過氧化氫（H2O2）含量檢測試劑盒說明書- 微量法UPLC-MS-4547

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微量法產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件試劑一100mL×1瓶（自備）4℃保存試劑二粉劑×1瓶4℃保存試劑三液體6mL×1瓶4℃保存試劑四液體30mL×1瓶4℃保存標準品液體1mL×1支4℃保存溶液的配制：1、試劑一：丙酮自備。2、試劑二：臨用前加入3mL濃鹽酸充分溶解備用，用不完的試劑4℃保存。3、標準品：1mmol/mLH2O2標準液。產(chǎn)品說明：H2O2SOD和XODCAT和PODH2O2不僅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互轉化的樞紐。一方面，H2O2可以直接或間接地氧化細胞內核酸，蛋白質等生物大分子，并使細胞膜遭受損害，從而加速細胞的衰老和解體；另一方面H2O2也是許多氧化應激反應中的關鍵調節(jié)因子。H2O2與硫酸鈦生成黃色的過氧化鈦復合物，在415nm有特征吸收。技術指標：最低檢出限：0.0027μmol/mL線性范圍：0.0195-3μmol/mL注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。需自備的儀器和用品：可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、丙酮、濃鹽酸、研缽/勻漿器和冰。操作步驟：一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）5001mL劑一，超聲波破碎細菌或細胞（20%3s10s30次；8000g4℃10in冰上待測。組織樣本的制備：稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一進行冰浴勻漿；8000g4℃離心10min，取上清，置冰上待測。血清（漿）100μL血清（漿）0.9mL4℃10min清，置冰上待測。二、測定步驟1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至415nm，蒸餾水調零。2、將試劑二、三和四37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。3、如果用96孔板將則用丙酮將1mmol/mL標準液稀釋為2μmol/mL的標準溶液，用微量玻璃比色皿則用丙酮將試劑名稱（μL）測定管標準管空白管樣本250標準溶液試劑名稱（μL）測定管標準管空白管樣本250標準溶液250試劑一250試劑二252525試劑三5050504000g，常溫離心10min，棄上清，留沉淀（可先用丙酮清洗3-5次來洗去植物色素）試劑四2502502505mn200μL轉移至微量玻璃比色皿或96孔板中測定415nm（1-2次即可）。計算?A測定=A測定管-A空白管，?A標準=A標準管-A空白管。三、H2O2含量計算A、按96孔板計算1、按照細菌、細胞數(shù)量計算：H2O2含量（μmol/104cell）=?A測定÷(?A標準÷C標液)×V樣本÷(500×V樣本÷V提取)=0.004×?A測定÷?A標準2、按組織質量計算：H2O2含量（μmol/g質量）=?A測定÷（?A標準÷C標液）×V樣本÷(V樣本÷V提取×W)=2×?A測定÷?A標準÷W3、按照蛋白濃度計算：H2O2含量（μmol/mgprot）=?A測定÷（?A標準÷C標液）×V樣本÷（Cpr×V樣本）=2×?A測定÷?A標準÷Cpr4、按血清（漿）體積計算：H2O2含量(μmol/mL)=?A測定÷（?A標準÷C標液）×10=20×?A測定÷?A標準[0.1mL血清（漿）+0.9mL試劑一]÷0.1mL血清（漿）=10。B、按微量玻璃比色皿計算將公式中的C標液-2μmol/mL改為C標液-1μmol/mL進行計算即可。注意事項：1、由于試劑一