低危骨髓增生異常綜合征免疫表型分析

低危骨髓增生異常綜合征免疫表型分析孫富英;金潔萍;毛淑丹【摘要】目的探討低危骨髓增生異常綜合征(MDS)分型診斷及鑒別診斷的臨床意義.方法選用多種單克隆抗體，應用直接免疫熒光流式細胞術CD45/SSC設門提取骨髓的原始細胞對27例低危MDS患者進行免疫表型檢測，并與對照組及再生障礙性貧血(AA)組進行比較分析結果與對照組、AA組比較，低危MDS患者CD34+表達明顯增高(P均v0.05),各系免疫表型多重表達異常發(fā)生率增高結論MDS骨髓原始細胞免疫異常表型檢測有利于MDS的診斷和鑒別診斷；流式細胞術可檢測到MDS免疫表型的微小變化，比細胞遺傳學檢測更敏感.％ObjectiveToinvestigatetheclinicalsignificanceoftheclassification,diagnosisanddifferentialdiagnosisofmyelodysplasticsyndromes(MDS).MethodsApanelofmonoclonalantibodiesandtheflowcytometryusingCD45/SCCgatingstrategieswereemployedfortheimmunophenotypingonthebonemarrownucleatedcellsfrom27patientswithlow-riskMDS,controlgroupandpatientswithAAascomparisons.ResultsTheCD34+expressionsoflow-riskMDSpatientswereincreased.Immunophenotypeofmultipleprotocell,maturedgranulocyte,monocyteexpressedabnormallyandweremultiplerepresentation.ConclusionsDetectingabnormalbonemarrowmyeloblastsimmunophenotypeofMDSpatients,isconducivetoMDSdiagnosis,differentialdiagnosis;flowcytometryisabletodetectsmallchanges,moresensitivethancytogenetics.【期刊名稱】《山東醫(yī)藥》【年(卷)，期】2011(051)033【總頁數(shù)】3頁(P4-6)【關鍵詞】骨髓增生異常綜合征;免疫表型分型;流式細胞術【作者】孫富英;金潔萍;毛淑丹【作者單位】遼寧醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，遼寧錦州121001;遼寧醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院遼寧錦州121001;遼寧醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，遼寧錦州121001【正文語種】中文【中圖分類】R551.3骨髓增生異常綜合征(MDS)是造血干/祖細胞(CD34+)的惡性克隆性疾病，表現(xiàn)為骨髓原始細胞形態(tài)和數(shù)目異常、無效造血及不同程度的夕卜周血細胞數(shù)目減少，并高風險地向急性白血病轉化［1］。國內外研究證實，免疫表型分析有助于MDS的診斷及預后評估，但低危MDS患者免疫表型分析報道較少。本研究對低危MDS患者骨髓免疫表型分型診斷及鑒別診斷的臨床意義進行了探討。1資料與方法1.1臨床資料2008年3月~2010年12月我院MDS住院患者27例(MDS組)，均依據(jù)2008年WHO標準分型確診［2］。男17例、女10例，年齡32~86歲、中位年齡58歲;其中RA型4例，RAS型4例，RCMD型16例，RAEB-1型3例。27例均為低危(IPSS評分0~1.0分)MDS患者，其中骨髓增生低下6例。另選擇再生障礙性貧血心冷患者12例(AA組)，男7例、女5例，年齡25~76歲、中位年齡41歲;對照組18例，男8例、女10例，年齡26~79歲、中位年齡47歲;其中，夕卜周血單純紅細胞減少輕度貧血的缺鐵性貧血11例，夕隔截肢7例。三組性別、年齡差異無統(tǒng)計學意義。1.2方法檢測標本均經過對方知情同意后采集，然后行骨髓涂片、流式細胞術分析及常規(guī)染色體核型分析(染色體核型分析對照組除夕)。流式細胞儀為美國BeckmanCoulter公司FC500MPI型，發(fā)射熒光采用488nm激光激發(fā)。采取研究對象的骨髓液2~3mlEDTA抗凝，對經溶血素裂解紅細胞骨髓中所有有核細胞進行分析。調整細胞數(shù)至(0.5~1.0)x106/ml,分別加入抗體HLA-DR-FITC/CD33-PE/CD34-ECD/CD117-PC5/CD45-PC7、CD10-FITC/CD56-PE/CD34-ECD/CD19-PC5/CD45-PC7、CD5-FITC/CD7-PE/CD34-ECD/CD2-PC5/CD45-PC7、HLADR-FITC/CD11b-PE/CD34-ECD/CD15-PC5/CD45-PC7、CD11b-FITC/CD13-PE/CD16-ECD/CD15-PC5/CD45-PC7及陰性對照，取某一抗原表達>20%為陽性。單克隆抗體為BeckmanCoulter產品。1.3統(tǒng)計學方法采用SPSS16.0軟件，數(shù)據(jù)以表示，組間比較采用方差分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2結果2.1MDS及各亞型、對照組、AA組之間CD34+測定結果見表1。表1MDS組及各亞型、對照組、AA組CD34+測定結果(%,)注:與對照組、AA組比較，*P<0.05組別nCD34+MDS組273.50±0.50*RA/RAS82.40±0.12RCMD164.50±0.30*RAEB-135.90±0.70*對照組182.10±0.17AA組120.13±0.022.2低危MDS免疫表型分析27例MDS患者原始細胞、成熟粒細胞、單核細胞經檢測可見各系細胞免疫表型異常表達，也有多重異常表達表現(xiàn)。①原始細胞免疫表型異常表現(xiàn)為:CD34+表達比例相對或絕對增加，表達CD11b或CD15、CD13、CD33，或HLA-DR表達缺失;異常表達淋巴系抗原CD7、CD56。②成熟粒細胞免疫表型異常表現(xiàn)為:SSC減低（細胞內顆粒減少），粒系抗原之間表達關系異常以CD13/CD16、CD11b/CD15明顯，CD10、CD11b、CD13、CD15、CD16抗原不同步表達，CD13或CD33表達的缺失，出現(xiàn)異常CD56的表達，CD45表達減低。③單核細胞系表達異常表現(xiàn)為:單核細胞比例減少，CD11b、CD13、CD33、HLA-DR表達關系異常，CD16、CD33表達缺失，異常表達CD56。27例MDS患者免疫表型特征見表2。表227例MDS患者免疫表型特征（例）類型nCD34+成熟粒細胞系異常單核細胞系異常一系多重異常兩系及以上異常RA/RAS846516RCMD161313121015RAEB-13322333討論目前，細胞形態(tài)和細胞遺傳學改變仍是MDS診斷的重要依據(jù)。但是MDS病態(tài)造血類型繁多，且缺乏特異性。染色體核型異常在MDS患者的檢出率為40%~70%［3］，在幼稚細胞數(shù)不增高的MDS患者中伴有異常核型尚不足32%［4］，造成低危MDS患者診斷困難。為此，2006年維也納國際工作會議將流式細胞術作為MDS的輔助診斷標準［5］。本研究對27例低危MDS患者免疫表型分析結果顯示，幾乎所有MDS患者存在髓細胞分化抗原的異常表達;單一細胞群的多重表達在RCMD、RAEB-1較RA/RAS更明顯;粒細胞系或單核細胞系表達異?；颊哒?2.5%，結果與vandeLoosdrecht等［6］報道的92%病例存在粒細胞或單核細胞表達異常一致。MDS患者出現(xiàn)單一細胞免疫表型異常不具有特征性，因為單一細胞免疫表型異常也可見于營養(yǎng)不良性貧血等非MDS患者［7］。近年來，研究較多的流式積分對MDS預后的影響資料［6,8］顯示，一系的多個異常表達或多系表達異常均確定為主要免疫表型異常，不同抗體組合對MDS診斷更具意義。27例低危MDS患者單—細胞群多重表達率為51.8%，而22個細胞亞群的表達率為88.9%。此顯示流式細胞術比MDS遺傳學檢測陽性率33.3%(27例MDS患者9例染色體核型異常)更敏感。隨著MDS進展，CD34+細胞表達呈現(xiàn)增高趨勢，流式細胞術檢測MDS患者CD34+表達與骨髓細胞形態(tài)原始細胞數(shù)呈正相關［9］。低危組MDS患者CD34+表達在各亞型(RA/RAS、RCMD、RAEB-1)逐漸增高，此與文獻［10］報道一致。盡管RA/RAS類型CD34+細胞與對照組差異無統(tǒng)計學意義，但低危MDS各類型與AA患者CD34+細胞表達不同仍具有鑒別診斷意義。本文24例RA/RAS、RCMD中，13例CD34+表達百分率高于正常對照組，但形態(tài)學原始細胞分類均在正常范圍，提示低危組MDS早期已有MDS惡性克隆的存在。成熟粒細胞免疫表型表達的減少揭示了細胞分化障礙、凋亡增加導致外周血細胞一系或多系減少，反饋刺激骨髓異常造血干細胞增加，形成骨髓過度增生伴病態(tài)造血的低危組MDS發(fā)病機制。本結果還表明，MDS患者CD34+異常表達較形態(tài)改變更早。同時在低危MDS患者CD34+細胞有少部分表達CD7，其臨床意義有待進一步探討。本研究發(fā)現(xiàn)，RA/RAS亞型見到粒細胞SSC的明顯下降，但是根據(jù)WHO分型標準RA/RAS型MDS病態(tài)造血細胞小于粒細胞系細胞的10%，因此流式細胞術可檢測到較形態(tài)學改變更早的微小變化。Lorand-Metze等［11］探討MDS與外周血細胞減少的非克隆性疾病粒細胞SSC改變，結果發(fā)現(xiàn)MDS患者早幼粒細胞的SSC是減低的，并與外周血白細胞計數(shù)相關。通過CD34+細胞、早幼粒細胞和晚幼粒細胞的SSC分析能夠鑒別87%的病例是否為克隆性。總之，應用流式細胞術進行MDS的免疫表型檢測，較染色體核型分析有高度的敏感性，亦較細胞形態(tài)學檢測有獨特的優(yōu)勢。參考文獻：【相關文獻】[1]肖冰，李建勇.骨髓增生異常綜合癥免疫表型特征及其臨床意義[J].白血病?淋巴瘤，2006,15(2):154-155.[2]SwerdlowSH,CampoE,HarrisNL,etal.WHOclassificationoftumoursofhaematopoieticandlymphoidtissues[M].Lyon:IARCPress,2008:87-103.[3]Steter-StrvensonM,ArthurDC,JabbourN,etal.Diagnosticutilityofflowcytometricimmunophenotypinginmyelodysplasticsyndromes[J].Blood,2001,98(4):979-987.[4]MohamedaliA,GakenJ,TwineNA,etal.Prevalenceandprognosticsignificanceofallelicimbalancebysingle-nucleotidepolymorphismanalysisinlow-riskmyelodysplasticsyndromes[J].Blood,2007,110(9):3365-3373.[5]VanletP,HornyHP,BennetJM,etal.Definitionsandstandardsinthediagnosisandtreatmentofmyelodysplasticsyndromes:Consensusstatementsa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