微生物學檢驗重點知識總結

微生物學檢驗緒論一、微生物的概念與特點微生物（microorganism）助于光學顯微鏡或電子顯微鏡放大數(shù)百倍至數(shù)萬倍才能觀察到的微小生物的總稱。微生物的特點微生物類型

個體微小，結構簡單繁殖快，代謝強根據(jù)微生物大小、結構和組成不同分為三類型病原微生物的定義病原微生物：是指能引起動物、植物或人類產(chǎn)生疾病的微生物。醫(yī)學微生物學的發(fā)展簡史。.微生物的發(fā)現(xiàn)與研究（1）列文虎克發(fā)明顯微鏡，最早觀察到微生物；微生物學研究的創(chuàng)始人：巴斯德、科赫、李斯特第一章細菌的基本性狀第一節(jié)細菌的形態(tài)與結構主要區(qū)別（一）細胞壁化學組成與結構，革蘭染色共有組分：肽聚糖特殊組分：G+菌、G-菌不同革蘭陽性菌細胞壁特殊組分：磷壁酸革蘭陰性菌細胞壁特殊組分：外膜1微生物學檢驗革蘭陰性菌細胞壁肽聚糖:聚糖骨架、四肽側(cè)鏈細胞壁的功能：維持細菌固有形態(tài)和抵抗低滲作用（2）（3）（4）（5）（6）與細菌藥物敏感性有關。G+菌與G-菌細胞壁結構比較不含膽固醇。中介體。莢膜：功能：有抗吞噬和抵抗殺菌物質(zhì)的殺菌作用，增強細菌的侵襲力，構成細菌致病力的重要因素之一。②具有免疫原性。③鑒別細菌和血清學分型鞭毛：功能：細菌的運動器官菌毛普通菌毛：具有黏附性，與細菌致病性有關。性菌毛：與細菌的遺傳變異相關芽胞結構特點、意義、與消毒滅菌的關系；細菌L型的形態(tài)特征、檢驗要點。芽胞：某些細菌（主要為革蘭陽性桿菌）在一定條件下，細胞質(zhì)濃縮脫水而形成一個折光性很強，具有多層膜狀結構、通透性很低的圓形或卵圓形的小體。L型細菌：細胞壁缺陷的細菌。常發(fā)生在作用于細胞壁的抗菌藥物治療過程中。根據(jù)細胞壁缺陷程度分：原生質(zhì)體（完全失去細胞壁，見于G+菌，僅在高滲環(huán)境中存活)原生質(zhì)球（細胞壁部分缺損，見于G-菌，在高滲或非高滲環(huán)境中均能存活）G+菌和G-細菌的生長條件,生長周期及各期的特點;IMViC試驗的組成及機制;細菌分解及合成代謝產(chǎn)物的種類及意義。細菌的生長繁殖2微生物學檢驗（一）細菌生長繁殖的條件充足的營養(yǎng)物質(zhì)包括：水、碳源、氮源、生長因子等。適宜的酸堿度 多為pH7.2～7.6。合適的溫度 多數(shù)病原菌為35℃～37℃。必要的氣體環(huán)境 主要是O2和CO。22按細菌對O的需要與否，將細菌分為：2細菌生長繁殖的規(guī)律細菌的繁殖方式：無性二分裂。細菌的繁殖速度：大多數(shù)細菌20～30分鐘即可分裂一次。細菌的營養(yǎng)類型和營養(yǎng)機制，自氧菌與異氧菌的概念。細菌的生長曲線及其特點。（一）能量代謝細菌獲取能量的途徑——生物氧化。細菌能量代謝的主要類型：（二）分解代謝檢測細菌糖分解產(chǎn)物的常用試驗：糖發(fā)酵試驗、甲基紅試驗、VP試驗等。檢測細菌蛋白質(zhì)和氨基酸分解產(chǎn)物的常用試驗：吲哚（靛基質(zhì)）酸脫氨酶試驗等。1正常菌群的概念和生理功能；條件致病菌的概念3微生物學檢驗正常菌群的生理功能；條件致病菌的概念二、細菌的控制（一）基本概念：消毒殺死物體或介質(zhì)中病原微生物的方法。滅菌殺滅物體或介質(zhì)中所有微生物的方法。無菌無活菌存在的狀態(tài)。無菌操作防止微生物進入機體或物體的操作技術。防腐防止或抑制細菌生長繁殖的方法。第二章真菌的基本性狀真菌的概念真菌的分類真菌孢子與細菌芽胞的區(qū)別4微生物學檢驗第三章病毒的基本性狀病毒的大小病毒的復制周期第四章微生物與感染細菌致病三大因素細菌內(nèi)外毒素的區(qū)別毒血癥、菌血癥、敗血癥、膿毒血癥的概念全身感染的類型第二篇微生物檢驗的基本技術第五章細菌的檢驗技術第一節(jié)細菌形態(tài)檢驗技術細菌染色的一般程序染色標本檢查的一般程序革蘭氏染色法、抗酸染色法的原理、方法。2.革蘭染色法【方法】第二節(jié)細菌的接種與培養(yǎng)技術調(diào)配調(diào)Ph———細菌在各種培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象及觀察要點。培養(yǎng)基的概念培養(yǎng)基的分類第三節(jié)細菌的生化鑒定技術糖(醇,苷O/F試驗、MRVPC試驗、氧化酶、觸酶、血漿凝固酶氫氧化鉀拉絲試驗及KIATSI的試驗原理、操作要領、觀察結果要點及其應用。一、碳水化合物的代謝試驗1、糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗原理：多糖→單糖→丙酮酸→酸性產(chǎn)物(或產(chǎn)氣)→pH↓→呈酸性變色(或出現(xiàn)氣泡2、O/F試驗原理：根據(jù)細菌在分解葡萄糖的代謝過程中對氧分子需求的不同，將細菌分為氧化、發(fā)酵和5微生物學檢驗微生物學檢驗PAGEPAGE8產(chǎn)堿型三類3、甲基紅試驗原理：細菌發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)生丙酮酸，進一步分解生成大量混合酸，使培養(yǎng)pH下降至4.4以下，加入甲基紅后，呈現(xiàn)紅色反應。為甲基紅試驗陽性。4、V-P試驗V-P5、β-半乳糖苷酶試驗（ONPG）(ONPG)鄰硝基苯酚，該試驗也稱為ONPG試驗。6、七葉苷水解試驗原理：某些細菌能分解七葉苷產(chǎn)生葡萄糖與七葉素，七葉素與培養(yǎng)基中的Fe2+結合后，形成黑色的化合物，使培養(yǎng)基變黑。二、蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝2、硫化氫試驗成黑色化合物。3、尿素酶試驗原理：細菌產(chǎn)生脲酶，水解尿素生成氨和二氧化碳，培養(yǎng)基呈堿性反應4、苯丙氨酸脫氨酶試驗形成綠色化合物三、碳源利用試驗枸櫞酸鹽利用試驗鹽產(chǎn)生碳酸鹽，使培養(yǎng)基呈堿性反應四、酶類試驗1、氧化酶（細胞色素氧化酶）試驗原理：某些細菌具有氧化酶（細胞色素氧化酶化生成紅色的醌類化合物2、觸酶試驗（過氧化氫酶）氣泡。3、凝固酶試驗（試管法）原理：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生凝固酶，使血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄缘睦w維蛋白。4、凝固酶試驗（玻片法）原理：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生凝固酶，使血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄缘睦w維蛋白5、硝酸鹽還原試驗N-α-萘胺偶氮苯磺酸紅色化合物第六章真菌檢驗技術真菌感染性疾病的微生物學檢查原則第七章病毒檢驗技術病毒標本的采集和運送注意事項；第八章細菌對抗菌藥物敏感試驗藥物敏感試驗的基本概念、常用方法抗菌藥物敏感試驗方法紙片擴散法稀釋法E-test法（K-B告。第三篇常見微生物鑒定技術第十章需氧和兼性厭氧球菌病原性球菌標本采集種類、檢驗鑒定程序、鑒定要點、檢驗鑒定依據(jù)及報告要點。第十一章革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌第一節(jié)腸桿菌科概述腸桿菌科細菌：1.G-桿菌，多數(shù)有鞭毛、菌毛發(fā)酵葡萄糖，兼性厭氧氧化酶陰性還原硝酸鹽為亞硝酸鹽5.觸酶（＋）腸道選擇性培養(yǎng)基：麥康凱瓊脂、伊紅美藍瓊脂、SS瓊脂等O抗原（菌體抗原，K抗原（莢膜抗原，H抗原（鞭毛抗原）腸桿菌科鑒定依據(jù)：1.革蘭染色觸媒、氧化酶、硝酸鹽還原KIA、MIU、IMViC其他生化反應血清玻片凝集（鑒定到種、型或血清型）IMViC試驗：吲哚、甲基紅、V（、枸櫞酸鹽利用）四種試驗，常用于鑒定腸道桿菌。二、埃希菌屬形態(tài)染色：1.短桿菌革蘭染色陰性有鞭毛有菌毛培養(yǎng)特性：符合腸桿菌特點EMB——紫黑色有金屬光澤乳糖發(fā)酵菌落S-S——桃紅色乳糖發(fā)酵菌落生化反應：IMViC（++--）大腸桿菌KIA：AA＋－血清型表示法：O：K：HETEC腸毒素：耐熱腸毒素（ST）不耐熱腸毒素L，6oC30min腸產(chǎn)毒性大腸埃希菌ETEC腸致病性大腸埃希菌腸侵襲性大腸埃希菌腸出血性大腸埃希菌腸凝聚性大腸埃希菌EIEC毒力測定試驗：豚鼠眼結膜試驗ml1000mlml個。三、沙門菌屬對人類有致病性：腸熱癥；食物中毒；敗血癥形態(tài)染色：G-桿菌；周身鞭毛培養(yǎng)和生化反應：不分解乳糖分解葡萄糖；分解蛋白質(zhì)，產(chǎn)生HS2傷寒沙門菌菌落特征EM、MAC無色透明菌落傷寒沙門菌菌落特征SS：KIA：KA－＋標本采?。旱?-2W，血、骨髓；第2-3W，糞便、尿；全程取骨髓肥達反應:用已知傷寒沙門菌O、H和甲型副傷寒沙門菌和乙型副傷寒沙門菌H抗原與病人血清做定量凝集試驗，用以輔助診斷腸熱癥。TO≥1：80，TH≥1：160；PA、PB均≥1：80才有意義。動態(tài)觀察：雙份血清抗體四倍升高有診斷意義四、志賀菌屬培養(yǎng)特性：腸道鑒別培養(yǎng)基上的無色透明、乳糖不發(fā)酵菌落抗原分類：根據(jù)O抗原分4群，40余型，我國常見BA群——痢疾志賀菌 B群——福氏志賀菌C群——鮑氏志賀菌 D群——宋氏志賀菌微生物學檢驗培養(yǎng)和生化反應：菌落特征EMB、MAC：無色透明菌落KIA：KA－－MIU：－－－外毒素：A群（Ⅰ、Ⅱ型）產(chǎn)生志賀毒素（ST）有3種生物活性1.腸毒素：類似ETEC毒素、霍亂腸毒素作用——水樣瀉細胞毒性：對人肝細胞、腸黏膜細胞有毒性，引起變性壞死神經(jīng)毒性：損傷動物神經(jīng)系統(tǒng)（麻痹、死亡快速診斷：熒光菌球試驗；協(xié)同凝集試驗六、變形桿菌屬形態(tài)染色：有周鞭毛培養(yǎng)特性：擴散生長，有遷徙生長現(xiàn)象。在培養(yǎng)基中（含5％瓊脂）加入0.1成單個菌落；腸道選擇性培養(yǎng)基上形成無色透明菌落變形桿菌KIA：KA++MIU：++/-+八、耶爾森菌屬歷史：G球桿菌，兩極濃染培養(yǎng)特性：普通培養(yǎng)基，生長緩慢，24-48h，R型“破草帽”狀菌落菌落特征EMB、MAC：甲類烈性傳染?。菏笠撸ê谒啦。┏Ｒ娕R床類型：腺鼠疫、敗血型鼠疫、肺鼠疫臨床標本（淋巴結穿刺液、血液或痰標本；非臨床標本（標本應嚴格消毒體表，再進行采集）第二節(jié)弧菌科一群菌體短小、彎曲成弧形或直桿狀的革蘭陰性細菌；具有一端單一鞭毛、運動迅速；弧菌科細菌廣泛分布于自然界，以水中最為多見弧菌屬（一）霍亂弧菌9微生物學檢驗微生物學檢驗PAGEPAGE16印度恒河三角洲O1群，古典生物型；印尼蘇拉威西島O1生物型；孟加拉灣O139群）已發(fā)生七次世界性的霍亂大流行：均由霍亂弧菌的O1群引起，前六次為霍亂弧菌的古典生物型，第七次為埃爾托生物型中，可呈頭尾相接的“魚群”樣排列；菌體一端有鞭毛，懸滴觀察時呈“穿梭”樣運動培養(yǎng)特性：營養(yǎng)要求不高，故用Ph8.4-9.2堿性培養(yǎng)基；分離（選擇）能在無鹽培養(yǎng)基中生長（區(qū)別其它弧菌；在pH8.5的堿性胨水中經(jīng)356h菌膜抵抗力：較弱；水源性傳播，水性爆發(fā)；怕酸，正常胃酸霍亂腸毒素CT：最強烈的致瀉毒素吐瀉期：劇烈吐瀉、米泔樣免疫力：病人愈后可獲得牢固免疫O1群霍亂弧菌的O抗原：由A、B、C三種抗原因子組成；通過不同組合可形成三個型別：由AB組成小川型、AC組成稻葉型、ABC組成彥島型常用的選擇性培養(yǎng)基：1.硫代硫酸鹽-枸櫞酸鹽-膽鹽-蔗糖(TCBS)瓊脂平板：霍亂弧菌發(fā)酵蔗糖產(chǎn)酸，菌落呈黃色2.4號瓊脂、慶大霉素瓊脂：生長并將培養(yǎng)基中的碲離子還原成元素碲,形成灰褐色菌落中心能在無鹽培養(yǎng)基上生長古典生物型和埃爾托生物型的區(qū)別試驗：羊紅細胞溶血；雞紅細胞凝集；V-P試驗；多粘菌素B敏感試驗；Ⅳ組噬菌體裂解；Ⅴ組噬菌體裂解1滴不含防腐劑的霍亂多價診斷血清(效價≥1：64集，則為制動試驗陽性快速診斷：將標本接種于含有霍亂弧菌熒光抗體的堿性蛋白胨水中，經(jīng)37℃4～6h，如有霍亂弧菌，在熒光顯微鏡下可見發(fā)熒光的菌球。本法適用于做大量標本的初篩SPA協(xié)同凝集試驗：以霍亂弧菌IgG型抗體與SPA陽性葡萄球菌結合作為試劑，與米泔水樣便或增菌液作玻片凝集，立即出現(xiàn)明顯凝集者（＋＋＋）為陽性將0.％去氧膽酸鈉水溶液于霍亂弧菌混勻制成濃厚菌液1min內(nèi)懸液由混變清，并變得粘稠，以接種環(huán)挑取時可以拉出絲來（二）副溶血性弧菌具有嗜鹽性形態(tài)：革蘭陰性桿菌，有鞭毛（極單毛）培養(yǎng)特性：在無鹽培養(yǎng)基上不能生長，最適合生長的氯化鈉濃度為3.5%，超過8%不能生長TCBS瓊脂平板:蔗糖不發(fā)酵而呈藍綠色菌落第三節(jié)非發(fā)酵革蘭陰性桿菌非發(fā)酵革蘭陰性桿菌：一大群不發(fā)酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厭氧、無芽胞的革蘭陰性桿菌一、假單胞菌屬銅綠假單胞菌所致疾病：條件致病菌；醫(yī)院感染的重要病原菌；大面積燒傷創(chuàng)面感染的重要病原菌生物學特性：革蘭陰性，長短不一，單鞭毛，氧化酶陽性生長溫度：25～42℃分離培養(yǎng)與鑒定：1.血平板上毛玻璃樣，金屬光澤，生姜味2.可產(chǎn)生多種色素：熒光素與綠膿素血瓊脂平板：透明溶血環(huán)O/F試驗：氧化型第四節(jié)其他革蘭陰性苛氧菌一、嗜血桿菌屬流感嗜血桿菌所致疾?。涸l(fā)化膿性感染及繼發(fā)性感染，包括腦膜炎、鼻咽炎、關節(jié)炎、心包炎、鼻竇炎及中耳炎等生物學特性：革蘭陰性短小球桿菌分離培養(yǎng)：需要X、V因子；營養(yǎng)要求高，血瓊脂平板培養(yǎng)基，巧克力瓊脂培養(yǎng)基菌落特征：巧克力瓊脂培養(yǎng)基,小、無色透明菌落菌菌落較大，遠離葡萄球菌菌落的流感嗜血桿菌菌落較小四、布魯菌屬傳染源：病獸，以羊、牛、豬多見傳播途徑：易感人群：發(fā)病以青壯年為主，從事獸醫(yī)、皮毛加工、屠宰的工人發(fā)病率較高臨床表現(xiàn)：長期發(fā)熱、多汗；關節(jié)疼痛及全身乏力、疼痛微生物特性：革蘭陰性短小球桿菌培養(yǎng)特性：需氧菌，營養(yǎng)要求較高；生長緩慢（5~7天）第十二章革蘭陽性需氧和兼性厭氧桿菌革蘭陽性無芽胞桿菌白喉棒狀桿菌形態(tài)與染色:G+細長微彎的桿菌；一端或兩端膨大呈棒狀；常排列呈V、L、X等文字形；異染顆?！螒B(tài)上的鑒別特征培養(yǎng)特性：營養(yǎng)要求高，呂氏血清斜面或雞蛋斜面亞碲酸鉀BAP：選擇鑒別培養(yǎng)基，黑色菌落——鑒別依據(jù)1Elek平板毒力測定；SPA電泳2.體內(nèi)法：用豚鼠作毒素-抗毒素中和試驗第二節(jié)革蘭陽性需氧芽胞桿菌屬炭疽芽胞桿菌臨床意義：炭疽是人獸共患的急性傳染病，皮膚炭疽、腸炭疽、肺炭疽等炭疽毒素：保護性抗原、致死因子、水腫因子傳染源：患病食草動物及其制品或被污染物傳播途徑：1.接觸——皮膚炭疽食用——腸炭疽吸入——肺炭疽形態(tài)染色:致病菌中最大的G+桿菌；兩端平切、竹節(jié)狀；有毒株可有明顯莢膜芽胞：1.橢圓形，小于菌體，位于菌體中央氣中，都易形成芽胞培養(yǎng)特性：1.普通培養(yǎng)基上卷發(fā)狀菌落BAP：12～15h18～24h肉湯：絮狀沉淀生長明膠：37℃18～24h倒松樹狀。NaHCOBAP3無毒株—粗糙型菌落抗原構造：1.發(fā)生環(huán)狀沉淀反應Ascoli熱沉淀反應，特異性不高，可作追溯性診斷2.莢膜多肽抗原：莢膜腫脹試驗，對本菌鑒定有意義標本的采集與處理:集少量血液串珠試驗:炭疽芽胞桿菌在每毫升含有0.05-0.5U青霉素的培養(yǎng)基中，可發(fā)生形態(tài)變異，形成大而均勻的圓球狀并相連如串珠狀第十三章分枝桿菌屬分枝桿菌是一類細長略帶彎曲的桿菌，含有分枝菌酸，有分枝生長的趨勢而得名。具有抗酸性，故又稱抗酸桿菌。結核分枝桿菌所致疾病：通過呼吸道、消化道和損傷的皮膚等多途徑感染機體，引起多種臟器的結核病，其中以肺結核為多見致病物質(zhì)：莢膜、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)等菌體成分免疫性：有菌免疫或稱傳染性免疫，細胞免疫在抗感染免疫中起重要作用微生物特性：1.分枝狀，略帶彎曲的抗酸桿菌，抗酸性染色法染色后結核分枝桿菌呈紅色，背景呈藍色

專性需氧，營養(yǎng)要求較高，最適生長溫度為35℃，生長緩慢,25w~肉眼可見的如菜花樣粗糙型菌落。結核菌素試驗：(PPD淋巴細胞特異性結合，形成遲發(fā)型超敏反應性炎癥傳染、免疫、超敏反應共存第十四章厭氧性細菌破傷風梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌的形態(tài)特征、培養(yǎng)特性；厭氧性細菌的檢驗鑒定要點和報告方式。第十五章螺旋體、支原體、衣原體、立克次體第一節(jié)螺旋體螺旋體：是一種細長、柔軟、螺旋狀、運動活潑的原核細胞型微生物鉤端螺旋體所致疾?。恒^端螺旋體病傳染源與儲存宿主:自然疫源性疾病，鼠類和豬為主要儲存宿主傳播途徑：間接接觸傳播（接觸被含菌尿液污染的水源生物學特性：1.螺旋一端或兩端呈鉤狀有兩根周漿鞭毛，運動活潑G-，但不易著色，鍍銀染色成棕褐色梅毒螺旋體所致疾?。好范鞠忍煨裕耗阁w通過胎盤傳給胎兒獲得性：性傳播獲得性梅毒臨床分期：分為三期Ⅰ期（初期）328~Ⅲ期（晚期）2腫；病損內(nèi)螺旋體少但破壞性大生物學特性：G-，但不易著色，鍍銀染色呈棕褐色；對青霉素、四環(huán)素、紅霉素等抗生素敏感微生物