N-乙酰-β-D -葡萄糖苷酶（NAG）活性檢測試劑盒說明書-微量法UPLC-MS-4213

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網址：本產品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質檢測技術有限公司第第頁N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（NAG）活性檢測試劑盒說明書貨號:UPLC-MS-4213規(guī)格:100T/48S產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系工作人員。

微量法試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體60mL×1瓶4℃保存試劑一液體10mL×1瓶4℃保存試劑二粉劑×1瓶-20℃保存試劑三液體20mL×1瓶4℃保存標準品液體1mL×1支4℃保存溶液的配制：1、試劑二：臨用前加入2mL蒸餾水溶解備用；可-20℃分裝保存，避免反復凍融，-20℃可保存2周；2、標準品：5μmol/mL對硝基苯酚溶液。臨用前用蒸餾水將標準品稀釋8倍得0.625μmol/mL的標準溶液。產品說明：N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（EC2，N-acetyl-β-D-glucosidase，NAG）廣泛分布于各種組織中，是一種細胞內溶體酶，測定NAG活性可用于腎小管間質性腎炎、尿路感染、糖尿病腎病綜合癥、高血壓腎病、腎移植后的排異反應和腎病綜合癥的早期診斷。NAG分解N-β-乙酰氨基葡萄糖苷生成對-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定400nm下吸光度的變化來計算NAG活性。注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。需自備的儀器和用品：可見分光光度計/酶標儀、天平、臺式離心機、微量玻璃比色皿/96孔板、可調式移液槍、研缽/勻漿器、EP管。操作步驟：一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）1（g）:提取液體積(mL)1：5~10的比例（0.1g1mL提取液進行冰浴勻漿。15000g，4℃10min，取上清置冰上待測。2104個：提取液體積（ml）500~1000:15001mL提取液（300w37s3min15000g4℃10min清置冰上待測。3、血清（漿）等液體：直接測定。二、測定步驟1、分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至400nm，蒸餾水調零。2、操作表(在1.5mL離心管中依次加入下列試劑)：試劑名稱（μL）測定管對照管標準管空白管試劑一60606060試劑二3037℃下預熱5min--蒸餾水-303040標準液--10-樣本1010--37℃反應30min試劑三2002002002002min200μL96400nmA測定管、A對照管、A標準管、AΔA測定=A測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A空白管。三、NAG活性計算1、按蛋白濃度計算活力單位定義：每mg蛋白在反應體系中每分鐘生成1nmol對硝基苯酚定義為一個酶活力單位。NAG(U/mgprot)=ΔA測定÷（ΔA標準÷C標）×1000×V樣÷（Cpr×V樣）÷T=20.83×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr2、按樣本質量計算活力單位定義：每g樣本在反應體系中每分鐘生成1nmol對硝基苯酚定義為一個酶活力單位。NAG(U/g質量ΔA測定÷（ΔA標準÷C標）×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×W)÷T=20.83×ΔA測定÷ΔA標準÷W3、按細胞數量計算活力單位定義：每104個細胞在反應體系中每分鐘生成1nmol對硝基苯酚定義為一個酶活力單位。NAG(U/104cell)=ΔA測定÷（ΔA標準÷C標）×1000×V樣÷（細胞數量×V樣÷V樣總）÷T=20.83×ΔA測定÷ΔA標準÷細胞數量4、按液體體積計算活力單位定義：每毫升液體在反應體系中每分鐘催化生成1nmol對硝基苯酚為一個酶活力單位。NAG(U/mL)=ΔA測定÷（ΔA標準÷C標）×1000×V樣÷V樣÷T=20.83×ΔA測定÷ΔA標準C標：標準溶液的濃度：0.625μmol/mL；V樣總：提取液體積，1mL；V樣：加入的樣本體積，0.01mL；Cpr：上清液蛋白濃度，mg