為Klenow片段，它具有5’3’的聚合酶活性和3’5’的核酸外切酶活性，但失去了全酶的5’3’的核酸外切酶活性。

Klenow聚合酶可以標(biāo)記DNA片段末端（5’延伸末端）。3.3.2大腸桿菌DNA聚合酶I的Klenow片段基因工程之基因操作的工具酶培訓(xùn)課件

對(duì)于限制性核酸內(nèi)切酶EcoRI切割后形成的5’延伸末端可用32PdATP標(biāo)記：而BamHI切割后形成的5’延伸末端可用32PdGTP標(biāo)記：對(duì)于限制性核酸內(nèi)切酶EcoRI切割后形成的53.3.3T4DNA聚合酶是從T4噬菌體感染的大腸桿菌中分離純化的一種特殊的DNA聚合酶。1.T4DNA聚合酶也是一種多功能酶：(1)5’3’的聚合酶活性(2)3’5’的外切酶活性其外切酶活性比E.coliDNAPolI的活性高200倍。(3)取代反應(yīng)活性如果在反應(yīng)混合物中僅存在一種dNTP，則此酶的3’5’外切酶活性將從dsDNA的3’末端降解，直到互補(bǔ)于這個(gè)dNTP的堿基出現(xiàn)為止，然后在這一位置發(fā)生取代反應(yīng)。3.3.3T4DNA聚合酶基因工程之基因操作的工具酶培訓(xùn)課件2.T4DNA聚合酶在基因工程中的應(yīng)用(1)以填充反應(yīng)標(biāo)記帶有5’延伸末端的dsDNA片段(2)將DNA的3’延伸末端切成平末端(3)以取代反應(yīng)標(biāo)記帶有3’延伸末端或平末端的dsDNA片段(4)以部分消化dsDNA法標(biāo)記DNA片段作為雜交探針（鏈特異的探針）2.T4DNA聚合酶在基因工程中的應(yīng)用基因工程之基因操作的工具酶培訓(xùn)課件3.3.4逆轉(zhuǎn)錄酶

是一種有效的轉(zhuǎn)錄RNA成為DNA的酶，又稱RNA依賴的DNA聚合酶，其產(chǎn)物DNA稱cDNA，即互補(bǔ)DNA。1.逆轉(zhuǎn)錄酶也是一個(gè)多功能酶：(1)RNA依賴的DNA聚合酶以RNA鏈為模板，以帶有3’-OH末端的DNA片段為引物，沿5’3’方向合成DNA鏈。幾乎所有真核生物的mRNA分子3’末端都有一段PolyA，故加入寡聚dT后，mRNA就可以成為逆轉(zhuǎn)錄酶很好的模板，由此可合成cDNA。3.3.4逆轉(zhuǎn)錄酶基因工程之基因操作的工具酶培訓(xùn)課件(2)DNA依賴的DNA聚合酶以ssDNA為模板，以帶有3’-OH末端的DNA片段為引物，沿5’3’方向合成DNA鏈?？稍谛潞铣傻腄NA鏈上合成另一條互補(bǔ)DNA。(2)DNA依賴的DNA聚合酶(3)外切RNA酶活性底物是RNA-DNA雜交分子中的RNA鏈，其水解方向有兩種：*從RNA鏈5’末端外切：稱5’3’外切RNA酶*從RNA鏈3’末端外切：稱3’5’外切RNA酶2.逆轉(zhuǎn)錄酶在基因工程中的應(yīng)用：主要用途是轉(zhuǎn)錄真核生物的mRNA成為cDNA，從而制備基因片段。(3)外切RNA酶活性3.商品化的逆轉(zhuǎn)錄酶有兩種：(1)禽成髓細(xì)胞瘤病毒（AMV）逆轉(zhuǎn)錄酶(2)Moloney鼠白血病病毒（Mo-MLV）逆轉(zhuǎn)錄酶

AMV逆轉(zhuǎn)錄酶雖能更有效地拷貝復(fù)雜的mRNA，但它有很強(qiáng)的外切RNA酶活性。而Mo-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶的外切RNA酶活性較弱，更有利于制備全長的cDNA。兩種逆轉(zhuǎn)錄酶均無3’5’外切DNA酶活性，故不具備校對(duì)功能，在高濃度dNTP和Mn2+存在下，容易出現(xiàn)核苷酸錯(cuò)誤摻入。3.商品化的逆轉(zhuǎn)錄酶有兩種：3.4DNA和RNA的修飾酶3.4.1核酸酶SI1.作用特點(diǎn)：此酶是從米曲霉（Aspergillusoryzae）中提取的，可降解ssDNA或ssRNA，又稱單鏈特異性酶，其降解產(chǎn)物是5’-磷酸末端的單或寡核苷酸片段。

3.4DNA和RNA的修飾酶

核酸酶SI對(duì)DNA底物的活性比對(duì)RNA強(qiáng)。高濃度的核酸酶SI可從缺口（nick）或小裂縫（gap）處降解dsDNA。

2.作用條件：需要Zn2+作為輔助因子，最適pH是4.5，這是與基因工程的其它工具酶不同的兩個(gè)特點(diǎn)。3.在基因工程中的應(yīng)用：由于核酸酶SI能從DNA片段中切除單鏈尾巴，因而在質(zhì)粒的重建和DNA重組中被廣泛使用。切除單鏈粘性末端，產(chǎn)生平末端，再用T4連接酶連接。切除cDNA的發(fā)夾結(jié)構(gòu)。核酸酶SI對(duì)DNA底物的活性比對(duì)RNA3.4.2末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶1.作用特點(diǎn)：此酶是從小牛胸腺中提取的，可催化單核苷酸轉(zhuǎn)移到另一個(gè)DNA分子的3’-OH末端上，不需要模板，其引物是帶3’-OH末端的ssDNA（Mg2+為輔因子）。平末端的dsDNA只有CO2+存在時(shí)才能作引物。2.在基因工程中的應(yīng)用：在連接平末端DNA片段時(shí)加上互補(bǔ)的同源多聚物（同聚物加尾法）。3.4.2末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶基因工程之基因操作的工具酶培訓(xùn)課件3.4.3外核酸酶III1.作用特點(diǎn)：此酶是從E.coli中分離得到的，是一種從dsDNA的3’-OH末端降解產(chǎn)生5’單核苷酸的外切酶。

2.在基因工程中的應(yīng)用：產(chǎn)生具有5’延伸末端的DNA片段制備特異的DNA探針3.4.3外核酸酶III基因工程之基因操作的工具酶培訓(xùn)課件3.4.4外核酸酶Bal311.作用特點(diǎn)：此酶是從乳白短桿菌（Brevibaceriumaldidum）中提取的。能以漸進(jìn)的方式從線型DNA分子的3’，5’兩端同時(shí)降解，產(chǎn)物是單核苷酸或寡核苷酸片段。底物可以是帶延伸末端或是平末端的dsDNA，對(duì)3’、5’兩端的降解速度相同。

2.作用條件：降解時(shí)需要Ca2+作輔助因子，以EDTA作螯合劑，可使Bal31失活。3.4.4外核酸酶Bal313.在基因工程中的應(yīng)用：可用于組建DNA的物理圖譜，以及造成克隆DNA分子的末端缺失。3.在基因工程中的應(yīng)用：3.4.5T4多核苷酸激酶1.作用特點(diǎn)：此酶是從噬菌體T4感染的E.coli中分離的。能催化ATP的γ-磷酸轉(zhuǎn)移到DNA或RNA的5’-OH末端上。3.4.5T4多核苷酸激酶2.在基因工程中的應(yīng)用：可用于缺乏5’-磷酸的待連接DNA片段的5’端磷酸化：反轉(zhuǎn)錄mRNA生成的cDNA、人工合成的DNA片段及PCR擴(kuò)增得到的DNA都缺少5’-磷酸基，在與克隆載體連接之前，需用T4多核苷酸激酶將DNA的5’-磷酸化。2.在基因工程中的應(yīng)用：3.4.6堿性磷酸化酶（堿性磷酸酯酶）1.作用特點(diǎn)：從細(xì)菌中分離的堿性磷酸化酶簡(jiǎn)稱BAP，從小牛腸中分離的簡(jiǎn)稱CAP。它能特異性地切去DNA或RNA的5’-磷酸。底物可以是ssDNA、dsDNA或RNA，也可以是核糖或脫氧核糖核苷三磷酸。

2.在基因工程中的應(yīng)用：在用32P標(biāo)記DNA的5’末端之前，除去磷酸。在DNA重組技術(shù)中，除去DNA片段的5’-磷酸，阻止質(zhì)粒自身環(huán)化，提高轉(zhuǎn)化效率。3.4.6堿性磷酸化酶（堿性磷酸酯酶）基因工程之基因操作的工具酶培訓(xùn)課件基因工程之基因操作的工具酶培訓(xùn)課件基因工程之基因操作的工具酶培訓(xùn)課件

DNA聚合酶只能在已有的核酸鏈上延伸DNA鏈，而不能從無到有開始DNA鏈的合成。種類：到目前為止，已從E.coli

中發(fā)現(xiàn)了PolI、PolII、PolIII三種DNA聚合酶。其中PolI和PolII的主要功能是參與DNA的修復(fù)過程，PolIII與DNA的復(fù)制有關(guān)。三種聚合酶中，只有PolI同分子克隆關(guān)系密切。DNA聚合酶只能在已有的核酸鏈上延伸DNA鏈，3.3.1大腸桿菌DNA聚合酶I（E.coliDNAPolI）

DNAPolI是從大腸桿菌細(xì)胞中分離得到的，該酶是由單一多肽組成的球蛋白，MW=109000，直徑=65?DNAPolI已得到高度純化，從100kg大腸桿菌中可以分離到約500mg純化的酶蛋白。每個(gè)成熟的大腸桿菌細(xì)胞中約有400個(gè)分子的PolI。3.3.1大腸桿菌DNA聚合酶I（E.coliDNA1.DNAPolI在空間結(jié)構(gòu)上有三個(gè)位點(diǎn)：

(1) DNA模板結(jié)合位點(diǎn)——結(jié)合模板

(2) 核苷酸-磷酸結(jié)合位點(diǎn)——結(jié)合引物

(3) dNTP結(jié)合位點(diǎn)——結(jié)合底物1.DNAPolI在空間結(jié)構(gòu)上有三個(gè)位點(diǎn)：2.DNAPolI是一種多功能酶：(1)5’3’的聚合酶活性催化單核苷酸逐個(gè)地結(jié)合到DNA模板的3’-OH末端，沿著引物的3’-OH方向按模板順序從5’3’延伸。每分子DNApolI每分鐘可以催化約1000個(gè)核苷酸的聚合。2.DNAPolI是一種多功能酶：(2)5’3’的外切酶活性只作用于雙鏈DNA（dsDNA），從5’端切割下一個(gè)個(gè)單核苷酸。(2)5’3’的外切酶活性(3)3’5’的外切酶活性能從游離的3’末端降解單鏈DNA（ssDNA）成為單核苷酸，通常對(duì)雙鏈DNA不作用。(3)3’5’的外切酶活性

在正常聚合條件下，該酶對(duì)dsDNA的3’5’外切酶活性受到5’3’聚合酶活性的抑制。但一旦出現(xiàn)錯(cuò)配堿基時(shí)，聚合反應(yīng)立即停止，由3’5’外切酶迅速除去錯(cuò)誤進(jìn)入的核苷酸，然后聚合反應(yīng)才得以繼續(xù)進(jìn)行下去。所以3’5’核酸外切酶活力被認(rèn)為起著校對(duì)功能，對(duì)DNA復(fù)制的忠實(shí)性極為重要。在正常聚合條件下，該酶對(duì)dsDNA的33.E.coliDNAPolI在基因工程中的用途:(1)可用于填補(bǔ)dsDNA上的缺口，以便有效地進(jìn)行DNA重組

(2)用于DNA序列分析

(3)用于制備DNA探針在DNA分子的單鏈缺口上，DNA聚合酶I的5’3’核酸外切酶活性和聚合作用可以同時(shí)發(fā)生。當(dāng)外切酶活性從缺口的5’一側(cè)移去一個(gè)5’核苷酸后，聚合作用就會(huì)在缺口的3’一側(cè)補(bǔ)上一個(gè)新的核苷酸。隨著反應(yīng)的進(jìn)行，5’一側(cè)的核苷酸不斷地被移去，3’一側(cè)的核苷酸又按序地增補(bǔ)，于是缺口便沿著DNA分子按合成的方向移動(dòng)——缺口平移（NickTranslation）。3.E.coliDNAPolI在基因工程中的用途:

應(yīng)用缺口平移法制備DNA雜交探針，其典型的反應(yīng)體系是：在25

l總體積中含有1g純化的特定的DNA片段，并加入適量的DNaseI、polI、32PdNTP和未標(biāo)記的dNTP。

脫氧核糖核苷酸酶I（DNaseI）是一種內(nèi)切酶，它能夠水解單鏈或雙鏈DNA，形成帶有5’-磷酸末端的單（寡）核苷酸。

應(yīng)用缺口平移法制備DNA雜交探針，其典型的基因工程之基因操作的工具酶培訓(xùn)課件

由于32PdNTP比較昂貴，所以一般都采用低濃度的32PdNTP（2mol/L）和高濃度的未標(biāo)記的dNTP（20mol/L）。而且就大多數(shù)實(shí)驗(yàn)的要求，使用一種32PdNTP就足夠了，其他3種均可采用未標(biāo)記的dNTP，或是用適量的未標(biāo)記的dNTP稀釋每種32PdNTP。改變反應(yīng)體系中DNaseI的數(shù)量，可以控制32PdNTP的參入程度，一般希望有30%左右的32PdNTP參入DNA鏈。由于32PdNTP比較昂貴，所以一般都采3.3.2大腸桿菌DNA聚合酶I的Klenow片段

（E.coliDNAPolIKlenowfragment）用蛋白酶將DNAPolI作有限水解，可得到分子量為75000dal和36000dal的兩個(gè)片段，大片段即稱為Klenow片段，它具有5’3’的聚合酶活性和3’5’的核酸外切酶活性，但失去了全酶的5’3’的核酸外切酶活性。

Klenow聚合酶可以標(biāo)記DNA片段末端（5’延伸末端）。3.3.2大腸桿菌DNA聚合酶I的Klenow片段基因工程之基因操作的工具酶培訓(xùn)課件

對(duì)于限制性核酸內(nèi)切酶EcoRI切割后形成的5’延伸末端可用32PdATP標(biāo)記：而BamHI切割后形成的5’延伸末端可用32PdGTP標(biāo)記：對(duì)于限制性核酸內(nèi)切酶EcoRI切割后形成的53.3.3T4DNA聚合酶是從T4噬菌體感染的大腸桿菌中分離純化的一種特殊的DNA聚合酶。1.T4DNA聚合酶也是一種多功能酶：(1)5’3’的聚合酶活性(2)3’5’的外切酶活性其外切酶活性比E.coliDNAPolI的活性高200倍。(3)取代反應(yīng)活性如果在反應(yīng)混合物中僅存在一種dNTP，則此酶的3’5’外切酶活性將從dsDNA的3’末端降解，直到互補(bǔ)于這個(gè)dNTP的堿基出現(xiàn)為止，然后在這一位置發(fā)生取代反應(yīng)。3.3.3T4DNA聚合酶基因工程之基因操作的工具酶培訓(xùn)課件2.T4DNA聚合酶在基因工程中的應(yīng)用(1)以填充反應(yīng)標(biāo)記帶有5’延伸末端的dsDNA片段(2)將DNA的3’延伸末端切成平末端(3)以取代反應(yīng)標(biāo)記帶有3’延伸末端或平末端的dsDNA片段(4)以部分消化dsDNA法標(biāo)記DNA片段作為雜交探針（鏈特異的探針）2.T4DNA聚合酶在基因工程中的應(yīng)用基因工程之基因操作的工具酶培訓(xùn)課件3.3.4逆轉(zhuǎn)錄酶

是一種有效的轉(zhuǎn)錄RNA成為DNA的酶，又稱RNA依賴的DNA聚合酶，其產(chǎn)物DNA稱cDNA，即互補(bǔ)DNA。1.逆轉(zhuǎn)錄酶也是一個(gè)多功能酶：(1)RNA依賴的DNA聚合酶以RNA鏈為模板，以帶有3’-OH末端的DNA片段為引物，沿5’3’方向合成DNA鏈。幾乎所有真核生物的mRNA分子3’末端都有一段PolyA，故加入寡聚dT后，mRNA就可以成為逆轉(zhuǎn)錄酶很好的模板，由此可合成cDNA。3.3.4逆轉(zhuǎn)錄酶基因工程之基因操作的工具酶培訓(xùn)課件(2)DNA依賴的DNA聚合酶以ssDNA為模板，以帶有3’-OH末端的DNA片段為引物，沿5’3’方向合成DNA鏈?？稍谛潞铣傻腄NA鏈上合成另一條互補(bǔ)DNA。(2)DNA依賴的DNA聚合酶(3)外切RNA酶活性底物是RNA-DNA雜交分子中的RNA鏈，其水解方向有兩種：*從RNA鏈5’末端外切：稱5’3’外切RNA酶*從RNA鏈3’末端外切：稱3’5’外切RNA酶2.逆轉(zhuǎn)錄酶在基因工程中的應(yīng)用：主要用途是轉(zhuǎn)錄真核生物的mRNA成為cDNA，從而制備基因片段。(3)外切RNA酶活性3.商品化的逆轉(zhuǎn)錄酶有兩種：(1)禽成髓細(xì)胞瘤病毒（AMV）逆轉(zhuǎn)錄酶(2)Moloney鼠白血病病毒（Mo-MLV）逆轉(zhuǎn)錄酶

AMV逆轉(zhuǎn)錄酶雖能更有效地拷貝復(fù)雜的mRNA，但它有很強(qiáng)的外切RNA酶活性。而Mo-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶的外切RNA酶活性較弱，更有利于制備全長的cDNA。兩種逆轉(zhuǎn)錄酶均無3’5’外切DNA酶活性，故不具備校對(duì)功能，在高濃度dNTP和Mn2+存在下，容易出現(xiàn)核苷酸錯(cuò)誤摻入。3.商品化的逆轉(zhuǎn)錄酶有兩種：3.4DNA和RNA的修飾酶3.4.1核酸酶SI1.作用特點(diǎn)：此酶是從米曲霉（Aspergillusoryzae）中提取的，可降解ssDNA或ssRNA，又稱單鏈特異性酶，其降解產(chǎn)物是5’-磷酸末端的單或寡核苷酸片段。

3.4DNA和RNA的修飾酶

核酸酶SI對(duì)DNA底物的活性比對(duì)RNA強(qiáng)。高濃度的核酸酶SI可從缺口（nick）或小裂縫（gap）處降解dsDNA。

2.作用條件：需要Zn2+作為輔助因子，最適pH是4.5，這是與基因工程的其它工具酶不同的兩個(gè)特點(diǎn)。3.在基因工程中的應(yīng)用：由于核酸酶SI能從DNA片段中切除單鏈尾巴，因而在質(zhì)粒的重建和DNA重組中被廣泛使用。切除單鏈粘性末端，產(chǎn)生平末端，再用T4連接酶連接。切除cDNA的發(fā)夾結(jié)構(gòu)。核酸酶SI對(duì)DNA底物的活性比對(duì)RNA3.4.2末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶1.作用特點(diǎn)：此酶是從小牛胸腺中提取的，可催化單核苷酸轉(zhuǎn)移到另一個(gè)DNA分子的3’-OH末端上，不需要模板，其引物是帶3’-OH末端的ssDNA（Mg2+為輔因子）。平末端的dsDNA只有CO2+存在時(shí)才能