肌酸含量檢測試劑盒（酶法）說明書- 可見分光光度法UPLC-MS-6015

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質檢測技術有限公司第第頁肌酸含量檢測試劑盒（酶法）說明書貨號：UPLC-MS-6015規(guī)格：50T/24S

可見分光光度法產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液一液體30mL×1瓶4℃保存提取液二液體5mL×1瓶4℃保存試劑一粉劑×2支-20℃保存試劑二粉劑×2支-20℃保存試劑三粉劑×2支-20℃保存試劑四A液液體15mL×1瓶4℃保存試劑四B液液體15mL×1瓶4℃保存標準品粉劑×1支4℃保存溶液的配制：試劑一：臨用前每支加入1mL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃保存。試劑二：臨用前每支加入0.2mL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃保存。0.5mL蒸餾水（100T/48S），裝后-20℃保存。試劑四：臨用前根據(jù)試驗所需用量，按照試劑四A液：試劑四B液=1:1，充分混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。mg1mL1mg/mL20μL和80μL蒸餾水混合配制成200μg/mL作為標準溶液待測。現(xiàn)用現(xiàn)配。產品說明：肌酸(Creatine)是一種含氮化合物，自然存在于脊椎動物體內，能夠輔助為肌肉和神經細胞提供能量。肌酸可由精氨酸（arginine)、甘氨酸（glycine）及甲硫氨酸（methionine）三種氨基酸合成，可由人體自行合成，也可以95%的肌酸存在于骨骼肌中，主要存在形式為磷酸肌酸。肌酸作為一種補充劑主要通過增加肌肉質量，增強運動表現(xiàn)能力。肌酸也被作為神經肌肉疾病的一種治療藥被廣泛研究，它可能有助于保護神經和改善細胞生物功能狀態(tài)。4-氨基505nm有特征吸收峰。注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。需自備的儀器和用品：可見分光光度計、低溫離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、超聲破碎儀。操作步驟：一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）1（104個）:提取液一體積（mL）500~1000:1的比例（1mL提取液一）（300395ming10min0.8mL0.15mL提取液二，4℃，12000g10min后取上清待測。2、組織樣本的制備：按照質量（g）:提取液一體積(mL)為1:5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液一4℃12000g10mn0.8mL0.15mL4，12000g離心10min后取上清待測。3、血清（漿）：取100μL血清（漿）加入1mL提取液一，4℃，12000g離心10min，取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液二，4℃，12000g離心10min后取上清待測。二、測定步驟1、分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至505nm，蒸餾水調零。2、按下表步驟加樣：試劑名稱（μL）測定管對照管空白管標準管樣本5050--蒸餾水-5050-標準溶液50試劑一50-5050充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）條件下，反應10min。試劑二5555試劑三5555試劑四400400400400充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）條件下，顯色30min。蒸餾水500500500500505nmAAAAΔA測定=A測定-A標準=A標準-A空白。注：空白管只需做1-2次。三、肌酸含量計算1、計算公式按照蛋白濃度計算肌酸含量（μg/mgprot）=C標×ΔA測÷ΔA標×V樣÷（V樣×Cpr）×0.879=175.8×ΔA測÷ΔA標÷Cpr按照樣本質量計算肌酸含量（μg/g質量）=C標×ΔA測÷ΔA標×（V上清+V提取液二）÷（W×V上清÷V提取液一）×0.879=208.76×ΔA測÷ΔA標÷W按照細菌或細胞數(shù)量計算肌酸含量(μg/104cell)=C標×ΔA測÷ΔA標×(V上清+V提取液二)÷(細胞數(shù)量×V上清÷V提取液一)×0.879=208.76×ΔA測÷ΔA標÷細胞數(shù)量按照血清（漿）體積計算肌酸含量(μg/mL)=C標×ΔA測÷ΔA標×(V上清+V提取液二)÷[V液體×V上清÷(V提取液一+V液體)]×0.879=2296.39×ΔA測÷ΔA標C標：標準管濃度，200μg/mL；V樣：加入樣本體積，50μL=0.05mL；V上清：提取時上清液體積，0.810.15樣本蛋白濃度，mg/mL104計；V液體：液體樣本體積，0.1mL；0.879：換算系數(shù)，一水肌酸相149.1