谷氨酸（Glu）含量檢測(cè)試劑盒說明書（WST 法）- 微量法UPLC-MS-6012

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！-上海液質(zhì)檢測(cè)技術(shù)有限公司第第頁谷氨酸（Glu）含量檢測(cè)試劑盒說明書（WST法）貨號(hào)：UPLC-MS-6012規(guī)格：100T/48S產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件試劑一液體85mL×1瓶2-8℃試劑二液體1.5mL×1支2-8℃試劑三粉劑×2瓶-20℃保存試劑四粉劑×2支-20℃保存試劑五液體4mL×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)液液體0.5mL×1支2-8℃保存溶液的配制：116mL試劑一，用不完的試劑-20℃4周，避免反復(fù)凍融；210.5mL試劑二，用不完的試劑-20℃23、標(biāo)準(zhǔn)液：10μmol/mL谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)品。

微量法產(chǎn)品說明：Glu20\h以及香料生產(chǎn)。4（α-NH+1-mPMSS-14反應(yīng)，產(chǎn)生水溶性formazan，計(jì)算谷氨酸含量。Glutamate+NAD+

GDH 2-Oxoglutrate+NH++NADH4NADH+WST-1 formazan（450nm）4注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。需自備的儀器和用品：分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、超聲破碎儀、冰、蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）5001mL波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（200w3s10s30次，10000g10min，取上清待測(cè)。組織：稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一，進(jìn)行冰浴勻漿，10000g，常溫離心10min，取上清待測(cè)。液體：直接測(cè)定。（若有渾濁則離心后取上清測(cè)定）二、測(cè)定步驟1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。2. 0.01950.010.005、0.0025μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表：序號(hào)稀釋前濃度（μmol/mL）（μL）蒸餾水體積（μL）（μmol/mL）110507500.62520.31252002000.312530.156252002000.1562540.078132002000.0781350.0392002000.03960.01952002000.019570.012002000.0180.0052002000.00590.31252002000.0025實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需40μL標(biāo)準(zhǔn)溶液。操作表：試劑（μL）測(cè)定管（A2）對(duì)照管（A1）標(biāo)準(zhǔn)管空白管標(biāo)準(zhǔn)品--40-蒸餾水40樣品4040--試劑一-170-170試劑三160-160-試劑四10-10-試劑五3030303037℃30min.200μL/96450nmΔA=A2-A1ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A（1-2次三、谷氨酸含量計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：（xL和吸光度（y標(biāo)準(zhǔn)A代入方程得到x（μmol/mL）。谷氨酸含量計(jì)算：按照蛋白濃度計(jì)算：谷氨酸含量（μmol/mgprot）=x×V樣本÷（Cpr×V樣本）=x÷Cpr按照樣本質(zhì)量計(jì)算：谷氨酸含量（μmol/g質(zhì)量）=x×V樣本÷（W÷V樣總×V樣本）=x÷W按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：谷氨酸含量（μmol/104cell）=x×V樣本÷（500÷V樣總×V樣本）=0.002x按照液體體積計(jì)算：谷氨酸含量（μmol/mL）=x×V樣本÷V樣本=xV樣總：加入提取液體積，1mL；V樣本：加入的樣本體積，0.04mL；Cpr：樣