MIC實(shí)驗(yàn)教案課件

幾種抗菌藥物的最小抑菌濃度的測(cè)定－－MIC試驗(yàn)

（微量肉湯二倍稀釋法）一、目的1、掌握微量肉湯二倍稀釋法測(cè)定抗菌藥物MIC的基本步驟，能準(zhǔn)確測(cè)出各種抗菌藥物的MIC值，了解單藥的抗菌活性2、為后面的棋盤(pán)法設(shè)計(jì)棋盤(pán)做準(zhǔn)備，求取棋盤(pán)的中心濃度二、意義1、通過(guò)對(duì)MIC值的測(cè)定了解藥物的體外抗菌活性2、為臨床選藥提供依據(jù)3、耐藥檢測(cè)四、藥品硫酸慶大霉素（批號(hào)：含量：廠家：）阿莫西林（批號(hào)：含量：廠家：）硫酸四環(huán)素（批號(hào)：含量：廠家：）恩諾沙星（批號(hào)：含量：廠家：）阿米卡星（批號(hào)：含量：廠家：）氟苯尼考（批號(hào)：含量：廠家：）五、培養(yǎng)基MH肉湯培養(yǎng)基、用去離子水配制5g/L顯色劑TTC（氯化三苯四氮唑）六、器材96孔細(xì)胞培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、移液槍、1ml和200μl槍頭、EP管、錐形瓶、試管架、酒精燈、酒精棉球等分析天平、超凈工作臺(tái)、37度恒溫培養(yǎng)箱、烘箱七、方法步驟1、藥液的配制及除菌配制根據(jù)藥物的效價(jià)或是含量及所需要的體積，計(jì)算出藥物所需的量，并準(zhǔn)確稱(chēng)取所需的各種抗菌藥物，用適宜的溶劑及稀釋及稀釋劑將藥物稀釋至所需的濃度。除菌抗菌素藥物通過(guò)過(guò)濾的方式過(guò)濾；化學(xué)合成類(lèi)藥物通過(guò)過(guò)濾或是高壓滅菌的方式進(jìn)行除菌。3、MIC的測(cè)定（微量二倍稀釋法）第一步：在96孔板每個(gè)孔加入含TTC的空白肉湯100μl。

圖表第三步：再在每一孔中加入稀釋好的菌液100μl,這樣就形成測(cè)定一個(gè)藥物MIC值的三次重復(fù)（A/B/C三排樣品）。此時(shí)每孔藥物濃度即最終藥物濃度從左到右依次為：128，64，32，16，8，4，2，1，0.5，0.25，0.125，0.06(單位:IU/ml或μg/ml)；

圖表

123456789101112A①肉湯100ul②藥A100ul③菌液100ul100ul100ul100ul100ul100ul100ul100ul100ul100ul100ul100ulB同A排C同A排D①肉湯100ul②藥B100ul③菌液100ulE同D排F同D排G陰性對(duì)照H陽(yáng)性對(duì)照藥物濃度12864321684210.50.250.1250.0625

第一步第二步第三步第四步八、觀察及判斷結(jié)果

1、若有菌生長(zhǎng)TTC會(huì)顯示紅色；若沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng)TTC則不變色。2、MIC值的判定：96孔板上橫排中未變紅色的最后一孔所對(duì)應(yīng)的濃度便為該藥的MIC值。3、觀察所做的陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照結(jié)果4、記錄結(jié)果并將每種藥物的MIC值報(bào)告老師九、注意事項(xiàng)：1、無(wú)菌操作①除移液槍和96孔板外其他所有用具都需經(jīng)過(guò)高壓滅菌處理②超凈臺(tái)使用前后都需打開(kāi)紫外燈進(jìn)行消毒；不能拿酒精面球球擦擋板！③操作前洗手，用酒精棉球擦手④每次槍頭過(guò)瓶口，瓶口都要經(jīng)火焰燒過(guò)；移液槍和槍頭不能在究竟燈上烤?、莶僮鬟^(guò)程中加液盡可能不將96孔板蓋完全打開(kāi)2、其他注意事項(xiàng)：（1）培養(yǎng)板上用標(biāo)簽紙做好標(biāo)記，寫(xiě)明組別，做什么菌、什么藥，以及各組對(duì)照。（2）每藥做三個(gè)重復(fù)，每個(gè)板做一個(gè)陰性對(duì)照和一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照。（3）廢液缸，超凈臺(tái)內(nèi)用過(guò)的不需要的東西都必須放到廢液缸內(nèi)，不能在臺(tái)面亂扔。（4）實(shí)驗(yàn)完后要收拾好臺(tái)面，所有公用設(shè)施恢復(fù)原位。十、記錄結(jié)果的格式例如：××菌對(duì)××藥的MIC值（μg/ml或是UI/ml）受試菌株藥物（UI/ml）四環(huán)素氟苯尼考金黃色葡萄球菌大腸桿菌沙門(mén)氏菌十二、分組整個(gè)班分為6個(gè)組，每組11人。1、2組做8種藥對(duì)大腸桿菌的最小抑菌濃度3、4組做8種藥對(duì)沙門(mén)氏菌的最小抑菌濃度5、6組做8種藥對(duì)金色葡萄球菌的最小抑菌濃度1、2、3組在今天上午完成實(shí)驗(yàn)，4、5、6組在下午過(guò)來(lái)完成實(shí)驗(yàn)。每個(gè)大組要做4塊96孔板，由4個(gè)同學(xué)來(lái)完成！每組的物品清單96孔細(xì)胞培養(yǎng)